HCV E1E2疫苗组合物制造技术

描述了包含Ｅ１Ｅ２抗原、亚微米水包油乳剂和／或免疫刺激核酸序列的ＨＣＶ　Ｅ１Ｅ２组合物。所述组合物可用于在脊椎动物试验品中刺激免疫应答的方法。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术一般涉及疫苗组合物。具体的，本专利技术涉及含有E1E2抗原、亚微米水包油乳剂和/或CpG寡核苷酸的HCV E1E2组合物。本专利技术背景丙肝病毒(HCV)是引起肠胃外非甲、非乙型肝炎(NANBH)的主要原因。病毒存在于0.4到2.0％的血液供体中。慢性肝炎在约50％感染中发展，其中约20％感染个体发生了肝硬化，肝硬化有时导致肝细胞癌。因此，研究和控制该病具有医学重要性。HCV首先由Houghton等作为NANBH起因鉴定并确定特征。由于获得序列的方法已知，HCV的病毒基因序列已知。参见例如国际公开号WO 89/04669；WO 90/11089和WO 90/14436。HCV有9.5kb的正义、单链RNA基因组且是黄病毒家族的成员。在系统发生分析的基础上鉴定了至少六个不同但相关HCV基因型(Simmonds等，J.Gen.Virol.(1993)742391-2399)。病毒编码具有超过3000个氨基酸残基的单个多蛋白(Choo等，Sciencel.(1989)244359-362；Choo等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(1991)882451-2455；Han等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(1991)881711-1715)。多蛋白共翻译和翻译后加工成结构和非结构蛋白质。特别地，如附图说明图1所示，一些蛋白质由HCV基因组编码。HCV多蛋白裂解产物的顺序和名称如下NH2-C-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4a-NS4b-NS5a-NS5b-COOH。多蛋白最初的裂解由宿主蛋白酶催化，蛋白酶释放三种结构蛋白以及含病毒酶的非结构(NS)蛋白，结构蛋白是N-末端核壳蛋白(命名为“核心”)和两种包膜糖蛋白“E1”(也称为E)及“E2”(也称为E2/NS1)。NS区域命名为NS2、NS3、NS4和NS5。NS2是具蛋白水解活性的整合膜蛋白，它与NS3结合并裂解NS2-NS3 sissle键，从而产生NS3 N-末端并释放包括丝氨酸蛋白酶和RNA解旋酶的大多蛋白。NS3蛋白酶用于加工剩余的多蛋白。在这些反应中，NS3释放NS3辅因子(NS4a)、两种蛋白质(NS4b和NS5a)和RNA-依赖的RNA聚合酶(NS5b)。多蛋白成熟的完成通过NS3丝氨酸蛋白酶催化的在NS3-NS4a连接处的自身催化裂解来起始。E1检测为32-35kDa种类并转变成单个约18kDa的内H-敏感带。相反，E2在免疫沉淀中表现出复杂模式，这与产生多种类型一致(Spaete等，Virol.(1992)188819-830；Selby等，J.Virol.(1996)705177-5182；Grakoui等，J.Virol.(1993)671385-1395；Tomei等，J.Virol.(1993)674017-4026)。HCV包膜糖蛋白E1和E2形成共免疫沉淀的稳定复合体(Grakoui等，J.Virol.(1993)671385-1395；Lanford等，Virology.(1993)197225-235；Ralston等，J.Virol.(1993)676753-6761)。当E1和E2稳定表达或在短暂牛痘病毒系统中时，它们维持在细胞内且缺乏复杂碳水化合物(Spaete等，Virology.(1992)188819-830；Ralston等，J.Virol.(1993)676753-6761)。由于E1和E2蛋白在这些表达系统中一般是膜结合，产生分泌形式以促进蛋白质纯化。参见例如美国专利号6,121,020。此外，描述了在海拉细胞中胞内生成E1E2。参见例如国际公开号WO 98/50556。HCV E1和E2糖蛋白备受瞩目，因为在灵长类动物的研究中显示它们可抗病毒袭击。