一种鉴定水稻品种骏优522及其亲本的特异引物组合制造技术

本发明专利技术提供了一种用于鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的特异引物组合，包括JU01、JU02、JU03和JU04，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1～8所示，本发明专利技术同时还提供了根据上述引物组合来鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的方法，步骤如下：首先提取目标植物基因组，然后以基因组为模板，用权利要求1所述的特异引物组合进行PCR检测。本发明专利技术根据能鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的ISSR引物扩增序列设计引物，通过PCR扩增，可以快速从其他水稻品种中鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本。本发明专利技术提供的三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的鉴定方法，可用于上述水稻品种的纯度鉴定，进而在辅助其育种中进行应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物检测
，特别涉及一种用于检测三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的特异引物组合。
技术介绍
我国是世界上最大的杂交水稻种子生产国和消费国，具有庞大的杂交水稻种子市场。目前国内杂交水稻年种植面积约占水稻年种植总面积的59％以上，使水稻产量大幅度提高，为保障我国的粮食安全做出了重要贡献。获得高纯度的杂交种子是充分发挥杂种优势增产潜力的基础。机械混杂和生物学混杂是三系杂交水稻亲本杂株的主要来源。种子纯度是衡量杂交水稻种子质量的主要指标，纯度的下降将导致作物产量和质量的明显降低。低纯度、真实性差的杂交水稻种子给农业生产带来极大损失，是种子质检部门、育种研究单位、制种单位和种子公司共同关心的问题。三系杂交水稻不育系“骏1A”为本申请人自主培育的，不育系“骏1A”与恢复系“R0172”配组育成的三系杂交中稻品种“骏优172”，以及不育系“骏1A”与恢复系“R522”配组育成的三系杂交早熟中稻品种“骏优522”，均已通过湖北省品种审定，抗稻瘟病，米质优，是适合湖北省恩施州种植的农作物新品种。在实现上述研发的过程中，本申请的专利技术人发现现有技术至少存在以下问题：没有鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的特异引物，无法将上述水稻品种与其亲本区分开，不能对其进行快速的种子纯度分子标记鉴定和相关的分子标记辅助育种等工作。
技术实现思路
本专利技术提供了一种用于鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的特异引物组合，解决了
技术介绍
中的问题，采用该引物组合能够快速、准确的对三系杂交水稻品种骏优522及其亲本进行鉴定。实现本专利技术上述目的所采用的技术方案为：一种用于鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的特异引物组合，包括包括JU01、JU02、JU03和JU04，其中JU01正向引物如序列表中SEQ ID NO.1：CACACACACACACACAGAGAACAG；JU 01反向引物如序列表中SEQ ID NO.2：CACACACACAGAGAGGGAAAGA；JU 02正向引物如序列表中SEQ ID NO.3：GGATAATCCGCATCAAGAAGAT；JU 02反向引物如序列表中SEQ ID NO.4：GGTCACCCGAGAATTGCATT；JU 03正向引物如序列表中SEQ ID NO.5：TGAGGCAACAATGCCTATTGCGGA；JU 03反向引物如序列表中SEQ ID NO.6：TATGAGTTCACTATGTGGAGGCTC；JU 04正向引物如序列表中SEQ ID NO.7：AACAATGCCCAAACTTGAGAG；JU 04反向引物如序列表中SEQ ID NO.8：CGGGTCCACATGTCAGTGAG。本专利技术同时还提供了根据上述引物组合来鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的方法，步骤如下：首先提取目标植物基因组，然后以基因组为模板，用权利要求1所述的特异引物组合进行PCR检测。所述的PCR反应条件为：95℃5min；95℃变性30s，65℃退火40s，其中每个循环降低0.7℃，72℃延伸1min30s，15个循环；94℃变性30s，55℃退火45s，72℃延伸2min，25个循环；72℃后延伸10 min。所述的PCR反应体系为：50ng/μl的DNA模板0.8μl，10×PCR缓冲液1μl，2.5mMdNTPs 0.8μl，10μM正、反向引物各0.2μl，DNA聚合酶0.5U，ddH2O补足至10μl。本专利技术还提供了一种含有上述特异引物组合的检测试剂盒。上述试剂盒能够在鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的纯度以及辅助其育种中进行应用。