一种淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法技术

一种淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法，包括，将淡水鱼鱼糜与NaCl溶液混合，均质搅拌离心后取沉淀，加入CaCl

【技术实现步骤摘要】
一种淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法
本专利技术属于水产食品加工
，具体涉及一种淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法。
技术介绍
体内自由基代谢失衡累积过多的自由基，引起机体氧化应激，导致机体组织和细胞的氧化损伤，诱发各种慢性疾病。抗氧化剂通过清除自由基、调节机体内各类抗氧化物质的功能活性，调整和改善人体生理功能，从而达到预防和治疗慢性疾病的目的。商用抗氧化剂多是合成化合物，如BHT、BHA，虽抗氧化效果良好，但长期使用对人体肝、脾等具有不利影响，其应用受到极大的限制。因此逐步转向关注从各种动植物中分离天然抗氧化剂，其需求日益高涨。食品蛋白源抗氧化肽是非酶类自由基清除剂，具有低毒、高效、易吸收等特点，在食品、制药和化妆品行业中具有极大的利用价值和广泛的应用前景。随着肽转运载体(Peptidetransporter1，PepT1)的发现及多肽吸收转运机制的深入研究，表明小分子活性肽才可被人体小肠上皮细胞吸收利用。我国是淡水渔业大国，养殖产量位居全球榜首。淡水鱼具有丰富的营养价值，是优质的蛋白质资源。目前对于鱼蛋白加工利用，已采用化学法和酶法制备水解物。化学法用酸和碱处理鱼蛋白，得到的水解物感官和功能活性都不理想。而酶法制备的水解物具有良好的功能活性而备受关注。但现有的酶法生产的鱼蛋白水解物，由于原料中存在促氧化剂如肌红蛋白，以及磷脂膜中的不稳定脂质成分，影响水解效率且易导致活性肽被氧化而失活的问题；且水解物多为长链多肽，不能被肽转运载体(PepT1)识别和转运吸收，难以在体内发挥抗氧化功能。
技术实现思路
本部分的目的在于概述本专利技术的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本申请的说明书摘要和专利技术名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和专利技术名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本专利技术的范围。鉴于上述和/或现有的制备淡水鱼抗氧化活性多肽的技术空白，提出了本专利技术。因此，本专利技术目的是解决现有技术中的不足，提供一种抗氧化活性高的淡水鱼抗氧化活性多肽的制备方法。为解决上述技术问题，本专利技术提供了如下技术方案：一种淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法，包括，预处理，将淡水鱼鱼糜与NaCl溶液混合，均质搅拌离心后取沉淀，加入CaCl2和柠檬酸混合液，均质搅拌离心后取沉淀冻干，得到预处理后的鱼糜；制备鱼蛋白酶解物，对预处理后的鱼糜进行碱性蛋白酶酶解、胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶和糜蛋白酶酶解，离心收集上清液冻干，得到鱼蛋白酶解物；制备抗氧化物活性肽，将制得的蛋白酶解物溶解于水，逐级过滤膜，将透过液冻干，得到淡水鱼抗氧化物活性肽。作为本专利技术所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法的一种优选方案，其中：所述NaCl溶液质量浓度0.2％～1.0％，其添加质量为鱼糜质量的2～5倍。作为本专利技术所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法的一种优选方案，其中：所述CaCl2和柠檬酸混合液包括5～10mmol/LCaCl2和1～10mmol/L柠檬酸溶液，其添加量为鱼糜质量的2～5倍。作为本专利技术所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法的一种优选方案，其中：所述均质搅拌离心，其是在10000～13000rpm下均质1～3min，以200～1000rpm搅拌30～60min，在4000～10000×g下离心10～15min。作为本专利技术所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法的一种优选方案，其中：所述离心收集上清液，其中，离心条件为在4000～10000×g下离心10～15min。作为本专利技术所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法的一种优选方案，其中：所述逐级过滤膜，其是分别过分子截留量为10、5、3及1kDa的超滤膜，再过200～300Da的纳滤膜，作为本专利技术所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法的一种优选方案，其中：所述碱性蛋白酶酶解，其是向预处理后的鱼糜加入鱼糜质量15～25倍的水，均质后调节鱼浆液pH为6.0～8.5，调节温度为50～60℃，添加占鱼糜质量0.67％～2％的碱性蛋白酶，在50～60℃条件酶解1～3h，然后调节酶解液pH为5.0～5.5终止碱性蛋白酶酶解反应。作为本专利技术所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法的一种优选方案，其中：所述胃蛋白酶酶解，其是添加鱼糜质量20～40倍的30～40mmol/LNaCl，调节混合液pH为1.5～2.0，调节温度为35～40℃，添加占鱼糜质量3.3％～10％的胃蛋白酶，在35～40℃酶解0.5～1.5h，然后调节pH至7.0～7.5终止胃蛋白酶酶解反应。作为本专利技术所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法的一种优选方案，其中：所述胰蛋白酶和糜蛋白酶酶解，其是添加鱼糜质量100～150倍的磷酸钠缓冲溶液，最终保持磷酸钠缓冲溶液浓度为0.01～0.05mol/L，pH为6.0～7.0，添加占鱼糜质量0.67％～2％的胰蛋白酶，添加占鱼糜质量0.67％～2％的糜蛋白酶，在35～40℃酶解1～3h，在95～100℃下保温5～10min终止酶解反应，然后冷却至室温。作为本专利技术所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法的一种优选方案，其中：所述胰蛋白酶，其酶活为2200～3000U/mg；所述糜蛋白酶，其酶活为700～1000U/mg；所述碱性蛋白酶，其酶活为150～300U/mg；所述胃蛋白酶，其酶活为1100～1400U/mg。本专利技术所具有的有益效果：(1)本专利技术制备的预处理操作除去了鱼肉中的肌红蛋白85.1％，以及磷脂膜中磷脂72.2％。(2)本专利技术制备的淡水鱼蛋白酶解物为白色，而未处理鱼肉制备的酶解物为淡黄色。预处理鱼肉酶解物具有很好的白度，提升了1.12倍。(3)本专利技术制备的淡水鱼蛋白酶解物具有很好的抗氧化功能活性，与未处理鱼肉制备的酶解物相比，预处理鱼肉制备的酶解物的ABTS自由基清除活性和ORAC值分别增强了1.72倍和1.73倍，其中淡水鱼蛋白抗氧化肽(<1kDa)的ABTS自由基清除活性和ORAC值最高，分别为5263.78±77.64μmolTE/gprotein和446.55±15.32μmolTE/gprotein。(4)本专利技术淡水鱼蛋白酶解物小于1kDa的组分高达83.16％，其中591Da肽占26.92％，233Da肽占42.34％。(5)本专利技术淡水鱼蛋白酶解物和抗氧化肽是以天然产物为原料，所得产品安全、无毒、无腥味和泥土味，溶解性好，能被人体吸收利用且感官品质优良，能广泛应用于功能食品中。附图说明为了更清楚地说明本专利技术实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本专利技术的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：图1为实施例1中鱼蛋白酶解物超滤前的分子量分布，由图可知，鱼蛋白酶解物主要成分为小于1kDa的多肽，高达83.16％；其中591Da肽占26.92％，233Da肽占42.34％。图2为实施例1中鱼肉酶解物超滤前后各组分的抗氧化活性，由图可知，<1kDa的抗氧化肽的ABTS自由基清除活性和ORAC值最高，说明了本专利技术制备的鱼肉蛋白酶解物和抗氧化肽具有良好的抗氧化活性。具体实施方式为使本专利技术的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合具体实施例对本专利技术的具本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法，其特征在于：包括，预处理：将淡水鱼鱼糜与NaCl溶液混合，均质搅拌离心后取沉淀，加入CaCl

