一种筛查或辅助诊断炎症性肠病的方法及适用于该方法的试剂盒技术

本发明专利技术涉及炎症性肠病筛查或辅助诊断技术领域，同时也涉及一种用于检测PSMA7蛋白浓度的物质的新用途。该新用途具体涉及用于检测PSMA7蛋白浓度的物质在制备筛查或辅助诊断炎症性肠病产品中的应用，其中炎症性肠病具体包括溃疡性结肠炎和/或克罗恩病。所述筛查或辅助诊断炎症性肠病的产品以人唾液为待测样本，该PSMA7蛋白为口腔唾液蛋白酶体蛋白PSMA7。本发明专利技术为早期筛查和辅助诊断炎症性肠病提供了一种准确性高、方便简洁、非侵入性、低成本的方法，具有很大的应用价值。

A method of screening or assisting in the diagnosis of inflammatory bowel disease and a kit suitable for the method

The invention relates to the technical field of inflammatory bowel disease screening or auxiliary diagnosis, and also relates to a new application of a substance for detecting the concentration of PSMA7 protein. The particular to a new application for the detection of PSMA7 protein concentration in the material preparation by screening or diagnosis of inflammatory bowel disease in the product system, including inflammatory bowel disease, including ulcerative colitis and / or Crohn's disease. The product of screening or assisting the diagnosis of inflammatory bowel disease takes human saliva as the sample to be tested, and the PSMA7 protein is an oral salivary protease protein PSMA7. The invention provides a method with high accuracy, convenience, simplicity, non invasion and low cost for early screening and auxiliary diagnosis of inflammatory bowel disease, and has great application value.

