本发明专利技术涉及抗人绒毛膜促性腺激素抗体-白介素2融合蛋白的制备及其应用。具体地，本发明专利技术提供了重组的抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)β亚基单抗或其活性片段与白细胞介素2(IL2)的融合蛋白，编码该融合蛋白的DNA序列，含该DNA序列的载体，含该载体的宿主细胞，用基因工程制备该融合蛋白的方法，以及含该融合蛋白的药物组合物。本发明专利技术的融合蛋白具有广谱抗肿瘤的治疗作用，且特异性好、半衰期长。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及DNA重组技术和药物领域。更具体地，本专利技术涉及抗人绒毛膜促性腺激素(hCG)i3亚基单抗与人白细胞介素2 (以下简称IL2)的融合蛋白，编码该融合蛋白的 DNA序列，含该DNA序列的载体，含该载体的宿主细胞，以及该融合蛋白的制法和在治疗肿瘤等疾病中的应用。
技术介绍
恶性肿瘤(癌症)是危害人类健康的重大疾病，在临床治疗癌症的过程中，对手术后残留肿瘤细胞的治疗是一个涉及预后情况的关键环节。尽管癌症的治疗技术和方案在不断改进，但癌症的复发仍然是一个棘手和致命的问题。由于各种毒副反应和有限的疗效，使得化疗方法有其局限性。因此，需要有一些更好的治疗方法来控制癌症发展或从根本上消除癌细胞。细胞因子(Cytokine)是一类由机体的活化免疫细胞或其他细胞分泌的具有生物活性的小分子蛋白质的统称，具有调节细胞生理功能、介导炎症反应、参与免疫应答和组织修复等多种生物学效应。根据细胞因子的功能又分为如白细胞介素anterleukin，IL)， 集落刺激因子(Colony-stimulating Factor, CSF)，干扰素Qnterferon)，肿瘤坏死因子 (Tumor Necrosis Factor, TNF)等等。由于细胞因子对免疫功能具有调节作用，局部应用可以增强肿瘤的免疫原性，因而作为药物应用治疗肿瘤疾病。这些细胞因子在市场上都销售多年并显示出独特的治疗效果，其缺点是在体内半衰期短、缺乏特异性。例如，用细胞因子如白介素2 (IL2)、IL12和GM-CSF等，进行全身性治疗，可通过激活机体的保护性免疫反应而杀死残留的肿瘤细胞，目前在临床上已取得了一定的疗效。然而，全身性使用细胞因子，常常会出现系统性问题，即严重的毒副作用，而且在肿瘤部位又达不到有效的治疗剂量，因此治疗往往达不到理想的效果，该治疗技术正处于两难的境地。如果能研究出一种既能为治疗肿瘤提供有效浓度，又能减少甚至避免全身性的毒性，将极大地推动细胞因子生物治疗技术的发展。将细胞因子直接注射到肿瘤部位是一种解决方法,但要直接注射到肿瘤部位是很困难的，因而这一方法只适用于那些特定的、易达部位的肿瘤的治疗。另一种做法是细胞因子的基因治疗，就是将细胞因子转基因癌细胞回输到病人体内，其缺点是在治疗肿瘤的同时，也使机体本身的免疫反应受到抑制。而且，尽管有一些研究结果表明，这种免疫治疗方法在治疗少量残留肿瘤细胞时具有实际应用价值，但是体外的基因改造以及患者的细胞输入因人而异，因此临床应用受到限制。此外，多次的输入接种不仅费时，而且需要昂贵的医药费。虽然有人尝试过在体内用过滤性病毒载体导入细胞因子基因，但是由于病毒载体转移效率低以及免疫原性和安全性所限而未得到临床应用。许多病毒载体的表面糖蛋白能与各种细胞受体结合，这种非特异性相互作用直接降低其体内转染效率； 而且有相当一部分人体内存在着对病毒载体的抗体和免疫反应，这种不利免疫反应直接降低了载体的半衰期。 @]ft，胃[JB一禾中能有效地提高细胞因子在肿瘤局部区域的浓度来进行肿瘤治疗的新技术。抗体是能与相应抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白(Ig)。抗体特异性结合抗原的特性是由其可变区(Variable region)的空间构型决定的。可变区主要由轻链(L链)N端1/2处(VL)IOS-Ill个氨基酸残基和重链(H链)N端1/5-1/4处(VH)IlS 个氨基酸残基组成。