一种制备抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体的方法技术

本发明专利技术涉及抗体制备技术领域，具体涉及一种制备抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体的方法，该方法包括如下步骤：a．获得能够分泌高糖基化人绒毛膜促性腺激素的人肿瘤细胞的步骤；b．将所述人肿瘤细胞或所述人肿瘤细胞的裂解物接种到非人哺乳动物的步骤；c．从所述哺乳动物回收抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体或抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体产生细胞的步骤。本发明专利技术的制备方法针对当前缺乏有效地制备抗糖基化hCG抗体的问题，通过能够分泌高糖基化hCG的人肿瘤细胞免疫动物，获得特异性的ITA抗体，用于极早期妊娠、异常妊娠和肿瘤检测，更好地为临床患者提供更精确的检验试剂。

Method for preparing antibody against high glucose glycosylated human chorionic gonadotropin

The present invention relates to the technical field of antibody preparation, and particularly relates to a method for preparing anti hyperglycosylated chorionic gonadotropin antibody, the method comprises the following steps: A. tumor cells can secrete hyperglycosylated chorionic gonadotropin steps; B. the human tumor cells or the human tumor cell lysates were inoculated into non-human mammal steps; C. from the recovery of mammalian anti hyperglycosylated chorionic gonadotropin antibody or anti hyperglycosylated chorionic gonadotropin antibody producing cells steps. The preparation method of the invention for the current lack of preparation of anti hCG glycosylation problems effectively by immune cells in human tumor animal can secrete a highly glycosylated hCG, ITA antibody specificity, for pregnancy, abnormal pregnancy and early tumor detection, provide better and more accurate for the test reagent patients.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及抗体制备
，具体涉及一种制备抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体的方法。
技术介绍
目前对于制备针对人细胞来源的重要蛋白成分的抗体的方法基本上都是采用大量的纯化蛋白等生物大分子作为免疫原（Immunogen）、接种免疫动物的技术路线，这通常需要繁琐的蛋白免疫原制备、纯化过程，不仅费时费力，而且常常受到蛋白免疫原的数量和性能的限制。应用基因工程技术在细菌等宿主菌生产的重组蛋白可以解决蛋白免疫原数量限制的问题，但可能存在重组蛋白不能完全反映人细胞内源蛋白结构与构象、及蛋白的翻译后修饰等真实情形的问题；应用人或哺乳动物细胞来源的蛋白免疫原，主要限制在于获得大量蛋白免疫原方面，需要大量的人体细胞、组织或体液、及培养细胞等原料，这往往有很大的难度。因此，要想获得基于天然结构与构象、及翻译后修饰等人或哺乳动物细胞来源的蛋白抗原的特异性抗体，现有的常规技术还不能满足需求。近年来，有研究报道应用可表达蛋白免疫原的完整细胞免疫动物、制备抗体的成功案例，暗示用完整细胞免疫动物、制备抗体这一方法值得探索。人绒毛膜促性腺激素是人正常妊娠及某些恶性肿瘤发生中产生的多肽激素类型。在妊娠极早期及恶性肿瘤中存在高度糖基化的激素形式，是检测极早期妊娠及恶性肿瘤的重要生物指标。一般用于妊娠检验的人绒毛膜促性腺激素的抗体多是用采自妊娠中后期妇女的尿液中的激素蛋白经纯化后免疫动物制备，这样获得的蛋白免疫原仅含有少量或不含有糖基化修饰，获得的抗体基本上是针对非糖基化抗原，不能用于极早期妊娠及肿瘤检验。（1）高度糖基化的人绒毛膜促性腺激素是极早期妊娠及异常妊娠、妊娠及其它生殖系统肿瘤等的生物标识物。人绒毛膜促性腺激素（hCG）是在人妊娠过程中产生的、与妊娠进程密切相关的激素类型。高度糖基化的人绒毛膜促性腺激素（hyperglycosylatedhCG,hCG-H），又称侵染性滋养细胞抗原（ITA，Invasivetrophoblastantigen）,是hCG激素的高度糖基化修饰形式，在妊娠的极早期出现，可作为极早期妊娠的检验指标（ColeLAetal,HyperglycosylatedhCG(invasivetrophoblastantigen,ITA)，akeyantigenforearlypregnancydetection.ClinBiochem.2003,36(8):647-55）。近年的研究发现，除了在正常妊娠早期，高度糖基化的人绒毛膜促性腺激素（ITA）还是异常妊娠及妊娠相关滋养细胞、生殖系统癌变的特征性标识物，已在多种肿瘤中发现。(ElliotMMetal,Carbohydrateandpeptidestructureofthealpha-andbeta-subunitsofhumanchorionicgonadotropinfromnormalandaberrantpregnancyandchoriocarcinoma.ENDOCRINE1997，7(1):15–32.;.ColeLA,hCGvariants,thegrowthfactorswhichdrivehumanmalignancies.AmJCancerRes.2012,2(1):22-35)。