R，S-告依春的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种R，S‑告依春的制备方法，所述制备方法为：S1.提取：取板蓝根药材为原料，蒸馏水超声提取，溶剂萃取后浓缩得到主含R，S‑告依春的提取物；S2.高速逆流色谱分离：提取物经高速逆流色谱洗脱分离，接收流份，收集含有目标产物的流份，得到R，S‑告依春粗品；S3.正相柱层析分离:正相柱层析分离R，S‑告依春粗品，得目标物。利用所述方法制备的R，S‑告依春质量高，单次制备量大，并对样品活性无影响，也无外加污染，产品可用于药品，化妆品，保健品等。

R, S goitrin preparation method

The invention discloses a R S to according to the preparation method of the spring, the preparation method is as follows: S1.: extraction of Radix Isatidis as raw material, distilled water, ultrasonic extraction, solvent extraction and concentration are the main R, S goitrin extract; S2.: extract by high speed countercurrent chromatography high speed countercurrent chromatography elution, receiving continuous flow, collection containing target product flow, R, S epigoitrin crude; S3. positive column chromatography separation: positive column chromatography separation of R, S epigoitrin crude, the target compound. By using the method of preparation of R, S epigoitrin high quality, single large quantity preparation, and has no effect on the activity of sample, no external pollution, products can be used in medicine, cosmetics, health products etc..

【技术实现步骤摘要】
R，S-告依春的制备方法
本专利技术涉及一种中药有效成分的提取分离工艺领域，具体的，本专利技术涉及一种R，S-告依春的制备方法。
技术介绍
R，S-告依春是板蓝根中的一种有效活性成分，具有显著的抗病毒活性。传统的制备R，S-告依春的方法基本采用大孔树脂柱分离，大多使用大孔树脂柱分离层析、正相柱层析及反相柱层析联用的方法，然而采用这种方法制备出的样品得率低、制备量小、纯度不高，无法进行规模化的制备。此外，这种方法还存在污染大，耗时长，成本高，且在制备过程中因使用到大量的吸附填料，使样品原有的生物活性大打折扣，所得R，S-告依春活性降低，生产效益低下，不适合推广使用。
技术实现思路
基于此，本专利技术在于克服现有技术的缺陷，提供一种用高速逆流大量制备R，S-告依春的方法，利用所述方法制备R，S-告依春质量高，单次制备量大，并对样品活性无影响，也无外加污染，可用于药品，化妆品，保健品等。其技术方案如下：一种制备R，S-告依春的方法，包括如下步骤：S1.提取：取板蓝根药材为原料，蒸馏水超声提取，溶剂萃取后浓缩得到主含R，S-告依春的提取物；S2.高速逆流色谱分离：配置体积比为7～9：0.5～1.5：0.5～1.5：8～10的乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水的溶剂体系，所述溶剂体系包括作为固定相的上层和作为流动相的下层，取适量所述流动相溶解所述提取物，将所述溶剂体系泵入高速逆流色谱的色谱柱中，然后将溶解后的所述提取物泵入高速逆流色谱洗脱分离，并根据记录仪得到的逆流色谱图谱判定流份中是否含有R，S-告依春，收集含有R，S-告依春的流份，干燥得到R，S-告依春粗品，其中，所述高速逆流色谱的参数设置如下：转速为300～500rpm，分离温度为17～23℃，检测波长为240～260nm，流动相的流速为9～20ml/min；S3.