用于制备具有改善性能的抗体的方法技术

本发明专利技术涉及用于生产具有改善性能的含有Fc的多肽的方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于生产含有Fe的多肽的方法及其组合物，所述含有Fe的多肽可用作人或动物治疗剂。
技术介绍
治疗性蛋白经常如下实现它们的治疗益处:与内源性蛋白或生理学组分接合或结合以实现期望的应答。例如，单克隆抗体经常通过两个结合事件实现它们的治疗益处。首先，抗体的可变结构域结合靶细胞上的特定蛋白，例如，癌细胞的表面上的CD20。这随后招募效应细胞诸如天然杀伤(NK)细胞，该天然杀伤(NK)细胞结合抗体的恒定区(Fe)并破坏该抗体所结合的细胞。这个过程(被称为抗体依赖性的细胞细胞毒性(ADCC))取决于IgGl重链的Fe结构域中Asn 297的特异性N-糖基化事件，Rothman等人，Mol.1mmunol.26:1113-1123 (1989)。缺乏这种N-糖基化结构的抗体仍然结合抗原，但不可介导ADCC，显然是由于抗体的Fe结构域对NK细胞表面上Fe受体Fe Y RIIIa的亲和力降低。不仅N-糖基化的存在在抗体的效应子功能中起作用，N-连接的寡糖的特定组成对其最终功能也是重要的。岩藻糖的缺乏或双天线的(bisecting)N-乙酰基葡糖胺的存在与 ADCC 的效能正相关，Rothman (1989), Umana 等人，Nat.Biotech.17: 176-180(1999)，Shields 等人，T.Biol.Chem.277: 26733-26740 (2002)，和 Shinkawa 等人，LBiol.Chem.278: 3466-3473 (2003)。也有证据表明，Fe区的唾液酸化与静脉内免疫球蛋白(IVIG)的抗炎性能正相关。参见，例如，Kaneko等人，Science.313: 670-673，2006;Nimmer jahn 和 Ravetch.，T.Exp.Med., 204: 11-15，2007。鉴于特异性N-糖基化在抗体的功能和效能中的实用性，用于改变抗体中N-连接的寡糖的组成以修饰它们的功能的方法是合乎需要的。具体地，合乎需要的是，改变N-连接的寡糖的组成，以便给含有Fe的肽(诸如抗体)赋予增加的或增强的活化免疫细胞的能力。这样的抗体可以用于治疗感染性疾病或肿瘤疾病以及充当疫苗的佐剂。酵母和其它真菌宿主是用于制备重组蛋白的重要生产平台。酵母是真核生物，并因此与高等真核生物共有共同的进化过程，包括许多在分泌途径中发生的翻译后修饰。糖工程改造中的最新进展已经产生了具有遗传修饰的糖基化途径的酵母菌株巴斯德毕赤酵母iPichiapastoris)的细胞系,所述糖基化途径允许它们进行一系列酶反应,所述酶反应模拟人类中的糖基化过程。参见，例如，美国专利号7, 029，872、7，326，681和7，449，308，它们描述了用于在低等真核宿主细胞中生产与它们的人相应物基本上相同的重组糖蛋白的方法。象从前述方法在酵母中生产的那些聚糖一样，人样唾液酸化的双天线复合物N-连接的聚糖已经表现出用于生产治疗性糖蛋白的实用性。因此，用于进一步改变或改进酵母(诸如巴斯德毕赤酵母)中的抗体生产的方法是合乎需要的。
技术实现思路
本专利技术包括一种在有此需要的对象中增强免疫应答的方法，所述方法包括:给所述对象施用治疗有效量的含有Fe的多肽，所述多肽包含的α _2，3-连接的唾液酸的量与亲本多肽中α _2，3-连接的唾液酸的量相比增加。在一个实施方案中，所述对象具有传染性疾病或肿瘤疾病，或处于发展传染性疾病或肿瘤疾病的风险中。在一个实施方案中，通过在含有Fe的多肽的Fe区中引入一个或多个突变，增加α -2，3-连接的唾液酸的量(与亲本多肽中α -2，3_连接的唾液酸的量相比)。在一个实施方案中，通过在具有α-2，3唾液酸转移酶的宿主细胞中表达含有Fe的多肽，增加α _2，3-连接的唾液酸的量(与亲本多肽中α-2，3-连接的唾液酸的量相比)。在另一个实施方案中，通过在已经用编码α-2，3唾液酸转移酶的核酸转化的宿主细胞中表达含有Fe的多肽，增加α-2，3-连接的唾液酸的量(与亲本多肽中α-2，3_连接的唾液酸的量相比)。在一个实施方案中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞。在一个实施方案中，所述宿主细胞是低等真核宿主细胞。在一个实施方案中，所述宿主细胞是真菌宿主细胞。在一个实施方案中，所述宿主细胞是毕赤酵母属物种。在一个实施方案中，所述宿主细胞是巴斯德毕赤酵母。在一个实施方案中，通过在含有Fe的多肽的Fe区中引入一个或多个突变，和通过在已经用编码α _2，3唾液酸转移酶的核酸转化的宿主细胞中表达含有Fe的多肽，增加α -2，3-连接的唾液酸的量(与亲本多肽中α -2，3_连接的唾液酸的量相比)。在一个实施方案中，本专利技术包括一种在有此需要的对象中增强免疫应答的方法，所述方法包括:给所述对象施用治疗有效量的含有Fe的多肽，所述多肽包含唾液酸化的N-聚糖，其中所述唾液酸化的N- 聚糖中的唾液酸残基含有α -2，3连接，且其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含选自以下的N-连接的寡糖结构:SA(1_4)Gal(1_4)GlCNAC(2_4)Man3GlCNAC2。