The invention provides a qualitative and quantitative competitive ELISA method for detecting oil adjuvant vaccine, which comprises the following steps: quantitative detection of antigen, antibody and antigen antigen dilution, dilution of standard curve and the detected antigen. The present invention first tested the antibody antigen and known concentration of the first reaction of antibody and antigen to completely neutralize antigen reaction; and subsequently neutralized with solid solution after adsorption on ELISA plate, to determine the detected antigen concentration. The standard curve of the slope will be greater than the conventional indirect competition method, thus greatly improve the detection sensitivity and the detection range; to detect synthetic peptide antigen of finished and semi-finished products and vaccines for vaccine antigen; after demulsification of aqueous samples without the need for purification treatment can be determined, compared to other the detection method of shorter 1.5ng/mL; the minimum detection limit can reach 1ng/mL antigens of the invention samples.
【技术实现步骤摘要】
一种油佐剂疫苗的竞争ELISA定性定量检测方法
本专利技术涉及口蹄疫合成肽疫苗检测
,具体涉及一种油佐剂疫苗的竞争ELISA定性定量检测方法。
技术介绍
口蹄疫合成肽疫苗是一种通过人工方法按天然蛋白质的氨基酸顺序合成的保护性短肽。现有定量测定方法通常有Lowry法、BCA法、HPLC等方法。现有的定量方法中主要是针对纯化后的抗原,若用于疫苗破乳后抗原检测,由于疫苗水相成分较复杂,待检样品通常需要耗费大量时间纯化后才能达到检测目的,且很多常规方法检测灵敏度有限,无法达到检测要求。酶联免疫吸附试验(ELISA)一起快速、方便、特异、可定量等优点,在很多领域中得到广泛应用。常规的间接竞争ELISA中,抗原与有限浓度的抗体同时加入到固相吸附有抗原的ELISA板子中进行反应,抗体与游离的抗原、固相化的抗原结合率概率为50%,得到的结果绘制的标准曲线斜率较低,这使得检测灵敏度较低。不能很好的反应口蹄疫合成肽疫苗中有效抗原含量。目前,对于口蹄疫合成肽抗原成品、半成品和疫苗抗原含量定量检测没有通用准确的方法。为了寻找更加快速,有效,方便的的检测方式,本专利技术人通过大量实验在常规间接竞争ELISA的基础上进行了改进。
技术实现思路
针对现有技术中的缺陷,本专利技术提供了一种油佐剂疫苗的竞争ELISA定性定量检测方法,为一种抗原定量检测方法。通过对间接竞争ELISA方法的改进,先将抗原与有限浓度的抗体先在稀释板中反应,抗体与抗原先完全中和。在随后与固相化吸附有抗原的ELISA板中进行反应,造成固相化抗原、待测抗原与抗体结合的机会不均等。最终,得到的标准曲线斜率会大于常规间 ...
【技术保护点】
一种油佐剂疫苗的竞争ELISA定性定量检测方法,其特征在于,包括以下步骤:抗原包被:将0.5μg/mL‑5μg/mL人工合成的口蹄疫抗原固相化吸附到ELISA板子上;稀释抗体:将已知效价的抗体进行稀释,抗体稀释后效价为1:250000‑1:1100000;抗原稀释:在血清稀释板上,用稀释液将待检抗原稀释,标准抗原进行不同比例稀释形成不同浓度的标准抗原稀释液;抗原标准曲线绘制及待检抗原的定量检测:将稀释好的待检抗原和不同浓度的标准抗原稀释液分别与稀释好的抗体在稀释板中进行完全反应,然后将各完全反应后的反应液分别加入到固相化抗原的ELISA板子中继续反应,反应结束后,各加入酶标记物、底物依次反应,再各加入终止液终止,测定OD值,采用不同浓度的标准抗原的对数值为横坐标,标准抗原的OD值为纵坐标绘制抗原标准曲线,然后将待检抗原的OD值带入标准曲线中算出待测对应抗原浓度,再乘以稀释倍数即为待测样品中抗原实际含量。
【技术特征摘要】
1.一种油佐剂疫苗的竞争ELISA定性定量检测方法,其特征在于,包括以下步骤:抗原包被:将0.5μg/mL-5μg/mL人工合成的口蹄疫抗原固相化吸附到ELISA板子上;稀释抗体:将已知效价的抗体进行稀释,抗体稀释后效价为1:250000-1:1100000;抗原稀释:在血清稀释板上,用稀释液将待检抗原稀释,标准抗原进行不同比例稀释形成不同浓度的标准抗原稀释液;抗原标准曲线绘制及待检抗原的定量检测:将稀释好的待检抗原和不同浓度的标准抗原稀释液分别与稀释好的抗体在稀释板中进行完全反应,然后将各完全反应后的反应液分别加入到固相化抗原的ELISA板子中继续反应,反应结束后,各加入酶标记物、底物依次反应,再各加入终止液终止,测定OD值,采用不同浓度的标准抗原的对数值为横坐标,标准抗原的OD值为纵坐标绘制抗原标准曲线,然后将待检抗原的OD值带入标准曲线中算出待测对应抗原浓度,再乘以稀释倍数即为待测样品中抗原实际含量。2.根据权利要求1所述的油佐剂疫苗的竞争ELISA定性定量检测方法,其特征在于,所述待检抗原的最低检测限度为1ng/mL-1.5ng/mL。3.根据权利要求2所述的油佐剂疫苗的竞争ELISA定性定量检测方法,其特征在于,抗原标准曲线绘制及待...
【专利技术属性】
技术研发人员:刘自立,马贵军,姬明放,
申请(专利权)人:申联生物医药上海股份有限公司,
类型:发明
国别省市:上海,31
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