正相柱层析分离：以正相层析硅胶为填料、体积比为5～9：1～3的石油醚-乙酸乙酯为洗脱溶剂进行正相柱层析所述分离R，S-告依春粗品，洗脱体积为15～25倍柱体积，所述R，S-告依春粗品与填料的质量比为1:20～1:50，收集含有R，S-告依春的洗脱液，减压蒸馏即得。本专利技术采用高速逆流色谱分离R，S-告依春，由于高速逆流色谱不需要固体支撑体，R，S-告依春的分离仅依据其在固定相、流动相中分配系数的不同就可实现，无需大量使用吸附填料，因而避免了因不可逆吸附而引起的样品损失、失活、变性等，不仅使R，S-告依春能够充分回收，回收的R，S-告依春更能保持其本来的特性，且由于被分离的R，S-告依春提取物与液态固定相之间能够充分接触，使得样品的制备量大大提高。在其中一个实施例中，步骤S2所述乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水的混合溶液中乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水的体积比为9：1：1：9。在其中一个实施例中，步骤S2中所述固定相的保留值为80～90％。在其中一个实施例中，步骤S2中所述固定相的保留值为82.4％。在其中一个实施例中，步骤S2中所述流动相的流速为10～15ml/min。在其中一个实施例中，步骤S2中所述转速为400～500rpm。在其中一个实施例中，步骤S2中所述检测波长为254nm。在其中一个实施例中，所述步骤S1为：取板蓝根药材为原料粉碎过筛，蒸馏水超声提取，过滤，取滤液调碱后采用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层，浓缩除去乙酸乙酯得到主含R，S-告依春的提取物。在其中一个实施例中，所述步骤S1为：取板蓝根药材为原料，粉碎过筛，按料液比1:3～1:10用蒸馏水溶解，30～70W的功率下超声30～60min，提取3～5次，过滤，取滤液，用氢氧化钠将滤液调pH为8～12，采用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯层，浓缩除去乙酸乙酯得到主含R，S-告依春的提取物。在其中一个实施例中，步骤S3所述洗脱溶剂中石油醚和乙酸乙酯的体积比为8：2。在其中一个实施例中，步骤S3中所述R，S-告依春粗品与填料的质量比为1:25。在其中一个实施例中，所述步骤S3中采用正相薄层色谱判定洗脱液中是否含有R，S-告依春。在其中一个实施例中，步骤S2中所述混合溶液泵入高速逆流色谱的色谱柱的过程为：混合溶液的上层液于仪器静态泵入高速逆流色谱柱中，混合溶液的下层液于仪器动态泵入色谱柱中，上相为固定相，下相为流动相。在其中一个实施例中，步骤S2中所述溶解后的提取物在固定相、流动相平衡后被泵入色谱柱中。在其中一个实施例中，所述高速逆流色谱柱的体积为1000ml。在其中一个具体实施例中，单次通过单根高速逆流色谱柱的提取物质量为3～5g。在其中一个实施例中，所述硅胶为100～200目硅胶。在其中一个实施例中，步骤S3中R，S-告依春粗品经洗脱溶剂溶解后再进行正相柱层析分离。在其中一个实施例中，步骤S3中减压蒸馏制备目标物的过程中同时回收溶剂。本专利技术的有益效果在于：本专利技术采用高速逆流色谱仪提纯分离制备R，S-告依春，再经正相柱层析制备得到高纯的R，S-告依春，该制备方法耗时短，R，S-告依春质量高，单次制备量大，可进行规模化的制备且成本低；该制备方法因未大量使用吸附填料，对样品活性影响较小，保留了原有的生物活性；制备出的产品也无外加污染，可用于药品，化妆品，保健品等。附图说明图1为制备R，S-告依春的工艺流程图。图2为实施例1中记录仪记录的高速逆流色谱分离R，S-告依春的逆流色谱图谱。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合附图及具体实施方式，对本专利技术进行进一步的详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用以解释本专利技术，并不限定本专利技术的保护范围。图1为制备R，S-告依春的工艺流程图。以下各实施例所用原料均为普通市售产品，正相层析硅胶的目数为100～200目。实施例1按下列步骤制备告依春：S1.提取：取板蓝根药材13.3千克为原料，粉碎过筛，按料液比1:6用蒸馏水溶解，60W的功率下超声提取60min，每隔20分钟搅拌，每超声提取一次后静置60分钟，期间每隔30分钟搅拌一次，如此操作提取4次，过滤，取滤液，另置，滤渣按上述操作反复提取3次，合并滤液。