鉴定Pirangoclytus triangularis的特异性引物和方法及应用技术

本发明专利技术提供了一种鉴定Pirangoclytus triangularis的特异性引物和方法及应用，涉及物种鉴定的技术领域，本发明专利技术提供的用于鉴定Pirangoclytus triangularis的特异性引物，特异性强；本发明专利技术提供的Pirangoclytus triangularis的鉴定方法，通过测定和分析Pirangoclytus triangularis及其他虎天牛属相关物种的线粒体COI基因序列片段，构建生物分子系统树，推演物种间的亲缘关系，进而获得其科学的分类鉴定依据，省时省力，准确性高，重复率高，且经济快速。

【技术实现步骤摘要】
鉴定Pirangoclytustriangularis的特异性引物和方法及应用
本专利技术涉及物种鉴定
，尤其是涉及一种鉴定Pirangoclytustriangularis的特异性引物和方法及应用。
技术介绍
Pirangoclytustriangularis，属鞘翅目(Coleoptera)，天牛科(Cerambycidae)，虎天牛属(Xylotrechus)。Pirangoclytustriangularis是在1841年被Castelnau和Gory首次命名为Clytustriangularis，同时，Pirangoclytustriangularis也曾在1862年被Chevrolat命名为Mecometopusamabilis，也曾在1860年被Thomson并命名为Mecometopusrhinotragoides，还在1862年被Chevrolat命名为Mecometopusmaronensis或Mecometopusfunereus。目前，Pirangoclytustriangularis的物种鉴定主要依靠形态学特征，虎天牛属天牛外观较为相似，加之采用形态特征鉴定对鉴定者的专业知识和天牛样本完整性均要求较高，鉴定过程经常受主观因素的干扰，不仅耗时耗力，而且准确度和重复性都不高。生物分子树也称系统进化树(phylogenetictree)，它是用类似树状分支的图来表示各种(类)生物之间的亲缘关系，通过对生物序列的研究来推测物种的进化历史。主要是通过DNA序列、蛋白质序列、蛋白质结构等来构建系统发育树，或者通过蛋白质结构比较包括刚体结构叠合和多结构特征比较等方法建立结构进化树，所得结果科学可靠。其中，线粒体细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(COI)基因由于具有较高的进化速率，已成为区分物种和研究物种进化关系的一种理想基因。目前，昆虫遗传研究过程中，扩增昆虫线粒体COI基因一般是采用已报道的通用引物，但由于其通用性较强，特异性较弱，在实际研究过程中，扩增昆虫COI基因的同时，也往往能扩增出昆虫体表及体内杂菌的COI基因片段。这将导致某些昆虫，如对虎天牛属昆虫，尤其是Pirangoclytustriangularis的研究的作用不理想。目前国内外尚未有专门针对Pirangoclytustriangularis线粒体COI基因的特异性引物的相关报道，也未见应用生物分子系统树对Pirangoclytustriangularis进行鉴定的相关报道。因此，开发一种省时省力，准确性高，重复率高，且经济快速的Pirangoclytustriangularis的鉴定方法尤为重要。有鉴于此，特提出本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的在于提供一种用于鉴定Pirangoclytustriangularis的特异性引物，以克服现有技术中存在的通用引物特异性不高的技术问题。本专利技术的第二个目的在于提供一种用于鉴定Pirangoclytustriangularis的特异性引物在Pirangoclytustriangularis线粒体COI基因序列扩增中的应用。本专利技术的第三个目的在于提供一种Pirangoclytustriangularis的鉴定方法，省时省力，准确性高，重复率高，且经济快速。本专利技术的第四个目的在于提供一种Pirangoclytustriangularis的鉴定方法在鉴定Pirangoclytustriangularis物种中的应用。本专利技术提供的一种鉴定Pirangoclytustriangularis的特异性引物，所述特异性引物的上下游核苷酸序列分别为：COI－F：5＇－ATCTTGTATTTGGTGCCTGAG－3＇(SEQIDNO.1)；COI－R：5＇－AGTCGGAGTACCGTCGTG－3＇(SEQIDNO.2)。另外，本专利技术还提供了上述特异性引物在Pirangoclytustriangularis线粒体COI基因序列扩增中的应用。另外，本专利技术还提供了一种Pirangoclytustriangularis的鉴定方法，以Pirangoclytustriangularis样本为基础构建标准流生物分子系统树，以待测样本为基础构建检测流生物分子系统树，分析和比较所述标准流生物分子系统树与所述检测流生物分子系统树，鉴定所述待测样本是否为Pirangoclytustriangularis。进一步地，所述构建标准流生物分子系统树和构建检测流生物分子系统树的方法为NJ法。进一步地，所述NJ法构建标准流生物分子系统树的方法为：以Pirangoclytustriangularis总DNA为模板，利用权利要求1所述的特异性引物进行PCR，并对PCR产物进行测序，获得Pirangoclytustriangularis的线粒体COI核苷酸序列片段，基于所述Pirangoclytustriangularis的线粒体COI基因核苷酸序列片段和相关近缘物种的线粒体COI基因核苷酸序列片段，利用计算机软件，构建标准流生物系统树。进一步地，所述NJ法构建检测流生物分子系统树的方法为：以待测样本总DNA为模板，利用权利要求1所述的特异性引物进行PCR，并对PCR产物进行测序，获得待测样本的线粒体COI核苷酸序列片段，基于所述待测样本的线粒体COI基因核苷酸序列片段和相关近缘物种的线粒体COI基因核苷酸序列片段，利用计算机软件，构建检测流生物系统树。进一步地，所述分析和比较所述标准流生物分子系统树与所述检测流生物分子系统树为：若所述待测样本与所述Pirangoclytustriangularis形成一个单系群，则判断为Pirangoclytustriangularis；若所述待测样本与所述相关近缘物种形成一个单系群，则判断为相关近缘物种。进一步地，所述Pirangoclytustriangularis的线粒体COI核苷酸序列片段的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示。进一步地，所述相关近缘物种为Pirangoclytusamaryllis，Pirangoclytuschaparensis，Pirangoclytusflavius，Pirangoclytusfraternus，Pirangoclytusgranulipennis，Pirangoclytusinsignis，Pirangoclytusjauffreti，Pirangoclytuslaetus，Pirangoclytuslatecinctus，Pirangoclytusmendosus，Pirangoclytusmniszechii，Pirangoclytusnubicollis，Pirangoclytusplacens，Pirangoclytuspurus，Pirangoclytusrubefactus，Pirangoclytussulphurosus，Pirangoclytustriangularis和Pirangoclytusycoca。另外，本专利技术还提供了上述的Pirangoclytustriangularis的鉴定方法在鉴定Pirangoclytustriangularis物种中的应用。本专利技术提供的用于鉴定Pirangoclytustriangulari本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鉴定Pirangoclytus triangularis的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物的上下游核苷酸序列分别为：COI－F：5＇－ATCTTGTATTTGGTGCCTGAG－3＇(SEQ ID NO.1)；COI－R：5＇－AGTCGGAGTACCGTCGTG－3＇(SEQ ID NO.2)。