可变区又可分为超变区(hypervariable region, HVR)和骨架区 (framework region，FR)。其中，超变区是V区中氨基酸的组成和排列顺序变化频率更高的区域，也是抗体与抗原决定簇(表位，epitope)结合的部位，称为决定簇互补区 (complementarity-determining region, CDR)，是Ig分子独特型决定簇主要存在的部位。 因此，对抗体分子结构的认识为人工合成抗体奠定了基础。众所周知，肿瘤细胞往往缺失HLA-I类分子，以及与NK细胞受体相配对的配体， 这是其逃脱肿瘤特异性CTL或NK细胞介导的免疫反应的主要机制。IL2 (也被称为T细胞生长因子)是一种分子量为14. 5kD的糖蛋白，是由T辅助细胞(Th细胞)合成分泌的一种细胞因子。它不仅能刺激T细胞增殖并能诱导其分化为细胞毒性T细胞(CTL) [19. Grimm, Ε. Α.，et al.，1982. Lymphokine-activated killer cell phenomenon.4Lysis of natural killer-resistant fresh solid tumor cells by interleukin2-activatedautologous human peripheral blood lymphocytes. J. Exp. Med. 155 :1823 ； 20. Hank, J. A. , et al. , Cheung, N. K. , Sondel, P.M. , 1990. Augmentation of antibody dependent cell mediated cytotoxicity following in vivo therapy with recombinant interleukin 2. Cancer Res. 50 :52.]，而且能增强NK细胞的活性。特别是，外周血淋巴细胞与IL2共培养，能产生淋巴因子激活的杀伤细胞(LAK细胞) ο像NK细胞一样，LAK细胞也能杀死肿瘤细胞。临床上IL2已用于许多癌症的治疗，如肾癌、黑色素瘤、非霍奇金淋巴瘤。然而，迄今为止本领域尚没有将抗人绒毛膜促性腺激素(hCG) β亚基单抗与白细胞介素2融合形成高特异性和高肿瘤杀伤力的融合蛋白。因此，为了更有效的治疗肿瘤病人，尤其是治疗那些以传统治疗方式无能为力的病人，本领域迫切需要开发兼具肿瘤特异性抗体和IL2两者生物活性的药物。
技术实现思路
本专利技术的一个目的就是提供一种新的具有肿瘤特异性(或靶向性)抗体和IL2两者生物活性的药物。在本专利技术的第一方面，提供了一种融合蛋白，它包括(a)抗人绒毛膜促性腺激素(hCG) β亚基的单抗元件，该单抗元件的结构如下L-H-Cm(式 I)；式中，L为单链形式的抗体轻链或其保留结合活性的片段；H为单链形式的抗体重链或其保留结合活性的片段；C为单链形式的抗体恒定区或其片段；m 为 0 或 1;“_”表示肽键或连接肽；(b)白细胞介素2元件，该元件由全长人白细胞介素2、或保留活性的白细胞介素 2突变蛋白或其活性片段的氨基酸序列构成；以及(c)任选的、位于抗人绒毛膜促性腺激素(hCG) β亚基的单抗元件和白细胞介素2 元件之间的连接肽序列。在另一优选例中，所述的连接肽的长度为1-20个氨基酸，所述的接头肽序列含3-15个氨基酸。在另一优选例中，单抗元件中连接肽为(Gly Gly Gly Gly kr)^。在另一优选例中，m为1。在另一优选例中，各元件之间(单抗元件与白细胞介素2元件之间)的连接方式为“头一头”、“头一尾”、“尾一头”、或“尾一尾”连接。其中“头”指元件的氨基端，“尾”指元件的羧基端。在另一优选例中，所述的单抗元件包括由抗体重本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：蒋俶，申庆祥，王键，
申请(专利权)人：上海市计划生育科学研究所，
类型：发明
国别省市：
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