本专利技术根据能鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的ISSR引物扩增序列设计引物，通过PCR扩增，可以快速从其他水稻品种中鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本。本专利技术提供的三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的鉴定方法，可用于上述水稻品种的纯度鉴定，进而在辅助其育种中进行应用。附图说明图1为本实施例中通过PCR反应在水稻中的扩增结果图A；图2为本实施例中通过PCR反应在水稻中的扩增结果图B。具体实施方式下面结合附图以及具体实施例对本专利技术做详细具体的说明，但是本专利技术的保护范围并不局限于以下实施例。以下实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等的《分子克隆：实验室手册》(New York：Cold Spring Harbor Laboratory Press，2001)中所述的条件，或按照仪器或试剂制造厂商所建议的条件。所用试剂均为市售商品。本实施例提供的用于鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的特异引物组合，包括JU01、JU02、JU03和JU04，其中JU01正向引物如序列表中SEQ ID NO.1：CACACACACACACACAGAGAACAG；JU 01反向引物如序列表中SEQ ID NO.2：CACACACACAGAGAGGGAAAGA；JU 02正向引物如序列表中SEQ ID NO.3：GGATAATCCGCATCAAGAAGAT；JU 02反向引物如序列表中SEQ ID NO.4：GGTCACCCGAGAATTGCATT；JU 03正向引物如序列表中SEQ ID NO.5：TGAGGCAACAATGCCTATTGCGGA；JU 03反向引物如序列表中SEQ ID NO.6：TATGAGTTCACTATGTGGAGGCTC；JU 04正向引物如序列表中SEQ ID NO.7：AACAATGCCCAAACTTGAGAG；JU 04反向引物如序列表中SEQ ID NO.8：CGGGTCCACATGTCAGTGAG。本实施例中采用上述引物组合来鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的方法，步骤如下：1.实验材料1.1植物材料中骏优1及其亲本不育系418A、保持系418B和恢复系R964，中骏优1的相似来源不育系中九A和保持系中九B；骏优522及其亲本不育系骏1A、保持系骏1B和恢复系R522，骏优522的的相似来源不育系福伊A和保持系福伊B。1.2酶与试剂分子生物学试剂，TAKARA rTaq DNA聚合酶，10×PCR缓冲液，dNTP Mixture(2.5mM)购自大连宝生物公司。其它生化试剂均为进口分装或国产分析纯。引物由南京金斯瑞生物科技有限公司合成。1.3实验仪器振荡破碎仪(Geno/grinder,USA)；PCR扩增仪：PTC-1本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的特异引物组合，其特征在于：包括JU01、JU02、JU03和JU04，其中JU01正向引物如序列表中SEQ ID NO.1：CACACACACACACACAGAGAACAG；JU 01反向引物如序列表中SEQ ID NO.2：CACACACACAGAGAGGGAAAGA；JU 02正向引物如序列表中SEQ ID NO.3：GGATAATCCGCATCAAGAAGAT；JU 02反向引物如序列表中SEQ ID NO.4：GGTCACCCGAGAATTGCATT；JU 03正向引物如序列表中SEQ ID NO.5：TGAGGCAACAATGCCTATTGCGGA；JU 03反向引物如序列表中SEQ ID NO.6：TATGAGTTCACTATGTGGAGGCTC；JU 04正向引物如序列表中SEQ ID NO.7：AACAATGCCCAAACTTGAGAG；JU 04反向引物如序列表中SEQ ID NO.8：CGGGTCCACATGTCAGTGAG。

【技术特征摘要】
1.一种用于鉴定三系杂交水稻品种骏优522及其亲本的特异引物组合，其特征在
于：包括JU01、JU02、JU03和JU04，其中JU01正向引物如序列表中SEQ ID NO.1：
CACACACACACACACAGAGAACAG；
JU 01反向引物如序列表中SEQ ID NO.2：CACACACACAGAGAGGGAAAGA；
JU 02正向引物如序列表中SEQ ID NO.3：GGATAATCCGCATCAAGAAGAT；
JU 02反向引物如序列表中SEQ ID NO.4：GGTCACCCGAGAATTGCATT；
JU 03正向引物如序列表中SEQ ID NO.5：TGAGGCAACAATGCCTATTGCGGA；
JU 03反向引物如序列表中SEQ ID NO.6：TATGAGTTCACTATGTGGAGGCTC；
JU 04正向引物如序列表中SEQ ID NO.7：AACAATGCCCAAACTTGAGAG；
JU 04反向引物如序列表中SEQ ID NO.8：CGGGTCCACATGTCAGTGAG。
2.一种基于权利要求1所述的引物组...

【专利技术属性】
技术研发人员：徐鑫，刘学群，谭艳平，王春台，熊杰，
申请(专利权)人：中南民族大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42