本发明专利技术涉及一种诊断牛环形泰勒虫（Theileria annulata）血清抗体的间接ELISA试剂盒，包括试剂盒中使用的环形泰勒虫重组抗原包被的酶标板和这种重组抗原的制备方法。该重组抗原仅与环形泰勒虫抗体发生反应，与其同属感染牛的泰勒虫的抗体不发生交叉反应，具有较好的反应原性和极高的特异性。另外，试剂盒重复性良好，与巢式PCR对比检测有较高的符合率。试剂盒操作较简便，可在生产中广泛用于牛环形泰勒虫的检测。
【技术实现步骤摘要】
本发涉及一种用于检测动物寄生虫的试剂盒，以及这种试剂盒制备和非疾病诊断的使用方法。
技术介绍
环形泰勒虫病，是由泰勒虫科（Theileria）、泰勒虫属（Theileria）的环形泰勒虫（Theileria annualata）寄生于动物的巨噬细胞、淋巴细胞及红细胞而引起的血液性原虫病，可引起动物高热、贫血、黄疸、出血、呼吸困难、消瘦和体表淋巴结肿胀等症状。该病又称热带泰勒虫病（Tropical theileriosis）或地中海岸热（Mediterranean Coast Fever），作为一种蜱传性的疾病，主要靠璃眼蜱属的蜱传播。该病流行范围广泛，分别从欧洲的地中海沿岸和非洲通过中东地区到印度和中国都有该病发病的报道。而在中国已发现了包括新疆、内蒙古等13个省区均有环形泰勒虫病的发生。我国大部分区域主要的传播者是残缘璃眼蜱，而新疆南部地区的传播媒介主要是小亚璃眼蜱。国际兽医局（OIE.OfficeInternational DesEpizooties. 2012）将其列为B类疫病，我国将其列为二类疫病。本病的季节流行性很强，多以急性经过为主，发病率和死亡率均很高，纯种牛、改良牛或外地牛对感染反应敏感，死亡率较高，可达到90%，平均病死率在16%～60%之间，严重制约对我国养牛业的发展（汪明. 兽医寄生虫学[M].北京:中国农业出版社, 2008: 366–369 14；Neitz WO. Theileriosis,gonderioses and cytauxzoono- ses: a review[M]. GovernmentPrinter, South Africa, 1965）。目前，诊断环形泰勒虫的手段主要有以下几种：(1)常规检测：血涂片显微镜检，淋巴结穿刺，动物接种法，体外培养和临床诊断等。但血涂片显微镜检技术易发生漏检、误检；而动物接种法则费用较高，用时较长，无法进行大批量样品的检测。参见Nijhof A M, Pillay V, Steyl J, et al. Molecular characterization ofTheileria species asso- ciated with mortality in four species of Africanantelopes[J]. Journal of Clinical Microbiology, 2005, 43 (12): 5907-5911Nijhof A M, Pillay V, Steyl J, et al. Mole- cular characterization ofTheileria species associated with mortality in four species of Africanantelopes[J]. Journal of Clinical Microbiology, 2005, 43 (12): 5907-5911;Barnett S F, Theileriasis D W, Ristic M. Infectious Blood Diseases of Man andAnimals, [J]. 1968;Steyl J C A, Prozesky L, Stoltsz W H, et al. Theileriosis(Cytaux- zoonosis) in Roan antelope (Hippotragus equinus): Field exposure toinfection and identification of potential vectors[J]. Onderstepoort Journalof Veterinary Research, 2012, 79(1): 01-08; Mbizeni S, Potgieter F T, TroskieC, et al. Field and laboratory studies on Corridor disease (Theileria parvainfection) in cattle population at the livestock / game interface ofuPhongoloMkuze area, South Africa[J]. Ticks and tick-borne diseases, 2013, 4(3): 227-23。(2)分子生物学诊断方法：基因探针技术，反向线性印记杂交技术，实时定量PCR检测技术和巢式PCR检测技术等。但PCR检测过程较繁琐，检出结果用时也较多，一些特殊的PCR仪器比较昂贵，无法普及。参考Mason PJ, Shiels BR, ait A, et al.Sequenceand expression of a gene fromTheileria annulatacoding for a 72-kilodaltonheat-shock protein[J]. Mol Biochem Parasitol, 1989, 37 (1): 27-35;Altay K,Aydin M F, Dumanli N, et al. Molecular detection of Theileria and Babesiainfections in cattle[J]. Veterinary parasitology, 2008, 158(4): 295-301; Ros-García A, Nicolás A, García-Pérez A L, et al. Develop- ment and evaluation ofa real-time PCR assay for the quantitative detection of Theileria annulata incattle[J]. Parasit Vectors, 2012, 5: 171。(3)血清学检测：补体结合试验（CFT）、间接血凝试验（IHA）、间接荧光抗体试验（IFAT）及酶联免疫吸附试验（ELISA）等。相对于常规检测和分子生物学诊断，血清学检测具有较高的敏感性和较强的特异性，检测过程简便快速，结果判定较客观。参见Malhotra D V. Comparative ef-ficacy of countercurrentimmunoelectrophoresis and Complement fixation tests for the detection ofTheileria annulata antibodies in experi- mentally infected bovine calves;Katende J, Morzaria S, Toye P, et al. An enzyme- linked immunosorbent assayfor detection of Theileria parva antibodies in cattle using a recombinantpolymorphic immunodominant molecule[J]. Parasi本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种牛环形泰勒虫间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于试剂盒内包括有包被有TaSP重组蛋白的酶标板。
【技术特征摘要】
1.一种牛环形泰勒虫间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于试剂盒内包括有包被有TaSP重组蛋白的酶标板。2.根据权利要求1所述的牛环形泰勒虫间接ELISA抗体检测试剂盒，其特征在于试剂盒内还有：血清稀释液、HRP酶标记二抗、标准阳性对照血清、标准阴性对照血清、底物溶液、终止液和PBST浓缩液。3.权利要求1或2所述的牛环形泰勒虫间接ELISA抗体检测试剂盒中的酶标板制备方法，其特征在于将以感染环形泰勒虫的血液提取基因组DNA作为阳性模板、以引物对SEQ IDNo.1和SEQ ID No...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘光远，罗金，李凯，田占成，殷宏，罗建勋，
申请(专利权)人：中国农业科学院兰州兽医研究所，
类型：发明
国别省市：甘肃;62
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