一种肺癌的筛查试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种肺癌的筛查试剂盒，它包括任选的用于检测血液中E-钙黏蛋白表达水平的试剂。本发明专利技术还公开了检测血液中E-钙黏蛋白表达水平的试剂在制备肺癌筛查用试剂中的用途。本发明专利技术试剂盒通过检测E-钙黏蛋白的表达水平，能有效判断待检人群患肺癌的风险，可用于临床肺癌的辅助诊断，为患者采取相关的治疗措施或者决策提供有效的依据，临床应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种肺癌的筛查试剂盒。
技术介绍
肺癌是发病率和死亡率增长最快，对人群健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。近50年来许多国家都报道肺癌的发病率和死亡率均明显增高，男性肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，女性发病率占第二位，死亡率占第二位。非小细胞型肺癌是肺癌中的一类，其约占所有肺癌的80％，约75％的患者发现时已处于中晚期，5年生存率很低。因此，对肺癌进行早期、快速诊断非常重要。目前，肺癌的诊断大都依赖于活体检测肺部组织，但是此种检测方法的操作复杂，对患者的肺损伤极大，而且有可能导致肺癌扩散，存在极大的风险。寻找更为简便、创伤小、副作用小的检测方法亟待解决。E-钙黏蛋白(E-Cadeherin)，是钙依赖性黏附蛋白家族中的重要成员之一，介导同型细胞间的粘附反应，是维持细胞间正常结构的基础，与浸润转移有关，它在上皮恶性肿瘤中最重要的生理功能是抑制肿瘤细胞脱落后发生转移，其表达的缺失或者减低可能与人癌细胞的去分化、侵袭性和转移性倾向有关。目前，关于E-钙黏蛋白与肺癌的关系的研究均着眼于E-钙黏蛋白在肺癌组织或者肺组织中的表达状况。如，周骁等，“Livin、CD44v6、E-钙黏蛋白在非小细胞肺癌组织中的表达及意义”，苏州大学，内科学，2008，硕士的研究发现，E-钙黏蛋白在肺癌患者的肺癌组织中则阳性表达下调，明显低于肺癌患者的癌旁组织与健康人肺组织，而肺癌患者的癌旁组织与健康人肺组织中E-钙黏蛋白的阳性表达均较高，且二者的水平相当，没有明显差异。因此，根据现有文献的报道，只能通过检测肺癌可疑组织中的E-钙黏蛋白是否未表达来筛查肺癌，同样存在创伤大、副作用大、操作不简便的问题。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术提供了一种创伤小、副作用小、便于使用的肺癌检测试剂盒。本专利技术肺癌的筛查试剂盒，它包括任选的用于检测血液中E-钙黏蛋白表达水平的试剂。其中，所述检测血液中E-钙黏蛋白表达水平的试剂是ELISA检测用试剂。其中，所述检测血液中E-钙黏蛋白表达水平的试剂是Western-blot检测方法用试剂。本专利技术还提供了检测血液中E-钙黏蛋白表达水平的试剂在制备肺癌筛查用试剂中的用途。其中，所述检测血液中E-钙黏蛋白表达水平的试剂是ELISA检测用试剂。其中，所述检测血液中E-钙黏蛋白表达水平的试剂是Western-blot检测方法用试剂。通常认为，E-钙黏蛋白只在癌症组织中的表达水平有变化，但是本专利技术人却发现其在血液中的表达水平也有非常显著的变化，而且在血液中的变化趋势与其在组织中的变化趋势以及现有的研究相反：现有技术的研究认为，E-钙黏蛋白在肿瘤组织中的丢失导致肿瘤细胞的恶化，而且E-钙黏蛋白在肺癌组织中的阳性表达显著低于癌旁肺组织以及健康人肺组织，E-钙黏蛋白在组织中的表达与肺癌成负相关；但是，本专利技术人却发现，E-钙黏蛋白在肺癌患者血液中的表达水平大大高于健康人血液，E-钙黏蛋白(E-Cadeherin)在血液中的表达水平与肺癌成正相关，因而可以同感筛查待检人群血液中E-钙黏蛋白(E-Cadeherin)的表达水平达到筛查其患肺癌可能性的目的。