在一个实施方案中，所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸残基排它地经由α-2，3连接进行连接。在一个实施方案中，所述对象具有传染性疾病或肿瘤疾病，或处于发展传染性疾病或肿瘤疾病的风险中。在一个实施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含选自以下的N-连接的寡糖结构:SA2Gal(1_4)GlcNAc(2_4)Man3GlcNAc2。在一个实施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含选自以下的N-连接的寡糖结构:SA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2。在一个实施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少80%的N-聚糖包含选自以下的N-连接的寡糖结构:SA2Gal2GlCNAC2Man3GlcNAc2。在以上实施方案中的任一个中，所述SA可以是NANA或NGNA，或NANA或NGNA的类似物或衍生物。在一个实施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含选自以下的N-连接的寡糖结构:NANA2Gal2GlCNAC2Man3GlcNAc2。在一个实施方案中，所述N-聚糖缺乏岩藻糖。在另一个实施方案中，所述N-聚糖还包含核心岩藻糖。[0011 ] 在一个实施方案中，本专利技术包括一种在有此需要的对象中增强免疫应答的方法，所述方法包括:给所述对象施用治疗有效量的含有Fe的多肽，所述多肽包含唾液酸化的N-聚糖，其中所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸残基含有α -2，3连接，且其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含选自以下的N-连接的寡糖结构:SA(1_4)Gal(1_4)GlcNAc(1_4)Man(>=3)GlcNAc2。在一个实施方案中，所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含选自以下的寡糖结构:SA(本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在有此需要的受试者中增强免疫应答的方法，所述方法包括：给所述受试者施用治疗有效量的含有Fc的多肽，所述多肽包含唾液酸化的N‑聚糖，其中所述唾液酸化的N‑聚糖中的唾液酸残基含有α‑2,3连接，且其中所述含有Fc的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N‑聚糖包含选自以下的N‑连接的寡糖结构：SA(1‑4)Gal(1‑4)GlcNAc(2‑4)Man3GlcNAc2。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2011.10.31 US 61/5533351.一种在有此需要的受试者中增强免疫应答的方法，所述方法包括:给所述受试者施用治疗有效量的含有Fe的多肽，所述多肽包含唾液酸化的N-聚糖，其中所述唾液酸化的N-聚糖中的唾液酸残基含有α-2，3连接，且其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含选自以下的N-连接的寡糖结构:SA(1_4)Gal(1_4)GlcNAc (2—4)Man3GlcNAc2。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者具有传染性疾病或肿瘤疾病，或处于发展传染性疾病或肿瘤疾病的风险中。3.根据权利要求1或2所述的方法，其中所述含有Fe的多肽上的至少30%、40%、50%、60%、70%、80%或90%的N-聚糖包含选自以下的N-连接的寡糖结构:NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2。4.根据权利要求1-3中的任一项所述的方法，其中所述Fe多肽是抗体或抗体片段。5.根据权利要求1-4中的任一项所述的方法，其中所述Fe多肽是基本上由SEQIDNO:6或SEQ ID NO:7组成的抗体片段。6.根据权利要求1-4中的任一项所述的方法，其中所述含有Fe的多肽是包含SEQIDNO: 6或SEQ ID NO: 7的氨基酸序列或基本上由其组成的抗体或抗体片段，具有一个或多个突变，所述突变导致与亲本多肽中的唾液酸的量相比增加的唾液酸的量。7.根据权利要求6所述的方法，其中所述含有Fe的多肽是包含在Fe区的位置243和264处的突变的抗体或抗体片段，其中所述编号是根据Kabat中的EU索引。8.根据权利要求1- 7中的任一项所述的方法，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：TA斯塔德海姆，D库亚，D札，
申请(专利权)人：默沙东公司，
类型：发明
国别省市：美国;US