一种提高胶乳试剂灵敏度和线性的方法技术

本发明专利技术提供一种提高胶乳试剂灵敏度和线性的方法，其使用的检测试剂盒包含试剂R1和试剂R2，其特征在于，所述胶乳试剂为混合大小粒径胶乳的胶乳试剂，制成C反应蛋白胶乳比浊检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述方法包括如下步骤：1）将鼠待测抗原单克隆抗体定向包被到大粒径的胶乳微球上，2）将兔或羊待测抗原多克隆抗体定向包被到小粒径的胶乳微球上；3）然后将包被后的大粒径胶乳和小粒径胶乳混合。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学检验领域，具体涉及一种混合大小粒径胶乳同时提高胶乳试剂灵敏度和线性的方法。
技术介绍
C反应蛋白(CRP)是一种急性时相反应蛋白，机体受微生物入侵或组织损伤等炎症性刺激后几小时内产生由肝细胞合成，分子量为115-140KD、半寿期为19天的血清β球蛋白；在人的血清、脑脊液、胸腹水等多种体液中均可测出。CRP的检测在临床应用相当广泛，包括急性感染性疾病的诊断和鉴别诊断，手术后感染的监测；抗生素疗效的观察；病程检测及预后判断等。临床常规测定CRP的方法可在感染或组织损伤时检测出CRP>10mg/L的浓度，但是因缺乏较高的灵敏性，不能很好的检测出低浓度(0.1-10mg/L)的CRP变化，而该浓度的CRP与新生儿的感染、心血管疾病的发生有着密切的关系，也就是通常所说的超敏CRP(hsCRP)。近几年来，随着检验技术的发展，开始出现了一种全量程CRP，这种CRP即能满足较高的灵敏度，又能满足较高的线性，但是限于胶乳比浊技术平台的限制，这些全量程CRP往往要么降低敏本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种提高胶乳试剂灵敏度和线性的方法，其使用的检测试剂盒包含试剂R1和试剂R2，其特征在于，所述胶乳试剂为大小粒径混合胶乳的胶乳试剂，制成C反应蛋白胶乳比浊检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述方法包括如下步骤：1）将鼠待测抗原单克隆抗体定向包被到大粒径的胶乳微球上，2）将兔或羊待测抗原多克隆抗体定向包被到小粒径的胶乳微球上；3）然后将包被后的大粒径胶乳和小粒径胶乳混合。

【技术特征摘要】
1.一种提高胶乳试剂灵敏度和线性的方法，其使用的检测试剂盒包含试剂R1和试剂
R2，其特征在于，所述胶乳试剂为大小粒径混合胶乳的胶乳试剂，制成C反应蛋白胶乳比浊
检测试剂盒，该试剂盒包括试剂R1和试剂R2；所述方法包括如下步骤：
1）将鼠待测抗原单克隆抗体定向包被到大粒径的胶乳微球上，
2）将兔或羊待测抗原多克隆抗体定向包被到小粒径的胶乳微球上；
3）然后将包被后的大粒径胶乳和小粒径胶乳混合。
2.如权利要求1所述的提高胶乳试剂灵敏度和线性的方法，其特征在于，
所述待测抗原为C反应蛋白；
所述的胶乳微球为羧基修饰的聚苯乙烯胶乳微球；
所述的大粒径胶乳微球的平均粒径为200-400nm，优选300-350；
所述小粒径胶乳微球的平均粒径为50-200nm，优选50-100nm。
3.如权利要求1所述的提高胶乳试剂灵敏度和线性的方法，其特征在于，所述的将抗C
反应蛋白抗体定向包被到大粒径胶乳微球上所用的抗体为鼠单克隆抗体，ELISA效价大于
1:100000；包被到大粒径胶乳微球上所用的抗体为兔多克隆抗体或者羊多克隆抗体，ELISA
效价大于1:50000。
4.如权利要求1所述的提高胶乳试剂灵敏度和线性的方法，其特征在于，
所述试剂R2的制备步骤包括：
1）、取大粒径或小粒径聚苯乙烯胶乳颗粒，用2-吗啉乙磺酸缓冲液溶液MES洗涤三次，
分散；
2）、加入用MES溶液新鲜配制的乙基二甲基胺丙基碳化二亚胺EDAC溶液，室温反应1小
时；
3）、加入用的MES溶液新鲜配制的已二酸二酰肼溶液，4℃反应过夜；
4）、用MES溶液洗涤两次，磷酸盐缓冲液洗涤一次，分散备用；
5）、分别取鼠单克隆抗体、兔或羊多克隆抗体溶液，加入磷酸盐缓冲液配制的高碘酸钠
溶液，室温混合15分钟；
6）、将步骤5）中氧化好的抗体加入到步骤4）中激活的聚苯乙烯胶乳微球溶液中，其中
鼠单克隆抗体用来包被大粒径胶乳微球，兔或羊多克隆抗体用来包被小粒径微球，4℃反应
过夜；
7）、加入牛血清白蛋白溶液，4℃反应2小时；

【专利技术属性】
技术研发人员：陈青松，韩钟，林耀文，
申请(专利权)人：浙江夸克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江;33