利用血管内皮细胞生长抑制剂VEGI-192A治疗癌症的方法技术

本发明专利技术以施用有效量的ＶＥＧＩ－１９２Ａ多肽来治疗癌症的方法和组合物为特征。在一些实施方案中，癌症为肺癌或乳腺癌。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及利用血管内皮细胞生长抑制剂VEGI-192A治疗癌症的方法。
技术介绍
血管内皮细胞生长抑制剂(VEGI)为内皮细胞特异的基因产物。已报道了人VEGI的四种异构型发现的VEGI的第一种形式为174个氨基酸长度；随后发现了192个氨基酸残基的两种不同形式和251个氨基酸残基的一种形式。参见Zhai等，Int.J.Cancer 82131-136(1999)；Zhai等，FASEB J.13181-189(1999)；Chew等，FASEB J16742-744(2002)；PCT WO03/039491；U.S.Pat.Appl.Pub.No.2003/0170242。所有异构型为产生自共同基因的剪接变体。四种异构型在其N末端区域不同但拥有编码蛋白质其余部分的151个氨基酸的相同的核心部分。 四种异构型序列的比较表明它们拥有与肿瘤坏死因子(TNF)蛋白质超家族20-30％的同一性。不同异构型的作用还不明确，但根据已报道分子的膜结合和分泌形式，其作用无疑是精细和复杂的。至今报道的所有证据似乎表明VEGI-174的分泌型抑制肿瘤细胞生长并且促使凋亡。VEGI-174疏水性特点暗示其为具有氨基酸29-174组成胞外域的典型II型跨膜蛋白质。全长VEGI-174当在癌细胞中过表达时对肿瘤生长无任何作用，当转染入内皮细胞时也不抑制这些细胞。参见Zhai等，FASEB J13181-189(1999)；Chew等，FASEB J.16742-744(2002)。TNF家族的一些成员(包括TNF和Fas配体)已证实从膜裂解并且作为可溶性蛋白质起作用。参见Bjornberg等，Scand J.Immunol.42418-424(1995)；Kayagaki等，J Exp.Med.1821777-83(1995)。此对于VEGI-174还未证实。然而，仅包括VEGI-174胞外域和源自分泌性蛋白质信号肽的此VEGI-174(s-VEGI)的人工重组分泌型在癌细胞中过表达时抑制肿瘤生长。参见Zhai等，Int.J.Cancer 82131-136(1999)；U.S.Pat.Appl.Pub.No.2002/0111325。丰度最高的异构型VEGI-251具有推定的分泌信号肽。VEGI-251的过表达引起内皮细胞凋亡和生长抑制。PCT WO03/039491；U.S.Pat.Appl.Pub.No.2003/0170242。同样，已证实包含所有VEGI型都拥有的151个氨基酸核心序列的重组VEGI促使凋亡并且阻断肿瘤细胞生长，虽然只有低的效力。参见Wang等，Acta Biochimica et Biophysica Sinica32(5)485-489(2000)。已报道重组产生的和重折叠的VEGI-192A在体外抑制成年牛主动脉内皮(ABAE)细胞的增殖。PCT WO03/039491；U.S.Pat.Appl.Pub.No.2003/0170242。重折叠蛋白质的方法已在美国专利No.6,583,268中报道。 此处引用的所有专利、专利申请和出版物在此整体引入作为参考。需要指出的是对背景部分中出版物的参考并不是承认该出版物构成本专利技术的现有技术。 专利技术概述本专利技术基于重组产生的VEGI-192A蛋白质对治疗癌症(如肺和乳腺)有效的发现。 在一个方面，本专利技术为包括向个体施用有效量的VEGI-192A多肽以治疗个体中癌症的方法。在一些实施方案中，癌症为肺或乳腺癌。 在另一个方面，本专利技术为包括向个体施用有效量的VEGI-192A多肽以抑制个体中肿瘤生长的方法。在一些实施方案中，癌症为肺或乳腺癌。 在另一个方面，本专利技术为包括向个体施用有效量的VEGI-192A多肽以延缓个体中癌症发展的方法。在一些实施方案中，癌症为肺或乳腺癌。 在另一个方面，本专利技术为包括向个体施用有效量的VEGI-192A多肽以延缓个体中转移发展的方法。在一些实施方案中，癌症为肺或乳腺癌。 