专利WO/2004/033626和US/2011/7871762B2介绍了应用高度糖基化的人绒毛膜促性腺激素（ITA）指标检验侵染性滋养细胞和生殖细胞肿瘤的方法，以ITA作为区分非侵染性和侵染性滋养细胞的指标，及用于检测生殖细胞肿瘤。（专利WO/2004/033626,US/2011/7871762B2:HyperglycosylatedhCG(InvasiveTrophoblastAntigen)indifferentialdiagnosisofmalignantorinvasivetrophoblasticdisease.）另外，ITA还与某些遗传疾病密切相关，可作为辅助诊断唐氏综合征等疾病的指标之一(InvasiveTrophoblastAntigen(HyperglycosylatedHumanChorionicGonadotropin)asaFirst-TrimesterSerumMarkerforDownSyndrome)。（2）高度糖基化的人绒毛膜促性腺激素（ITA）的免疫检测技术还不完善，主要受到可特异性检测ITA的抗体的限制。尽管人们对高度糖基化的人绒毛膜促性腺激素的生物学意义的研究还在进一步深入，但对于其做为极早期妊娠、异常妊娠和肿瘤标识物的应用意义已达到共识，但将这一研究成果应用于临床实践还远远滞后，主要原因是现有的的检测用抗体大多不能检测ITA。根据ColeL.等人对临床与药房hCG试剂盒的系统分析，仅有少数试剂盒可以检测ITA，作为极早期妊娠的检测明显不足，而作为肿瘤的诊断则仅限于少数临床检验机构（Cole,ClinChemThehCGassayorpregnancytest.LabMed.2012,50(4):617-30）。（3）现有技术中hCG抗体的制备方案中缺乏针对性制备ITA的方法。大多数研究报道或专利所描述的hCG抗体制备方案采用的抗原为hCG全分子、hCG-β亚基、或hCG-β亚基C末端肽段，hCG全分子或其β亚基的来源一般为人孕期尿液，以非糖基化修饰的hCG分子为主；典型的制备案例如以下文献或专利。专利US4565687/1986年“Monoclonalantibodiesspecificfortheunboundβsubunitofhumanchorionicgonadotropin”介绍了制备小鼠抗人hCG单克隆抗体的制备方法，采用的抗原/免疫原为hCG-β亚基，由宝灵曼公司提供，来源为人孕期尿液。专利US4804626/1989年“Immunometricassayforthedetectionofhumanchorionicgonadotropin”介绍了制备抗人hCG-β亚基单克隆抗体的制备方法，采用的抗原是hCG分子及hCG-β亚基C末端多肽（CTP）CTP。hCG分子来源于人孕期尿液，hCG-β亚基C末端多肽为人工合成肽段。鉴于此，克服以上现有技术中的缺陷，提供一种新的制备抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体的方法成为本领域亟待解决的技术问题。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术的上述缺陷，提供一种制备抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体的方法。本专利技术的目的可通过以下的技术措施来实现：一种制备抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体的方法，包括如下步骤：a．获得能够分泌高糖基化人绒毛膜促性腺激素的人肿瘤细胞的步骤；b．将所述人肿瘤细胞或所述人肿瘤细胞的裂解物接种到非人哺乳动物的步骤；c．从所述哺乳动物回收抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体或抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体产生细胞的步骤。优选地，所述步骤a具体为：筛选人绒毛膜癌细胞。优选地，所述步骤a具体为：将携带有编码人绒毛膜促性腺激素多肽的核酸的哺乳动物表达载体导入至人肿瘤细胞中。优选地，所述人绒毛膜癌细胞选自人绒毛膜癌细胞系BeWo细胞、JEG-3细胞、JAR细胞、iC3-1细胞、ACH-3P细胞或HRT8/SVneo细胞。优选本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：a．获得能够分泌高糖基化人绒毛膜促性腺激素的人肿瘤细胞的步骤；b．将所述人肿瘤细胞或所述人肿瘤细胞的裂解物接种到非人哺乳动物的步骤；c．从所述哺乳动物回收抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体或抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体产生细胞的步骤。

【技术特征摘要】
1.一种制备抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：a．获得能够分泌高糖基化人绒毛膜促性腺激素的人肿瘤细胞的步骤；b．将所述人肿瘤细胞或所述人肿瘤细胞的裂解物接种到非人哺乳动物的步骤；c．从所述哺乳动物回收抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体或抗高糖基化人绒毛膜促性腺激素抗体产生细胞的步骤。2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a具体为：筛选人绒毛膜癌细胞。3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤a具体为：将携带有编码人绒毛膜促性腺激素多肽的核酸的哺乳动物表达载体导入至人肿瘤细胞中。4.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述人绒毛膜癌细胞选自人绒毛膜癌细胞系BeWo细胞、JEG-3细胞、JAR细胞、iC3-1细胞、ACH-3P细胞或HRT8/SVneo细胞。5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述编码人绒毛膜促性腺激素多肽的核酸包括人绒毛膜促性腺激素α亚基、人绒毛膜促性腺...

【专利技术属性】
技术研发人员：辛化伟，王琼，程小玲，
申请(专利权)人：武汉科技大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42