【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及纳米抗体，尤其涉及一种抗cd99抗原的纳米抗体及其应用。
技术介绍
1、纳米抗体片段(vhh)，它是由抗体的可变区域(vh和vl)连接在一起形成的单一多肽链，通常通过一个灵活的肽链连接。这种结构使得纳米抗体能够继承原始抗体的抗原结合特异性和亲和力，同时具有较小的分子量和更好的渗透性。纳米抗体通常包含以下几个组成部分：可变区域(vh和vl)、连接肽链和恒定区域(fc)。纳米抗体具有以下优点：小尺寸、易于表达和纯化、多功能性。
2、噬菌体展示技术是将外源编码多肽或蛋白质的基因通过基因工程技术插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置，在阅读框能正确表达，使外源多肽或蛋白在噬菌体的衣壳蛋白上形成融合蛋白，随子代噬菌体的重新组装呈现在噬菌体表面，可以保持相对的空间结构和生物活性。然后利用靶分子，采用合适的淘洗方法，洗去未特异性结合的噬菌体。再用酸碱或者竞争的分子洗脱下结合的噬菌体，中和后的噬菌体感染大肠杆菌扩增，经过3-5轮的富集，逐步提高可以特异性识别靶分子的噬菌体比例，最终获得识别靶分子的多肽或者蛋白。噬菌体展示库是纳米单克隆抗体的优质来源，与杂交瘤技术相比，利用噬菌体文库技术可以以抗体基因的形式保存在噬粒载体上，结合不同蛋白表达系统的优势，如利用无细胞表达体系，实现无动物源生产并获得高特异性和高亲和力的单抗。
3、cd99，也被称为mic2或单链型1型糖蛋白，是由人类cd99基因编码的细胞表面糖蛋白。它属于免疫球蛋白超家族，在各种细胞类型上表达，包括白细胞、内皮细胞和某些类型的肿瘤细胞。cd99在
技术实现思路
1、有鉴于此，本专利技术提出了一种可以检测cd99抗原蛋白的抗cd99抗原的vhh纳米抗体。
2、本专利技术的技术方案是这样实现的：一方面，本专利技术提供了一种抗cd99抗原蛋白的纳米抗体，所述纳米抗体选自c99-241或c99-375；所述纳米抗体c99-241和c99-375均包括框架区和3个互补决定区；
3、所述纳米抗体c99-241和c99-375的3个互补决定区的氨基酸序列分别如seq idno.1-3和seq id no.4-6所示；或者如seq id no.1-6所示的任何一种氨基酸序列中的一个或多个氨基酸进行缺失、取代、插入和/或添加所得到的蛋白突变体氨基酸序列，该蛋白突变体与突变前的蛋白具有相同的功能；或者与seq id no.1-6所示的任何一种氨基酸序列至少有90％以上同源性的氨基酸序列。
4、在以上技术方案的基础上，优选的，所述纳米抗体c99-241和c99-375的氨基酸序列分别如seq id no.7和seq id no.8所示；或者如seq id no.7和seq id no.8所述的氨基酸序列中的一个或多个氨基酸进行缺失、取代、插入和/或添加所得到的蛋白突变体氨基酸序列，该蛋白突变体与突变前的蛋白具有相同的功能；或者与seq id no.7和seq id no.8所述氨基酸序列至少有90％以上同源性的氨基酸序列。
5、在以上技术方案的基础上，优选的，所述纳米抗体c99-241和c99-375的编码基因的核苷酸序列分别如seq id no.9和seq id no.10所示；或者如seq id no.9-10所示的任何一种多核苷酸序列的互补序列在严谨杂交条件能够进行杂交的多核苷酸序列；或者与seq id no.9-10所示的任何一种的多核苷酸序列至少有90％以上同源性的多核苷酸序列。
6、另一方面，本专利技术还提供了一种重组表达载体，所述重组表达载体包含纳米抗体c99-241和c99-375编码基因中的一个或多个。
7、另一方面，本专利技术还提供了一种融合蛋白，将上述任何一种纳米抗体与igg-fc构建得到的融合蛋白。
8、在以上技术方案的基础上，优选的，所述fc基因可以是人igg1、igg2、igg3、igg4的fc片段基因；也可以是鼠igg1、igg2a、igg2b、igg3的fc片段基因；或兔igg的fc片段基因或其他种属的抗体fc片段的基因。
9、在以上技术方案的基础上，优选的，所述融合蛋白的氨基酸序列如seq idno.11或seq id no.12所示。
