【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及红细胞载药，尤其涉及一种红细胞载化疗药物阿霉素的保存。
技术介绍
1、长期以来，恶性肿瘤严重危害人类的生命健康。目前恶性肿瘤的治疗多采用化疗的方法，但化疗药物自身耐药性和靶向性差的特点，往往会在化疗中带来的较大毒副作用。因此开发出具有良好靶向性和生物相容性的给药系统就显得尤为重要。
2、细胞载体因其具有良好的肿瘤靶向性、低免疫原性和生物相容性，而被广泛使用，主要包括红细胞、白细胞、干细胞等。红细胞因其结构简单、来源广泛、生物相容性好等特点成为研究热点。
3、目前红细胞通过将药物封装进红细胞内部和将药物负载在红细胞表面的方式广泛用于化疗药物、酶类、抑制剂等各种物质的负载。但体外红细胞活性的维持，尤其是在经过各种药物负载后的红细胞生物活性的维持是影响红细胞给药体系治疗效果的一个重要因素。
4、目前已有各种红细胞保存方式正在被研究，主要包括4℃保存和冷冻保存。其中4℃保存已被广泛使用，即将红细胞分散在红细胞保存液中，然后放置于4℃保存。各种各样的红细胞保存液被研发出来用于红细胞的4℃保存。
5、红细胞保存方式多种多样，如何选择合适的保存方式，选择合适的保存液使载药后的红细胞能更长时间内维持良好的生物活性为本专利技术面临的课题。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于提供一种红细胞载化疗药物阿霉素给药体系的保存方法。
2、本专利技术是通过如下措施实现的：一种红细胞载化疗药物阿霉素，其中，所述药物是以红细胞为载体，包载
3、本专利技术通过对红细胞的收集与预处理得到用于载药的悬浮红细胞，具体包括以下步骤：
4、(1)采用眼球取血法收集新鲜balb/c小鼠全血于抗凝采血管中；
5、(2)400g下4℃离心10min，弃上层血浆和中间的白膜层,其中上层浅黄色液体为血浆，中间白色不透明的薄层是白膜层包含白细胞与血小板，下层深红色不透明的为红细胞；
6、(3)加入10倍体积预冷的1×pbs(ph＝7.4)悬浮红细胞，400g下4℃离心10min；
7、(4)去上清，重复上面操作将红细胞洗涤三遍。用1×pbs(ph＝7.4)悬浮红细胞，获得70％比容的红细胞悬浮液，4℃保存。
8、本专利技术通过低渗透析载药的方式将化疗药物阿霉素负载入红细胞，具体包括以下步骤：
9、(1)将红细胞混悬液和dox混合均匀后，放置于透析袋中(mwco
10、＝3500)；
11、(2)在4℃低渗缓冲液(低渗缓冲溶液：20mm glucose，10mm na2hpo4，10mmnah2po4，4mm mgcl2，2mm atp，3mm谷胱甘肽)中透析30min；
12、(3)再将含有dox和红细胞的透析袋转移到高渗缓冲液(高渗缓冲液：10％pigpa-nacl(pigpa-nacl solution：100mm丙酮酸钠，100mm肌苷，100mm glucose，35mm nah2po4，5mm腺嘌呤，12％(w/v)nacl)，2mm atp，3mm谷胱甘肽)中，在37℃下透析30分钟；
13、(4)4℃，400g离心10min，pbs洗三遍去除未封装的dox，获得装载dox的红细胞。
14、为了更好的实现上述专利技术目的，本专利技术采用了三种红细胞保存液研究了悬浮红细胞、红细胞载化疗药物阿霉素、全血中红细胞的保存方法。
15、本专利技术使用的红细胞保存液1是商业化的红细胞保存液，其成分包括：枸橼酸钠、枸橼酸、glucose、nacl。
16、本专利技术使用的红细胞保存液2是map红细胞保存液，其成分包括：glucose、nah2po4、nacl、甘露醇、腺嘌呤、枸橼酸钠、枸橼酸。
17、本专利技术使用的红细胞保存液3是本专利技术自制的红细胞保存液，其成分包括：nacl、肌苷、腺嘌呤、丙酮酸钠、atp、谷胱甘肽、glucose、nah2po4。
18、本专利技术通过将红细胞、红细胞载化疗药物阿霉素悬浮在上述三种保存液中
19、本专利技术通过将采集的抗凝全血保存在上述三种保存液中，具体包括以下步骤：
20、(1)采用眼球取血法收集新鲜balb/c小鼠全血于抗凝采血管中；
21、(2)将抗凝全血悬浮在上述三种保存液中；
22、(3)400g下4℃离心10min，弃上层血浆和中间的白膜层,其中上层浅黄色液体为血浆，中间白色不透明的薄层是白膜层包含白细胞与血小板，下层深红色不透明的为红细胞；
23、(4)加入10倍体积预冷的1×pbs(ph＝7.4)悬浮红细胞，400g下4℃离心10min；
24、(5)去上清，重复上面操作将红细胞洗涤三遍；
25、(6)分别用pbs、保存液1、保存液2、保存液3悬浮红细胞、4℃保存。
26、本专利技术的优点在于
27、本专利技术在红细胞及载药红细胞的保存上对比了三种红细胞保存液保存红细胞的形态变化，提供了一种自制的能有效延缓红细胞在保存过程中的形态变化与死亡的红细胞保存液。
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1.一种红细胞负载化疗药物阿霉素，其特征在于，所述药物是以红细胞为载体，负载阿霉素在其内部，并使用了一种自制的红细胞保存液进行保存。
2.根据权利要求1所述的红细胞负载化疗药物阿霉素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中透析袋内红细胞的浓度为3×109个/ml，阿霉素的浓度均为0.5mg/ml。
4.根据权利要求1所述的一种自制的红细胞保存液，其特征在于，红细胞保存液的成分包括NaCl、肌苷、腺嘌呤、丙酮酸钠、ATP、谷胱甘肽、Glucose、NaH2PO4。
【技术特征摘要】
1.一种红细胞负载化疗药物阿霉素，其特征在于，所述药物是以红细胞为载体，负载阿霉素在其内部，并使用了一种自制的红细胞保存液进行保存。
2.根据权利要求1所述的红细胞负载化疗药物阿霉素的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
3.根据权利要求2所述的制备方法，其...
【专利技术属性】
技术研发人员：韦思甜，周莹，王京月，李佳雪，
申请(专利权)人：武汉科技大学，
类型：发明
国别省市：
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