一种大米活性肽在制备保护内皮祖细胞抗氧化制剂中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种大米活性肽在制备保护内皮祖细胞抗氧化制剂或食品中的应用。本发明专利技术所述大米活性肽具有保护内皮祖细胞抗氧化的作用，为保护内皮祖细胞的相关疾病提供了新的食源性应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术一种大米活性肽在制备保护内皮祖细胞抗氧化制剂或食品中的应用。
技术介绍
大米蛋白具有优良的营养价值，人体吸收利用率高，生物效价大，并且大米蛋白富含各类氨基酸，但是，大米蛋白本身溶解性差，严重影响了其利用。因此对大米进行深加工，以进一步提升其价值具有重要意义。而对大米蛋白进行水解，提取其中的具有生物活性的肽段，可以有效实现对大米蛋白的深加工。大米活性肽是从大米中提取出的一种具有生物活性的肽。大米活性肽包括几种具有不同功能的多种活性肽，有大米抗氧化活性肽、大米降血压活性肽、大米免疫活性肽、阿片活性肽、类阿片拮抗肽、大米风味肽等等。大米抗氧化活性肽能有效清除体内过剩的活性氧，保护细胞和线粒体的正常结构和功能，防止脂质过氧化，在预防自由基诱发的心脑血管疾病方面有很大的开发潜力。大米活性肽对内皮细胞的氧化损伤有一定的保护作用，可有效清除一些自由基，减少内皮细胞的凋亡。内皮祖细胞(endothelialprogenitorcells，EPCs)是存在于骨髓、脐血和外周血的一种具有高增殖潜能的前体细胞，它具有增殖、迁移、分化成成熟内皮细胞和聚集形成新生血管的作用。研究表明，内皮祖细胞数量减少可能是心血管疾病的标志物。内皮祖细胞因氧化应激引起的损伤是多种疾病的早期反应，与高血压、冠心病、糖尿病、脂代谢紊乱的发生密切相关，这些疾病的患者存在内皮祖细胞功能受损。内皮祖细胞介导的损伤和修复反应是动脉粥样硬化的始动因素和重要环节。已有研究发现，一些食源物质、药食同源物质可用于治疗内皮祖细胞损伤引起的疾病。蜂蜜可能通过促进内皮祖细胞的动员，进而参与新生血管的生成，可用于治疗糖尿病创面。番茄红素可通过调节内皮祖细胞的细胞周期来增加细胞活力。儿茶素可以增强内皮祖细胞对H2O2的抵抗力，减少其凋亡。葛根素可显著增加内皮祖细胞的数量，并改善外周血内皮祖细胞的粘附能力、迁移能力、增殖能力和体外血管生成能力。经过调研，未见我国学者对大米活性肽具有保护内皮祖细胞免受氧化应激损伤作用的相关文献报道，因此关于大米活性肽抗氧化损伤的活性等研究领域尚处于空白阶段。
技术实现思路
本专利技术建立过氧化氢氧化损伤模型，给药后发现，大米活性肽(序列为KHNRGDEF<SEQIDNO.1>)的在200μmol/L的浓度下对H2O2诱导的细胞活力改善效果最为明显。因此，所述大米活性肽可以用于防止和/或缓解与内皮祖细胞功能紊乱相关的动脉粥样硬化、高血压、糖尿病等由于内源性或外源性活性物质的积累而诱发的一系列疾病。即，本专利技术所述大米活性肽具有保护内皮祖细胞抗氧化的作用，为保护内皮祖细胞的相关疾病提供了新的食源性应用。具体实施方式大米活性肽(SEQIDNO.1)对H2O2诱导的内皮祖细胞的抗氧化保护作用1.选择对数生长期的细胞，无EDTA胰酶消化后制成细胞悬液，用计数板测定悬液中的细胞浓度，按照每孔5000个细胞接种于96孔板，每孔接种200μL，每组设6个复孔，在37℃5％CO2培养箱中培养4小时后分为正常组、过氧化氢处理组、过氧化氢+大米活性肽保护组，将原有培养基吸出，所有组先加入160μL的培养基，正常组、过氧化氢处理组加入20μL的无血清培养基，过氧化氢+大米活性肽保护组分别加入相应浓度等体积大米活性肽，使药物终浓度分别为100、150、200μmol/L，于37℃5％CO2培养箱预保护4h后，过氧化氢处理组和过氧化氢+大米活性肽保护组每孔加入20μLH2O2，其终浓度为100μml/L，正常对照组加入20μL无血清培养基，于37℃5％CO2培养箱孵育24h后，MTT法检测细胞活力。见表1：表1大米活性肽对H2O2损伤的内皮祖细胞的细胞活力的影响与正常组比较，过氧化氢处理损伤组细胞活力显著下降；而与过氧化氢处理组比较，大米活性肽的高剂量组(200μmol/L)对H2O2诱导的细胞活力有明显改善。2.选择对数生长期的细胞，无EDTA的胰酶消化后制成细胞悬液，调整细胞浓度，按每孔4×104个接种于24孔板，每孔接种800μL，每组设3个复孔，4h后分为正常组、模型组和大米活性肽组，正常组和过氧化氢处理组加入100μL无血清培养基，三个给药组分别加入相应浓度等体积大米活性肽，使药物终浓度分别为100、150、200μmol/L，于37℃孵育预保护4h后，除正常组加入100μL无血清培养基外，模型组和大米活性肽组每孔加入100μLH2O2，其终浓度为100μmol/L，正常对照组加入100μL无血清培养基，于37℃孵育4h后，按说明书要求取细胞上清液测定LDH和MDA的释放量；裂解细胞，测定胞内SOD活力。根据公式计算得到各组细胞的生化指标，见表2：表2大米活性肽对H2O2诱导的内皮祖细胞损伤氧化指标的影响与正常组比较，过氧化氢处理组SOD活性明显下降，LDH和MDA水平明显升高；而与模型组比较，大米活性肽中、高剂量组LDH释放量显著下降；而在MDA水平上，大米活性肽给药组均能使之降低；SOD活性中，大米活性肽高剂量组均能使之显著升高，表明大米活性肽在细胞氧化指标上具有保护细胞抗氧化损伤的作用。3.通过流式细胞仪测定不同处理组内皮祖细胞的细胞周期情况，发现大米活性肽可以通过显著增加细胞的S期来增加细胞活力。本专利技术是结合最佳实施例进行描述的，然而在阅读了本专利技术的上述内容后，本领域技术人员能领会在公开的实施例中作许多改变也可获得相同或类似的结果，而不超出本专利技术的构思、精神和范围。更具体地说，显然有些化学和生理性的相关试剂可替代本文所公开的试剂而得到相同或类似的结果。所有类似的取代和修饰对本领域技术人员来说，显然都认为是本专利技术的精神、范围和构思及权利要求范围内的，即所有上述这些等价形式和所有对工艺参数的改进和变动都同样属于本专利技术的权利要求书所限定的范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种大米活性肽在制备保护内皮祖细胞抗氧化制剂或食品中的应用，所述大米活性肽的序列如SEQ ID NO.1所示。

【技术特征摘要】
1.一种大米活性肽在制备保护内皮祖细胞抗氧化制剂或食品中的应用，所述大米活性肽的序列如SEQIDNO.1所...

【专利技术属性】
技术研发人员：梁盈，李佳佳，林亲录，黄萍，吴伟，王玉倩，
申请(专利权)人：中南林业科技大学，
类型：发明
国别省市：湖南;43