10、具体的，纳米抗体c99-241与igg-fc进行融合后得到的融合蛋白的氨基酸序列如seq id no.11所示，纳米抗体c99-375与igg-fc进行融合后得到的融合蛋白的氨基酸序列如seq id no.12所示。
11、本专利技术筛选得到的抗cd99抗原蛋白的纳米抗体活性高，与cd99抗原蛋白具有较强的结合能力，特异性强，亲和力高，能够应用于制备检测cd99抗原蛋白的试剂。
12、在以上技术方案的基础上，优选的，所述融合蛋白的编码基因的核苷酸序列如seqid no.13或seq id no.14所示。
13、另一方面，本专利技术还提供了一种检测cd99抗原蛋白的试剂，包括上述纳米抗体和融合蛋白。
14、另一方面，本专利技术还提供了一种制备治疗由cd99抗原蛋白作为标志物的疾病的药物，包括上述纳米抗体和融合蛋白。
15、另一方面，本专利技术还提供了一种cd99抗原蛋白的elisa检测试剂盒，包括：一抗，酶标记的二抗，抗体稀释液、洗涤液、封闭液，显色液；所述一抗或二抗是纳米抗体c99-241或c99-375，或者所述一抗或二抗是纳米抗体c99-241或c99-375与igg-fc进行融合后得到的融合蛋白。
16、本专利技术的一种抗cd99抗原的纳米抗体及其应用相对于现有技术具有以下有益效果：本专利技术筛选得到的抗cd99抗原蛋白的纳米抗体活性高，与cd99抗原蛋白具有较强的结合能力，特异性强，亲和力高，能够应用于制备检测cd99抗原蛋白的试剂。
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1.一种抗CD99抗原蛋白的纳米抗体，其特征在于：所述纳米抗体选自C99-241或C99-375；所述纳米抗体C99-241和C99-375均包括框架区和3个互补决定区；
2.如权利要求1所述的一种抗CD99抗原蛋白的纳米抗体，其特征在于：所述纳米抗体C99-241的氨基酸序列如SEQ ID No.7所示，所述纳米抗体C99-375的氨基酸序列如SEQ IDNo.8。
3.如权利要求1所述的一种抗CD99抗原蛋白的纳米抗体，其特征在于：所述纳米抗体C99-241的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示，所述纳米抗体C99-375的编码基因的核苷酸序列如SEQ ID No.10所示。
4.一种重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体包含权利要求3所述的编码基因中的一个或多个。
5.一种融合蛋白，其特征在于：将权利要求1所述的任何一种纳米抗体与IgG-Fc构建得到的融合蛋白。
6.如权利要求5所述的融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ IDNo.11或SEQ ID No.12所示。
8.一种检测CD99抗原蛋白的试剂，其特征在于：包括权利要求1所述的纳米抗体和权利要求5所述的融合蛋白。
9.一种制备治疗由CD99抗原蛋白作为标志物的疾病的药物，其特征在于：包括权利要求1所述的纳米抗体和权利要求5所述的融合蛋白。
10.一种CD99抗原蛋白的ELISA检测试剂盒，其特征在于：包括一抗和酶标记的二抗，所述一抗和二抗为权利要求1所述的纳米抗体或者权利要求5所述的融合蛋白。
...【技术特征摘要】
1.一种抗cd99抗原蛋白的纳米抗体，其特征在于：所述纳米抗体选自c99-241或c99-375；所述纳米抗体c99-241和c99-375均包括框架区和3个互补决定区；
2.如权利要求1所述的一种抗cd99抗原蛋白的纳米抗体，其特征在于：所述纳米抗体c99-241的氨基酸序列如seq id no.7所示，所述纳米抗体c99-375的氨基酸序列如seq idno.8。
3.如权利要求1所述的一种抗cd99抗原蛋白的纳米抗体，其特征在于：所述纳米抗体c99-241的编码基因的核苷酸序列如seq id no.9所示，所述纳米抗体c99-375的编码基因的核苷酸序列如seq id no.10所示。
4.一种重组表达载体，其特征在于：所述重组表达载体包含权利要求3所述的编码基因中的一个或多个。
5.一种融合蛋白，其特征在于：将权利...
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