【技术实现步骤摘要】
一种筛查或辅助诊断炎症性肠病的方法及适用于该方法的试剂盒
本专利技术涉及炎症性肠病筛查或辅助诊断
，同时也涉及一种用于检测PSMA7蛋白浓度的物质的新用途。
技术介绍
炎症性肠病(inflammatoryboweldiseases，IBD)是一组世界范围内的慢性非特异性肠道炎症性疾病，包括溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis，UC)和克罗恩病(Crohn'sdisease，CD)两个独立疾病。该类疾病除反复发作、迁延难愈、目前尚无特效治疗手段外，也可能增加患者罹患结直肠癌的风险，严重影响患者身心健康。据报道，近十余年来，我国IBD的发病率呈逐年增加趋势，已成为消化系统的常见疾病。IBD的发病原因尚未完全阐明，通常认为其发生是与肠道微生物、宿主遗传易感性、免疫应答失衡等多因素有关的复杂的过程，其中肠道菌群失调被认为是重要的高危因素。IBD的正确诊断和鉴别诊断是规范化治疗的基础。筛查出早期IBD患者，及时给予个体化治疗，对于IBD的病情缓解、减少并发症、预防复发、提高生活质量非常重要。但是，IBD的早期诊断较难。目前IBD仍然依靠排他性的诊断，需要结合病史、临床表现、实验室和影像学检查、肠镜和病理学发现进行全面分析判断，其中肠镜检查和活检标本的病理学诊断是最关键步骤。肠镜检查是将肠镜经肛门循腔插至回盲部，从黏膜侧观察结肠病变，是目前发现肠道肿瘤及癌前病变最简便、安全、有效的方法。但是，内镜检查毕竟是一种侵入性检查方式，可造成患者不适和一些并发症；不少患者因畏惧和拒绝这种检查而错过大肠病变早期诊断和早期治疗的最佳时机。即使近年来全麻下无痛肠镜检查技术的发展和应用极大地减少了患者的不适感，但这并不改变肠镜是一种侵入性检查方法的事实，给患者的身心带来一定痛苦，费用也较高昂。参考文献1：Cleynen,I.,etal.(2011)."Geneticevidencesupportingtheassociationofproteaseandproteaseinhibitorgeneswithinflammatoryboweldisease:asystematicreview."PloSOne6(9):e24106.公开了CYDL蛋白与IBD具有联系。CYLD蛋白是一种去泛素化酶，由人体CYLD基因编码，研究表明IBD病人肠道组织中CYLD基因表达异常。但该文献仍然以肠道组织为对象，在肠道以外，例如口腔中是否能检测出异常表达的CYLD蛋白并不可知。参考文献2：Hu,X.T.,etal.,TheproteasomesubunitPSMA7locatedonthe20q13ampliconisoverexpressedandassociatedwithlivermetastasisincolorectalcancer.OncolRep,2008.19(2):p.441-6.报道了PSMA7在结肠癌组织中高表达。该研究指出，PSMA7在结肠癌组织的表达率远高于正常大肠组织。但此研究只能说明肠道组织PSMA7的表达量不同，口腔样本(如唾液)中PSMA7的表达量是否有差异并不知道，所以也不能得出唾液PSMA7与结肠癌及IBD有关系。所以，寻找敏感的、简单易行的IBD筛查方法，对于早期发现IBD具有重要意义。口腔相比于肠道，具有易接触、方便检测的巨大优势。但目前尚未报道过一种通过口腔唾液蛋白酶体蛋白来安全、快速、有效、简单易行地筛查或者诊断IBD的方法。
技术实现思路
当前早期诊断IBD的方法太繁复，肠镜检查也具有侵入性，给患者身心造成一定负担。本专利技术的目的是提供一种简便易行的筛查和辅助诊断方法，对疑似IBD就诊患者进行初筛，免去所有就诊患者均需先进行肠镜检查的麻烦和对患者的不良影响。本专利技术涉及一种用于检测PSMA7蛋白浓度的物质的新用途，该新用途具体涉及用于检测PSMA7蛋白浓度的物质在制备筛查或辅助诊断炎症性肠病IBD产品中的应用。其中炎症性肠病IBD具体包括溃疡性结肠炎(ulcerativecolitis，UC)和/或克罗恩病(Crohn'sdisease，CD)。所述筛查或辅助诊断炎症性肠病的产品以人唾液为待测样本，该PSMA7蛋白为口腔唾液蛋白酶体蛋白PSMA7。所述用于检测PSMA7蛋白浓度的物质为PSMA7蛋白抗体。所述蛋白酶体蛋白PSMA7参与组成20S蛋白酶体核心复合体，其编码基因定位于20q13.33染色体。所述筛查或辅助诊断炎症性肠病相关产品可为用于筛查或诊断炎症性肠病的各种试剂或试剂盒。即本专利技术还涉及一种用于筛查或辅助诊断炎症性肠病的试剂盒，其特征在于试剂盒包括用于检测PSMA7蛋白浓度的物质。炎症性肠病具体包括溃疡性结肠炎和/或克罗恩病。该试剂盒所针对的检测样本可以为人唾液样本。其还可以包括阴性对照样本，以及阳性对照样本，所述阳性对照样本为炎症性肠病患者样本。进一步所述阴性对照样本为健康人的唾液样本，所述阳性对照样本可以为炎症性肠病患者的唾液样本。具体地，试剂盒还可以包括用于处理唾液样本的唾液预处理单元、PSMA7标准品、PSMA7抗体及β-actin抗体。在本专利技术的一个实施例中，所述用于检测PSMA7蛋白浓度的物质为anti-PSMA7,cat.no.ab133505,来自Abcam公司，英国剑桥；内参为anti-actin-β，上述anti-actin-β为来自Abcam公司的cat.no.ab6275，英国剑桥。当然，也可以为其它类型的抗体或者其他可用于检测PSMA7蛋白浓度的物质。本专利技术还涉及一种筛查或辅助诊断炎症性肠病的方法，其包括通过检测PSMA7蛋白在样本中的浓度来筛查或辅助诊断炎症性肠病。其中炎症性肠病具体包括溃疡性结肠炎和克罗恩病。进一步，该方法以人唾液为待测样本，该PSMA7蛋白为口腔唾液蛋白酶体蛋白PSMA7。该方法具体可以包括如下步骤：(1)、提取唾液；(2)、样本预处理；(3)、检测口腔唾液蛋白酶体蛋白PSMA7；(4)、数据处理，筛查或辅助诊断炎症性肠病。具体地，其中步骤(1)为使患者清晨空腹静息状态下，先用清水漱口五分钟，往无菌离心管中吐出约2ml唾液。步骤(2)具体为唾液在10000g/min离心后提取上清，保存于-80℃待用。步骤(3)具体为shotgun质谱分析：从病人及健康对照组唾液中提取唾液蛋白进行shotgun质谱分析；蛋白通过10％SDS-PAGE分离，其中SDS-聚丙烯酰胺凝胶，即使用浓度为10％的SDS-聚丙烯酰胺凝胶分离胶，每个样本凝胶泳道切5-6块，通过甲醇溶解，装入LTQOrbitrapVelos机器分析；通过LC-MS/MS质谱得到蛋白质ID和蛋白质原始峰度值。步骤(4)具体为定量PSMA7表达，在uniquepeptide>2，score>10，且PSM值相比健康人有显著差异或统计学差异，即说明蛋白质表达量越高，可以高度怀疑IBD。其中，PSM值为Peptide-to-spectrummatches，即显示蛋白质确定的肽序列总数(肽谱匹配)，Uniquepeptides是显示蛋白质组的唯一的肽序列的数目，Score显示蛋白质得分，这是个别肽的分数的总和。此外，步骤(3)也可以采用westernblotting方法本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于检测PSMA7蛋白浓度的物质在制备筛查或辅助诊断炎症性肠病产品中的应用。

【技术特征摘要】
1.用于检测PSMA7蛋白浓度的物质在制备筛查或辅助诊断炎症性肠病产品中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，炎症性肠病具体包括溃疡性结肠炎和/或克罗恩病。3.根据权利要求1或2所述的应用，所述筛查或辅助诊断炎症性肠病的产品以人的口腔样本为待测样本。4.根据权利要求3所述的应用，所述待测样本为人唾液样本，该PSMA7蛋白为口腔唾液蛋白酶体蛋白PSMA7。5.根据权利要求1-4任一项所述的应用，其特征在于所述用于检测PSMA7蛋白浓度的物质为PSMA7蛋白抗体。6.一种用于筛查或辅助诊断炎症性肠病的试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括用于检测PSMA7蛋白浓度的物质。...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈宁，刘玉兰，尤鹏，陈峰，郑小雯，荀喆，
申请(专利权)人：北京大学人民医院，北京大学口腔医院，
类型：发明
国别省市：北京,11