【技术特征摘要】
1.一种淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法，其特征在于：包括，预处理：将淡水鱼鱼糜与NaCl溶液混合，均质搅拌离心后取沉淀，加入CaCl2和柠檬酸混合液，均质搅拌离心后取沉淀冻干，得到预处理后的鱼糜；制备鱼蛋白酶解物：对预处理后的鱼糜进行碱性蛋白酶酶解、胃蛋白酶酶解、胰蛋白酶和糜蛋白酶酶解，离心收集上清液冻干，得到鱼蛋白酶解物；制备抗氧化物活性肽：将制得的蛋白酶解物溶解于水，逐级过滤膜，将透过液冻干，得到淡水鱼抗氧化物活性肽。2.根据权利要求1所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法，其特征在于：所述NaCl溶液质量浓度0.2％～1.0％，其添加质量为鱼糜质量的2～5倍。3.根据权利要求1或2所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法，其特征在于：所述CaCl2和柠檬酸混合液包括5～10mmol/LCaCl2和1～10mmol/L柠檬酸溶液，其添加量为鱼糜质量的2～5倍。4.根据权利要求3所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法，其特征在于：所述均质搅拌离心，其是在10000～13000rpm下均质1～3min，以200～1000rpm搅拌30～60min，在4000～10000×g下离心10～15min。5.根据权利要求1、2或4中任一项所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法，其特征在于：所述离心收集上清液，其中，离心条件为在4000～10000×g下离心10～15min。6.根据权利要求5所述淡水鱼抗氧化物活性肽的制备方法，其特征在于：所述逐级过滤膜，其是分别过分子截留量为10、5、3及1kDa的超滤膜，再过200～300Da的纳滤膜。7.根据权利要...

【专利技术属性】
技术研发人员：夏文水，张晓维，姜启兴，许艳顺，于沛沛，
申请(专利权)人：江南大学，
类型：发明
国别省市：江苏,32