(Choo等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA.(1994)911294-1298)。然而，需要有效的含有这些抗原的疫苗组合物以防止HCV感染。疫苗组合物通常包括免疫佐剂以增强免疫应答。例如，完整弗氏佐剂(CFA)是有力的免疫刺激剂，它在实验基础上与许多抗原成功使用。CFA包括三种成分矿物油、乳化剂和死分枝杆菌如结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)。水溶抗原溶液与这些成分混合以产生油中水乳剂。尽管作为佐剂有效，CFA引起严重副作用，包括疼痛、脓肿形成和发热，这主要是由于存在分枝杆菌成分。因此，CFA不用于人和牲畜疫苗。胞壁酰二肽(MDP)是分枝杆菌细胞壁复合体的最小单位，复合体产生CFA观察到的佐剂活性。参见例如Ellouz等，Biochem.Biophys.Res.Commun.(1974)591317。产生的一些MDP合成类似物表现出宽广范围的佐剂潜力和副作用。这些类似物的综述参见Chedid等，Prog.Allergy(1978)2563。MDP的代表类似物包括MDP的苏氨酰衍生物(Byars等，Vaccine(1987)5223)、MDP的n-丁基衍生物(Chedid等，Infect.Immun.35417)和胞壁酰三肽的亲脂衍生物(Gisler等，微生物产物和相关合成化合物的免疫调节(Immunomodulations of Microbial Products and Related SyntheticCompounds)(1981)Y.Yamamura和S.Kotani编，Excerpta Medica，Amsterdam，第167页)。一种MDP亲脂衍生物是N-乙酰胞壁酰-L-丙氨酰-D-异谷氨酰-L-丙氨酸-2-(1’-2’-二棕榈酰-sn-甘油-3-羟基磷酰氧基)-乙胺(N-acetylmuramyl-L-alanyl-D-isogluatminyl-L-alanine-2-(1’-2’-dipalmitoyl-sn-glycero-3-huydroxyphosphoryloxy)-ethylamine)(MTP-PE)。此胞壁酰三肽包括磷脂尾部，可使分子疏水部分与脂类环境联合而胞壁酰肽部分与水环境相联。因此，MTP-PE本身能作为乳化剂来产生稳定的水包油乳剂。MTP-PE被用于名为MTP-PE-LO(低油)的乳剂，该乳剂含有4％鲨烯的0.008％土温80(Tween 80TM)，以便以有效结果传递单纯疱疹病毒gD抗原(Sanchez-Pescador等，J.Immunol.(1988)1411720-1727)，尽管其物理稳定性很差。近来，一种安全、高免疫原性的亚微米水包油乳剂MF59包含4-5％w/v鲨烯、0.5％w/v土温80TM、0.5％Span85TM和任选的不同量MTP-PE，它发展用于疫苗组合物。参见例如Ott等，“MF59-设计和评估用于人疫苗的安全和潜在佐剂”(MF59-Design and Evaluation of a Safe and PotentAdjuvant for Human Vaccines)，疫苗设计亚基和佐剂方法(Vaccine DesignTheSubunit and Adjuvant Approach)(Powell，M.F.和Newman，M.J.编)Plenum Press，New Yor本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，所述组合物包含丙肝病毒（ＨＣＶ）Ｅ１Ｅ２抗原和缺乏Ｎ－乙酰胞壁酰－Ｌ－丙氨酰－Ｄ－异谷氨酰－Ｌ－丙氨酸－２－（１’－２’－二棕榈酰－ｓｎ－甘油－３－羟基磷酰氧基）－乙胺（ＭＴＰ－ＰＥ）的亚微米水包油乳剂，其特征在于，所述亚微米水包油乳剂能增强对ＨＣＶ　　Ｅ１Ｅ２抗原的免疫应答。

【技术特征摘要】
...

【专利技术属性】
技术研发人员：M豪顿，SR蔻蒂斯，D欧哈根，YL方，
申请(专利权)人：希龙公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]