一种重组融合蛋白及其制备制造技术

本发明专利技术公开了一种重组亚单位融合蛋白及其制备；所述重组亚单位融合蛋白含有猪伪狂犬病病毒gD抗原、猪瘟病毒E2抗原，且选择性的含有猪的抗体Fc蛋白片段；该抗体Fc蛋白片段为猪的IgG的重链恒定区片段，氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；或，为猪的IgG的重链恒定区片段的突变体，氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。本发明专利技术构建并筛选了悬浮稳定高效分泌表达猪伪狂犬病病毒gD抗原、猪瘟病毒E2抗原的亚单位融合蛋白rgD‑rE2‑Fc的CHO细胞株，该细胞株表达重组亚单位融合蛋白rgD‑rE2‑Fc产量高，产量可高达2.4g/L，易于纯化，细胞培养上清中的目的蛋白纯度都能达到80％以上，只需一步亲和层析就能使目的蛋白纯度达到95％以上。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于基因工程，涉及一种重组融合蛋白及其制备，具体是猪伪狂犬病病毒gd蛋白及猪瘟病毒e2蛋白组合及其制备；尤其涉及猪伪狂犬病病毒gd蛋白及猪瘟病毒e2蛋白序列的修饰方法，以及用这种经过修饰后蛋白序列制备重组表达质粒、重组稳转细胞株，以及稳转细胞株表达方法。

技术介绍

1、伪狂犬病病(pseudorabies virus，prv)为疱疹病家族成员，猪是prv的天然宿主和主要传染源。prv感染能够引起母猪流产、产死胎，仔猪出现神经症状，成年出现猪呼吸困难等系统性疾病，对世界各地养猪业造成巨大经济损失。1970年开始，我国生猪饲养规模化发展，但国外种猪大量引进和国内生猪频繁调运等因素使prv在我国呈蔓延趋势，严重影响我国集约化生猪养殖产业的健康发展。2011年开始，许多规模化猪场均不同程度地出现了传统疫苗免疫失败的情况，猪发病率和死亡率明显上升，并出现了新的发病特征。

2、猪瘟(classical swine fever，csf)是危害养猪业最严重的病毒性疾病之一。自csf出现以来，对养猪业造成了重大的经济损失。在自然条件下，猪瘟病毒(cla本文档来自技高网...

【技术保护点】

1.一种重组亚单位融合蛋白，所述重组亚单位融合蛋白含有猪伪狂犬病病毒gD抗原、猪瘟病毒E2抗原，且选择性的含有猪的抗体Fc蛋白片段；所述抗体Fc蛋白片段为猪的IgG的重链恒定区片段，其氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示；或，为猪的IgG的重链恒定区片段的突变体，其氨基酸序列如SEQ ID NO.4所示。

2.根据权利要求1所述的重组亚单位融合蛋白，其特征在于，所述猪伪狂犬病病毒gD抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

3.根据权利要求1所述的重组亚单位融合蛋白，其特征在于，所述猪瘟病毒E2抗原的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

4...

【技术特征摘要】

1.一种重组亚单位融合蛋白，所述重组亚单位融合蛋白含有猪伪狂犬病病毒gd抗原、猪瘟病毒e2抗原，且选择性的含有猪的抗体fc蛋白片段；所述抗体fc蛋白片段为猪的igg的重链恒定区片段，其氨基酸序列如seq id no.3所示；或，为猪的igg的重链恒定区片段的突变体，其氨基酸序列如seq id no.4所示。

2.根据权利要求1所述的重组亚单位融合蛋白，其特征在于，所述猪伪狂犬病病毒gd抗原的氨基酸序列如seq id no.1所示。

3.根据权利要求1所述的重组亚单位融合蛋白，其特征在于，所述猪瘟病毒e2抗原的氨基酸序列如seq id no.2所示。

4.根据权利要求1所述的重组亚单位融合蛋白，其特征在于，所述gd抗原、e2抗原、猪的抗体fc蛋白片段通过富含甘氨酸和丝氨酸的linker连接；linker序列为gggsgggsgggs。

5.根据权利要求1所述的重组亚单位融合蛋白...

【专利技术属性】
技术研发人员：王锋，翟伟锋，殷波，司德民，杨晓娟，於海霞，
申请(专利权)人：申联生物医药上海股份有限公司，
类型：发明
国别省市：