人源性抗胰淀素抗体及其制备方法技术

本发明专利技术公开了一种人源性抗胰淀素抗体及其制备方法，属于免疫球蛋白领域。本发明专利技术所述抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：2所示；重链可变区DNA序列如SEQ ID NO：3所示，轻链可变区DNA序列如SEQ ID NO：4所示；重链基因为IgG1亚类VH3基因家族，轻链基因为Lambda基因家族。本发明专利技术通过建立高容量的噬菌体抗菌库筛选出了人源性胰淀素抗体，并且该抗体具有良好的抗原特异性和抗原结合活性，为进一步的生产胰淀素检测试剂盒提供了保障，具有广阔的应用前景。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于免疫球蛋白领域，具体是一种人源性抗胰淀素抗体及其制备方法。
技术介绍
胰淀素（Amylin）是胰岛B细胞分泌的激素，与胰岛素共贮存于B细胞的分泌颗粒中，两者在葡萄糖及非糖激素刺激下以一定比例相伴释放到胰岛B细胞外。体内代谢过程类似于C-肽，研究发现，胰淀素在肝脏的代谢速度远较胰岛素慢，而且胰淀素主要经肾脏排泄。现已发现胰淀素是一个多效激素，以多重角色参与了机体的物质及能量代谢过程，但其确切的生物学功能尚不清楚。胰岛淀粉样蛋白(IA)的主要构成成分是胰淀素，尸检发现90%以上Ⅱ型糖尿病者胰岛中有IA的沉积。研究表明，可溶性、具有细胞毒性的胰淀素聚集体是胰岛淀粉样蛋白变性纤维形成过程中的早期中间产物，这种聚集体被称之为中等大小毒性淀粉样蛋白颗粒，可以破坏胰岛细胞双层脂质膜，导致细胞内环境的紊乱、离子浓度的改变，引起氧化应激反应，最终胰岛细胞发生凋亡。胰淀素与Ⅱ型糖尿病的关系越来越受到重视并逐步确认，同时也存在不少争议，而胰淀素的确切生物学功能尚未完全清楚，制备该激素高纯度抗体是进一步研究这一激素的生理病理作用的关键。然而由于该激素的分子量小、体内含量低，采用单克隆抗体免疫本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人源性抗胰淀素抗体，其特征在于：所述抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：1 所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQ ID NO：2 所示。

【技术特征摘要】
1.一种人源性抗胰淀素抗体，其特征在于：所述抗体的重链可变区氨基酸序列如SEQIDNO：1所示，轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO：2所示。2.根据权利要求1所述的一种人源性抗胰淀素抗体，其特征在于：所述抗体的重链可变区DNA序列如SEQIDNO：3所示，轻链可变区DNA序列如SEQIDNO：4所示；重链基因为IgG1亚类VH3基因家族，轻链基因为Lambda基因家族。3.一种权利要求1-2所述人源性抗胰淀素抗体的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：Ⅰ.人IgGFab段基因的PCR扩增：分离人外周血中的淋巴细胞，提取总RNA，将提取的RNA逆转录成cDNA，用人特异性IgGKappa链、Lambda链及重链Gamma链引物分别对人轻链和重链基因进行PCR扩增；Ⅱ.噬菌体抗体库的建立：步骤Ⅰ中获得的PCR产物按Fd、κ链和λ链分别进行混合；将双酶切后的轻链PCR混合物和噬菌粒进行连接反应，连接产物电转化入感受态细胞，扩增摇菌后构建轻链基因库；将构建好的轻链库噬菌粒DNA和重链Fd段PCR混合物进行双酶...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱铁虹，公倩，李常颖，畅继武，甄云凤，
申请(专利权)人：天津医科大学总医院，
类型：发明
国别省市：天津;12