本专利技术试剂盒通过检测E-钙黏蛋白(E-Cadeherin)的表达水平，可以判断待检人群患肺癌的风险：若E-钙黏蛋白(E-Cadeherin)的表达水平高，则患肺癌的风险高，若E-钙黏蛋白(E-Cadeherin)的表达水平低，则患肺癌的风险低，可用于临床肺癌的辅助诊断，本专利技术试剂盒仅仅只需采集待检样本的血液，就可以筛查其患肺癌的风险，创伤小、副作用小、使用方便，临床应用前景良好。显然，根据本专利技术的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本专利技术上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1肺癌患者/健康对照血浆检测结果图2E-Cadherin敏感度及特异性分析具体实施方式实施例1E-钙黏蛋白(E-Cadeherin)的表达水平与肺癌的关系一、实验方法1、样本临床资料选取肺癌患者139例，健康对照58例，其临床资料如下：肺癌患者健康对照人数13958年龄58.4±10.751.4±11.2男性比例79(56.8％)36(62.1％)腺癌87(62.6％)/鳞癌27(19.4％)/其他*25(18.0％)/*注：其他包括大细胞癌、腺鳞癌、小细胞癌。2、血液中E-钙黏蛋白(E-Cadeherin)表达水平的检测方法2.1血液分离抽取临床患者及健康对照血液，EDTA抗凝后离心(1200rpm，10min)，将上清吸取后进行第二次离心(3000rpm，15min)，吸取上清分装后-80度保存；2.2ELISA检测采用R&D公司检测试剂盒(DY648)以及DuoSetAncillaryReagentkit2,DY008。检测步骤：(1)将捕获抗体(Captureantibody)用PBS稀释至工作浓度后按100μl/孔加到96孔板，室温孵育过夜；(2)弃上清，用400μl洗涤液(Washbuffer)洗三次，并在吸水纸上拍打以完全去除液体；(3)加入300μl试剂稀释液(reagentdiluent)，室温上封闭1小时；(4)重复步骤(2)；(5)加入100μlE钙蛋白标准品(E-cadherinstandard)及检测样品，以试剂稀释液(reagentdiluent)为空白对照，室温孵育2小时；(6)重复步骤(2)；(7)加入100μl检测抗体(Detectionantibody)，室温孵育2小时；(8)重复步骤(2)；(9)加入100μl酶联免疫亲和素(Streptavidin-HRP)，避光后孵育20分钟；(10)重复步骤(2)；(11)加入100μl显色的底物溶液(Substratesolution)，避光后孵育20分钟；(12)加入50μl终止液(Stopsolution)，在酶标仪上用450nm波长读板，根据标准品浓度及吸光值，自动算出各样品浓度。2.3结果统计样本浓度：酶标仪根本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种肺癌的筛查试剂盒，其特征在于：它包括任选的用于检测血液中E‑钙黏蛋白表达水平的试剂。

【技术特征摘要】
1.一种肺癌的筛查试剂盒，其特征在于：它包括任选的用于检测血液中E-钙黏蛋白表
达水平的试剂。
2.根据权利要求1所述的的筛查试剂盒，其特征在于：所述检测血液中E-钙黏蛋白表达
水平的试剂是ELISA检测用试剂。
3.根据权利要求1所述的的筛查试剂盒，其特征在于：所述检测血液中E-钙黏蛋白表达
水平的试剂是Western-blot...

【专利技术属性】
技术研发人员：李为民，张立，刘伦旭，刘丹，王业，唐怀蓉，黄燕，田攀文，朱苡晗，谭政堂，王彦文，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51