一种促进肿瘤细胞生长的方法技术

本发明专利技术涉及一种促进肿瘤细胞生长的方法，所述方法包括如下步骤：将肿瘤细胞与CD45+CD215+细胞和IL15细胞因子共培养。本发明专利技术通过将CD45+CD215+细胞和IL15细胞因子与肿瘤细胞共培养，意外发现，肿瘤细胞显著增长，相比于原来培养的效果，肿瘤细胞的增长数量高出了一倍；本发明专利技术的方法可用于肿瘤细胞的培养，实验方法简单易行，为肿瘤细胞用于其他研究奠定了基础。

Method for promoting growth of tumor cells

The invention relates to a method for promoting the growth of tumor cells. The method comprises the following steps: CO culturing tumor cells with CD45+CD215+ cells and IL15 cytokines. The CD45+CD215+ and IL15 cytokines co cultured with tumor cells, the accident found that the tumor cells increased significantly, compared to the original culture effect, the number of tumor cells growth more than doubled; the method of the invention can be used for the cultivation of tumor cells, the experimental method is simple and feasible, laid the foundation for the other study as for the tumor cells.

【技术实现步骤摘要】
一种促进肿瘤细胞生长的方法
本专利技术涉及细胞培养领域，尤其涉及一种促进肿瘤细胞生长的方法。
技术介绍
IL15为白介素15，通常情况下用于NK细胞，树突状细胞和CD8细胞的先天免疫力和后天获得应性免疫力的激活过程，作为免疫调节剂可以增强体内免疫细胞(如：T细胞和NK细胞)的免疫活性。IL15可以结合IL15受体，比如：IL15受体α又名CD215，IL15受体β又名CD122和IL2受体γ又名CD132，阳性细胞。IL15的作用方式通过结合亲和力最高的CD215分子形成一个IL15-CD215复合物，随后这个复合物会把IL15呈递给CD122或者CD132阳性的免疫细胞(如：T细胞和NK细胞)进而激活CD122或者CD132阳性的免疫细胞发挥免疫监控和调节作用。ChenowethMJ等在《JournalofImmunology:baltimore,Md:》，2012，188(9):4149中发表了“IL-15CanSignalviaIL-15Ra,JNK,andNF-kBToDriveRANTESProductionbyMyeloidCells”，其公开报道过IL15可以刺激CD45+CD215+细胞分泌RANTES，但是该研究未能联系IL15通过作用于CD45+CD215+细胞促进肿瘤细胞生长。PMarra等在《CancerResearch》，2014Sep1；74(17):4908-21.doi:10.1158/0008-5472.CAN-14-0637发表了“IL15RADrivesAntagonisticMechanismsofCancerDevelopmentandImmuneControlinLymphocyte-EnrichedTriple-NegativeBreastCancers”，其中公开报道IL15可以激活CD215阳性细胞同时抑制CD215阳性凋亡最终促进CD215阳性细胞的生长，但是该研究未能联系IL15通过作用于CD215阳性细胞促进肿瘤细胞生长。HKuniyasu等在《ClinicalCancerResearch》，2003，9(13):4802-10中发表了“ProductionofInterleukin15byHumanColonCancerCellsIsAssociatedwithInductionofMucosalHyperplasia,Angiogenesis,andMetastasis”，其中公开报道了表达IL15的肿瘤细胞能促进血管生成最终增强肿瘤细胞的转移，但是该研究未能联系IL15通过作用于CD215阳性细胞促进肿瘤细胞生长。MoutihRafei等在《Blood》，2007109:2234-2242中发表了“AGMCSFandIL-15fusokineleadstoparadoxicalimmunosuppressioninvivoviaasymmetricalJAK/STATsignalingthroughtheIL-15receptorcomplex”，公开了将IL15和GM-CSF融合形成一个新的复合物，这个复合物能显著促进肿瘤细胞生长，但是该研究未能联系IL15通过作用于CD215阳性细胞促进肿瘤细胞生长。
技术实现思路
针对现有技术的不足，本专利技术提供一种促进肿瘤细胞生长的方法，通过IL15细胞因子促进CD45+CD215+细胞分泌促肿瘤细胞生长细胞因子，从而促进肿瘤细胞的生长。为达此目的，本专利技术采用以下技术方案：一方面，本专利技术提供一种促进肿瘤细胞生长的方法，包括如下步骤：将肿瘤细胞与CD45+CD215+细胞和IL15细胞因子共培养。本专利技术中IL15通过刺激CD45+CD215+细胞分泌细胞因子IGF1，而IGF1作用于肿瘤细胞，最终促进肿瘤细胞生长。因此，通过将CD45+CD215+细胞和IL15细胞因子与肿瘤细胞共培养，能够明显促进肿瘤细胞的生长，根据本专利技术，所述肿瘤细胞为肺癌细胞，具体为A549肿瘤细胞。根据本专利技术，所述CD45+CD215+细胞来自于小鼠体内，优选为第三代免疫缺陷小鼠NOD-scid-IL2Rγ-/-，本专利技术中所述第三代免疫缺陷小鼠NOD-scid-IL2Rγ-/-来自于专利201310089275.2。本专利技术中，所述CD45+CD215+细胞的制备方法是常规的流式细胞仪分选方法，具体步骤如下：1)脱颈处死第三代免疫缺陷小鼠NOD-scid-IL2Rγ-/-，随后浸泡在75％的酒精里面消毒杀菌15分钟；2)在无菌环境取出小鼠的脾脏后在75％的酒精里浸泡消毒杀菌5分钟；3)取出脾脏在无菌的磷酸盐缓冲液(PBS)里洗去多余的75％酒精；4)将脾脏置于100目的筛网，在3-5mL的PBS中研磨，制备成单细胞悬液；5)把脾脏细胞转移到离心管中，300g离心5分钟；6)弃上清加3-5mL的红细胞裂解液(eBioscience)，室温裂解5分钟；7)加5mLPBS中和红细胞裂解液，300g离心5分钟；8)弃上清，根据说明书孵育CD215-PE(eBioscience)和CD45-APC抗体(eBioscience)30分钟，再用10mLPBS洗去多余的抗体；9)在分选型流式细胞仪(BeckmanCoulter)里分选出CD45+CD215+细胞,分选出来的细胞用培养基重悬作为备用样本细胞。根据本专利技术，经过不同CD45+CD215+细胞与肿瘤细胞在含有IL15培养基共培养的结果，所述CD45+CD215+细胞与所述肿瘤细胞的比例为(150-460):1，例如可以是150:1、155:1、160:1、165:1、170:1、175:1、180:1、185:1、190:1、195:1、200:1、205:1、210:1、220:1、230:1、240:1、250:1、260:1、270:1、280:1、290:1、300:1、310:1、320:1、330:1、340:1、350:1、360:1、370:1、380:1、390:1或400:1，优选为(180-350):1，进一步优选为300:1。根据本专利技术，所述CD45+CD215+细胞的接种密度为(1-5)×104/mL，例如可以是1×104/mL、1.2×104/mL、1.5×104/mL、2×104/mL、2.5×104/mL、3×104/mL、3.5×104/mL、4×104/mL、4.5×104/mL或5×104/mL，优选为(1-3)×104/mL，进一步优选为2×104/mL。根据本专利技术，所述IL15细胞因子的接种密度为50-600ng/mL，例如可以是50ng/mL、60ng/mL、70ng/mL、80ng/mL、90ng/mL、100ng/mL、120ng/mL、150ng/mL、180ng/mL、200ng/mL、210ng/mL、230ng/mL、250ng/mL、260ng/mL、280ng/mL、300ng/mL、350ng/mL、380ng/mL、400ng/mL、420ng/mL、450ng/mL、480ng/mL、500ng/mL、520ng/mL、550ng/mL、580ng/mL或600ng/mL，优选为100-500ng/mL。根据本专利技术，本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种促进肿瘤细胞生长的方法，其特征在于，包括如下步骤：将肿瘤细胞与CD45+CD215+细胞和IL15细胞因子共培养。