在另一个方面，所治疗的癌症为晚期癌症。在一些实施方案中，晚期癌症为肺或乳腺癌。 在另一个方面，本专利技术为包含VEGI-192A多肽(在一些实施方案中为有效量的VEGI-192A多肽)和可药用赋形剂的药物组合物。 在另一个方面，本专利技术提供用于本文所述任何方法的试剂盒。在一些实施方案中，试剂盒包含容器、含有与可药用载体结合的VEGI-192A多肽的组合物和使用本文所述任一方法中的组合物的说明书。 在本专利技术的一些实施方案中，VEGI-192A多肽为人VEGI-192A。在一些实施方案中，VEGI-192A多肽包含SEQ ID NO1的氨基酸序列。 在一些实施方案中，个体为哺乳动物。在一些实施方案中，个体为人。 附图简述图1显示了重折叠的VEGI-192A(带有His标签)的纯化和内皮细胞(ABAE)的生长抑制测定法。图1A显示了聚丙烯酰胺葡聚糖S-300柱层析。柱用pH8.0的20mM Tris、0.2M NaCl和0.4M尿素平衡并且运行。在峰的顶端，1、2和3表示三种级分的集合。 图1B显示了图1A中显示的层析级分，集合1、2和3的非还原SDS-PAGE分析。图1C显示了集合3的内皮细胞生长抑制测定，指出50％的抑制浓度(IC50)为12ng/ml(0.5nM)。 图2显示了VEGI-192A(带有His标签)的亲和纯化。图2A显示了重折叠的VEGI-192A的亲和柱纯化。箭头指示VEGI-192A峰。图2B显示了来自图2A的富集并透析的样品的SDS-PAGE。1非还原的；2还原的。 图3A显示了通过腹膜内(IP)或瘤内(IT)注射如实施例中所述制备的VEGI-192A(带有His标签)的Lewis肺肿瘤生长抑制。图3B显示了VEGI-192A注射后负瘤小鼠提高的存活时间。 图4显示了在带有通过MDA-MB-231癌细胞形成的人乳腺癌异种移植肿瘤的小鼠中用如实施例中所述制备的VEGI-192A(带有His标签)瘤内注射后增加的凋亡内皮细胞和降低的微血管密度。A栏对凋亡细胞荧光标记的未治疗肿瘤；B栏对CD31(内皮细胞标志物)免疫染色的未治疗肿瘤；C栏对凋亡细胞荧光标记的VEGI-192A治疗的肿瘤；D栏对CD31(内皮细胞标志物)免疫染色的VEGI-192A治疗的肿瘤。 图5显示通过VEGI-192A抑制Lewis肺癌(LLC)的内摄入。LLC细胞接种于C57B1小鼠的背部。VEGI-192A(5mg/Kg)在LLC细胞接种的同一天(第0天)经腹膜内注射(IP)。在第4天测定赋形剂和VEGI-192A治疗(在图中称作“VEGI”组)的肿瘤体积。 图6显示了VEGI-192A治疗后LLC接种的小鼠的脾脏体重。LLC接种的小鼠在第4天(当肿瘤变得可触摸的时)、第7天、第8天、第9天和第10天用VEGI-192A(5mg/Kg)治疗。在第11天取回脾脏并且称重。 图7A显示了VEGI-192A治疗后细胞因子的血清分布。细胞因子的血清浓度以pg/ml表示。在第11天收集血清。利用抗体缀合的发光测定试剂盒(LINCOplex)测定细胞因子水平。图7B显示了以VEGI-192A治疗动物与赋形剂治疗动物相比血清细胞因子水平本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于治疗个体中肺癌的方法，包括施用有效量的ＶＥＧＩ－１９２Ａ多肽。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2003-12-11 60/529,173;US 2004-1-13 60/536,653描述。权利要求1.用于治疗个体中肺癌的方法，包括施用有效量的VEGI-192A多肽。2.权利要求1的方法，其中癌症为晚期癌症。3.权利要求1的方法，其中癌症为转移的癌症。4.权利要求1的方法，其中VEGI-192A多肽为人VEGI-192A。5.权利要求1的方法，其中VEGI-192A多肽包含SEQ ID NO1的氨基酸序列。6.权利要求1的方法，其中VEGI-192A多肽从大肠杆菌中重组产生。7.用于治疗...

【专利技术属性】
技术研发人员：蔺新力，李鲁远，
申请(专利权)人：普罗特奥姆技术公司，高等教育联邦体系匹兹堡大学，
类型：发明
国别省市：US[美国]