用氢氧化钠将水提液调pH为10时，采用乙酸乙酯萃取，萃取3次，合并乙酸乙酯层，低压浓缩除去乙酸乙酯得到主含R，S-告依春的提取物27.21克。S2.高速逆流色谱分离：配置大量体积比为9：1：1：9的乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水的溶剂体系，所述溶剂体系包括作为固定相的上层和作为流动相的下层，取280mL流动相溶解上述提取物，将溶剂体系的上层液于仪器静态泵入高速逆流色谱柱中，溶剂体系的下层液于仪器动态泵入色谱柱中，溶解后的提取物在固定相、流动相平衡后被泵入色谱柱中，经高速逆流色谱洗脱分离，接收流份，并根据记录仪得到的逆流色谱图谱判定流份中是否含有目标产物，收集含有目标产物的流份，干燥得到R，S-告依春粗品，其中，所述高速逆流色谱的参数设置如下：转速为400rpm，分离温度为17～23℃，检测波长为254nm，流动相的流速为10ml/min，固定相保留值为82.4％；S3.正相柱层析分离：以正相层析硅胶为填料、体积比为8：2的石油醚-乙酸乙酯为洗脱溶剂进行正相柱层析分离R，S-告依春粗品，所述R，S-告依春粗品层析前用洗脱溶剂溶解。洗脱体积为15～25倍柱体积，根据正相薄层色谱判定洗脱液中是否含有R，S-本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备R，S‑告依春的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.提取：取板蓝根药材为原料，蒸馏水超声提取，溶剂萃取后浓缩得到主含R，S‑告依春的提取物；S2.高速逆流色谱分离：配置体积比为7～9：0.5～1.5：0.5～1.5：8～10的乙酸乙酯‑正丁醇‑乙醇‑水的溶剂体系，所述溶剂体系包括作为固定相的上层和作为流动相的下层，取适量所述流动相溶解所述提取物，将所述溶剂体系泵入高速逆流色谱的色谱柱中，然后将溶解后的所述提取物泵入高速逆流色谱洗脱分离，并根据记录仪得到的逆流色谱图谱判定流份中是否含有R，S‑告依春，收集含有R，S‑告依春的流份，干燥得到R，S‑告依春粗品，其中，所述高速逆流色谱的参数设置如下：转速为300～500rpm，分离温度为17～23℃，检测波长为240～260nm，流动相的流速为9～20ml/min；S3.正相柱层析分离：以正相层析硅胶为填料、体积比为5～9：1～3的石油醚‑乙酸乙酯为洗脱溶剂进行正相柱层析分离所述R，S‑告依春粗品，洗脱体积为15～25倍柱体积，所述R，S‑告依春粗品与填料的质量比为1:20～1:50，收集含有R，S‑告依春的洗脱液，减压蒸馏即得。

【技术特征摘要】
1.一种制备R，S-告依春的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.提取：取板蓝根药材为原料，蒸馏水超声提取，溶剂萃取后浓缩得到主含R，S-告依春的提取物；S2.高速逆流色谱分离：配置体积比为7～9：0.5～1.5：0.5～1.5：8～10的乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水的溶剂体系，所述溶剂体系包括作为固定相的上层和作为流动相的下层，取适量所述流动相溶解所述提取物，将所述溶剂体系泵入高速逆流色谱的色谱柱中，然后将溶解后的所述提取物泵入高速逆流色谱洗脱分离，并根据记录仪得到的逆流色谱图谱判定流份中是否含有R，S-告依春，收集含有R，S-告依春的流份，干燥得到R，S-告依春粗品，其中，所述高速逆流色谱的参数设置如下：转速为300～500rpm，分离温度为17～23℃，检测波长为240～260nm，流动相的流速为9～20ml/min；S3.正相柱层析分离：以正相层析硅胶为填料、体积比为5～9：1～3的石油醚-乙酸乙酯为洗脱溶剂进行正相柱层析分离所述R，S-告依春粗品，洗脱体积为15～25倍柱体积，所述R，S-告依春粗品与填料的质量比为1:20～1:50，收集含有R，S-告依春的洗脱液，减压蒸馏即得。2.根据权利要求1所述制备R，S-告依春的方法，其特征在于，步骤S2所述乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水的混合溶液中乙酸乙酯-正丁醇-乙醇-水的体积比为9：1：1：9。3.根据权利要求1所述制备...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄启吟，曾仑，连林生，
申请(专利权)人：中山优诺生物科技发展有限公司，
类型：发明
国别省市：广东,44