【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于体外检测，具体涉及一种降钙素原的均相化学发光法测定试剂盒。
技术介绍
1、降钙素原(pct)是一种无激素活性的降钙素前肽物质，来自定位于第11号染色体上的单拷贝基因。降钙素原前体在内源多肽酶作用下生成116氨基酸的pct，分子量约为13kd。pct在健康个体中的浓度非常低，并且在活体内外都是非常稳定的蛋白。当发生全身性细菌感染时，pct可异位生成并释放入血液循环，感染后早期即可检测到。检测pct可以作为开始抗生素治疗的指征，动态监测pct水平可以辅助评估抗生素的治疗效果，而且当有严重的非感染性炎症刺激时，如大面积烧伤、重度创伤、急性多器官衰竭和心脏手术等情况，pct也可作为早期诊断的评估指标之一。
2、目前用于检测pct的方法主要有放射性免疫分析法(ria)、酶联免疫吸附实验(elisa)、胶体金免疫层析法(gica)和化学发光免疫分析法(clia)。ria有很高的检测灵敏度，但由于标记物具有放射性危害，标记物稳定性差，废弃物难以处理等缺点，已逐渐退出临床检验领域；elisa法采用辣根过氧化物酶或碱性磷酸酶标记抗体，并催化底物产生颜色变化，具有操作简单，试剂稳定期长的特点，但elisa法的检测灵敏度较低，目前主要应用于传染性疾病筛查等对检测灵敏度要求较低的项目；gica具有操作简单，检测速度快等优点，但也存在灵敏度低，试剂不稳定，重复性较差，难以进行定量的缺点；clia法是在酶联免疫分析法基础上发展起来的一种免疫检测技术，具有灵敏度高、检测线性范围宽、操作简便，自动化程度高等优势。
3、中国
4、中国另一专利技术专利cn102359958a公开了一种pct化学发光法检测试剂盒，是以发光微粒偶联抗体作为固定分离相，生物素 链霉亲和素多级放大体系，用辣根过氧化物酶为催化酶催化发光底物发光，但其检测灵敏度仅到0.05ng/ml。
5、鉴于此，本领域迫切需要一种精密度高、特异性强、检测范围宽的降钙素原测定试剂盒。
技术实现思路
1、本专利技术针对现有技术存在的问题，提供了一种降钙素原的均相化学发光法测定试剂盒。
2、为实现上述目的，本专利技术采用的技术方案如下：
3、一种降钙素原测定试剂盒，包括彼此独立的r1试剂和r2试剂，所述r1试剂包括降钙素原单克隆抗体包被的发光微粒、表面活性剂a和稳定剂，所述r2试剂包括生物素标记的降钙素原单克隆抗体和表面活性剂b，所述表面活性剂a包括质量比为1-2:1的吐温80和pvpk30的混合物，所述表面活性剂b包括质量比为1:2-4的曲拉通x-100和聚氧乙烯烷基醚emulgen 709的混合物。
4、优选地，所述表面活性剂a包括质量比为1-1.5:1的吐温80和pvp k30的混合物，所述表面活性剂b包括质量比为1:2-3的曲拉通x-100和聚氧乙烯烷基醚emulgen 709的混合物。
5、优选地，所述稳定剂包括质量比为2-10:1-4:1的牛血清白蛋白、明胶和乙二胺四乙酸四钠的混合物。
6、更优选地，所述稳定剂包括质量比为2-5:1-3:1的牛血清白蛋白、明胶和乙二胺四乙酸四钠的混合物。
7、优选地，所述降钙素原测定试剂盒还包括链霉亲和素包被的感光微球，所述r1试剂包括缓冲液，所述r2试剂包括渗透剂和防腐剂。
8、优选地，所述缓冲液选自磷酸缓冲液、tris缓冲液、mops缓冲液、pbs缓冲液、mes缓冲液和甘氨酸缓冲液中的一种或多种。
9、优选地，所述缓冲液的ph为6.5-7.5。
10、优选地，所述渗透剂选自氯化钠、β-环糊精和羧甲基纤维素中的一种或多种。
11、优选地，所述防腐剂选自苯酚、苯甲酸钠和叠氮钠中的一种或多种。
12、优选地，所述降钙素原测定试剂盒包括彼此独立的r1试剂、r2试剂，所述r1试剂包括降钙素原单克隆抗体包被的发光微粒30-40mg/l、表面活性剂a 2-3g/l、稳定剂0.5-1g/l和缓冲液4-6g/l，所述r2试剂包括生物素标记的降钙素原单克隆抗体6-10mg/l和表面活性剂b 2-4ml/l、渗透剂4-6g/l和防腐剂1-1.5ml/l。
13、优选地，所述降钙素原测定试剂盒的使用方法为通过全自动化学发光免疫分析仪利用终点法进行测定，检测主波长为680nm，其中r1试剂和r2试剂的体积比为1-2:1。
14、本专利技术还提供了上述降钙素原测定试剂盒在非诊断目的测定血清中降钙素原中的应用。
15、本专利技术降钙素原测定试剂盒采用双抗体夹心免疫法原理，是一种均相免疫反应。
16、第1次孵育：加入一定量待检标本，一份pct单克隆抗体包被的发光微球和生物素标记的pct单克隆抗体一起孵育，反应形成抗体-抗原-抗体夹心复合物。
17、第2次孵育：加入链霉亲和素包被的感光微球后，该复合物通过生物素与链霉亲和素的相互作用与之特异性结合。
18、在均相环境中，680nm激光激发条件下，微粒之间进行了单线态氧的转移，最终产生615nm光信号，通过单光子计数器测定光信号值后通过检测仪的定标曲线得到最后的检测结果，定标曲线通过6点定标拟合计算，总检测时长为12min。
19、相对于现有技术，本专利技术具有以下有益效果：
20、(1)本专利技术在实施过程中意外发现，当特定质量比的吐温80和pvp k30组成的表面活性剂a和特定质量比的曲拉通x-100和聚氧乙烯烷基醚emulgen 709组成的表面活性剂b，以一定含量存在于r1试剂和r2试剂中，能够发挥相对较好的增强效果。