【技术特征摘要】
1.一种鉴定Pirangoclytustriangularis的特异性引物，其特征在于，所述特异性引物的上下游核苷酸序列分别为：COI－F：5＇－ATCTTGTATTTGGTGCCTGAG－3＇(SEQIDNO.1)；COI－R：5＇－AGTCGGAGTACCGTCGTG－3＇(SEQIDNO.2)。2.权利要求1所述的特异性引物在Pirangoclytustriangularis线粒体COI基因序列扩增中的应用。3.一种Pirangoclytustriangularis的鉴定方法，其特征在于，以Pirangoclytustriangularis样本为基础构建标准流生物分子系统树，以待测样本为基础构建检测流生物分子系统树，分析和比较所述标准流生物分子系统树与所述检测流生物分子系统树，鉴定所述待测样本是否为Pirangoclytustriangularis。4.根据权利要求3所述的鉴定方法，其特征在于，所述构建标准流生物分子系统树和构建检测流生物分子系统树的方法为NJ法。5.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，所述NJ法构建标准流生物分子系统树的方法为：以Pirangoclytustriangularis总DNA为模板，利用权利要求1所述的特异性引物进行PCR，并对PCR产物进行测序，获得Pirangoclytustriangularis的线粒体COI核苷酸序列片段，基于所述Pirangoclytustriangularis的线粒体COI基因核苷酸序列片段和相关近缘物种的线粒体COI基因核苷酸序列片段，利用计算机软件，构建标准流生物系统树。6.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，所述NJ法构建检测流生物分子系统树的方法为：以待测样本总DNA为模板，利用权利要求1所述的特异性引物进行PCR，并对PCR产物进行测序，获得待测样本的线粒体COI核苷酸序列片段，基于所述待测样本的线粒体COI基因核苷酸序...

【专利技术属性】
技术研发人员：李凯兵，袁淑珍，吴志毅，李海林，刘海军，张永宏，谈珺，马骏，胡学难，梁继海，
申请(专利权)人：李凯兵，
类型：发明
国别省市：广东,44