【技术特征摘要】
1.一种促进肿瘤细胞生长的方法，其特征在于，包括如下步骤：将肿瘤细胞与CD45+CD215+细胞和IL15细胞因子共培养。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述肿瘤细胞为肺癌细胞；优选地，所述CD45+CD215+细胞来自于小鼠体内，优选为第三代免疫缺陷小鼠NOD-scid-IL2Rγ-/-。3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述CD45+CD215+细胞与所述肿瘤细胞的比例为(150-460):1，优选为(180-350):1，进一步优选为300:1。4.根据权利要求1-3中任一项所述的方法，其特征在于，所述CD45+CD215+细胞的接种密度为(1-5)×104/mL，优选为(1-3)×104/mL，进一步优选为2×104/mL。5.根据权利要求1-4中任一项所述的方法，其特征在于，所述IL15细胞因子的接种密度为50-600ng/mL，优选为100-500ng/mL。6.根据权利要求1-5中任一项所述的方法，其特征在于，所述共培养的培养基包括1640培养基、胎牛血清、青霉素/链霉素双抗和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子；优选地，所述共培养的培养基为1640培养基、体积比为10％胎牛血清、体积比为1％青霉素/链霉素双抗和20ng/mL粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子。7.根据权利要求...

【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：广东昭泰体内生物医药科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44