21、(2)本专利技术在r1试剂中加入了稳定剂，即质量比为2-10:1-4:1的牛血清白蛋白、明胶和乙二胺四乙酸四钠，在减少防腐剂添加量的基础上提高了降钙素原测定试剂盒的稳定性。
22、(3)本专利技术通过合理控制r1试剂和r2试剂中各物质的含量，提高了降钙素原测定试剂盒的准确性、精密度、稳定性和特异性，且线性关系好，符合临床需求。
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1.一种降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述降钙素原测定试剂盒包括彼此独立的R1试剂、R2试剂，所述R1试剂包括降钙素原单克隆抗体包被的发光微粒、表面活性剂A和稳定剂，所述R2试剂包括生物素标记的降钙素原单克隆抗体和表面活性剂B，所述表面活性剂A包括质量比为1-2:1的吐温80和PVP K30的混合物，所述表面活性剂B包括质量比为1:2-4的曲拉通x-100和聚氧乙烯烷基醚EMULGEN 709的混合物。
2.根据权利要求1所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂A包括质量比为1-1.5:1的吐温80和PVP K30的混合物，所述表面活性剂B包括质量比为1:2-3的曲拉通x-100和聚氧乙烯烷基醚EMULGEN 709的混合物。
3.根据权利要求1所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述稳定剂包括质量比为2-10:1-4:1的牛血清白蛋白、明胶和乙二胺四乙酸四钠的混合物。
4.根据权利要求3所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述稳定剂包括质量比为2-5:1-3:1的牛血清白蛋白、明胶和乙二胺四乙酸四钠的混合物。
5
6.根据权利要求5所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述缓冲液选自磷酸缓冲液、Tris缓冲液、MOPS缓冲液、PBS缓冲液、MES缓冲液和甘氨酸缓冲液中的一种或多种，所述缓冲液的pH为6.5-7.5。
7.根据权利要求5所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述渗透剂选自氯化钠、β-环糊精和羧甲基纤维素中的一种或多种。
8.根据权利要求5所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在，所述防腐剂选自苯酚、苯甲酸钠和叠氮钠中的一种或多种。
9.根据权利要求5所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述降钙素原测定试剂盒包括彼此独立的R1试剂、R2试剂和链霉亲和素包被的感光微球，所述R1试剂包括降钙素原单克隆抗体包被的发光微粒30-40mg/L、表面活性剂A 2-3g/L、稳定剂0.5-1g/L和缓冲液4-6g/L，所述R2试剂包括生物素标记的降钙素原单克隆抗体6-10mg/L和表面活性剂B 2-4mL/L、渗透剂4-6g/L和防腐剂1-1.5mL/L。
10.一种如权利要求1-9任一项所述的降钙素原测定试剂盒在非诊断目的测定血清中降钙素原中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述降钙素原测定试剂盒包括彼此独立的r1试剂、r2试剂，所述r1试剂包括降钙素原单克隆抗体包被的发光微粒、表面活性剂a和稳定剂，所述r2试剂包括生物素标记的降钙素原单克隆抗体和表面活性剂b，所述表面活性剂a包括质量比为1-2:1的吐温80和pvp k30的混合物，所述表面活性剂b包括质量比为1:2-4的曲拉通x-100和聚氧乙烯烷基醚emulgen 709的混合物。
2.根据权利要求1所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述表面活性剂a包括质量比为1-1.5:1的吐温80和pvp k30的混合物，所述表面活性剂b包括质量比为1:2-3的曲拉通x-100和聚氧乙烯烷基醚emulgen 709的混合物。
3.根据权利要求1所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述稳定剂包括质量比为2-10:1-4:1的牛血清白蛋白、明胶和乙二胺四乙酸四钠的混合物。
4.根据权利要求3所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述稳定剂包括质量比为2-5:1-3:1的牛血清白蛋白、明胶和乙二胺四乙酸四钠的混合物。
5.根据权利要求1-4任一项所述的降钙素原测定试剂盒，其特征在于，所述降钙素原测定试剂盒还包括链霉...
【专利技术属性】
技术研发人员：商忆文，黄金法，杨熠堃，
申请(专利权)人：浙江夸克生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：
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