一种甲状腺球蛋白(TG)测试试剂盒及其测试方法技术

技术编号:14563725 阅读:112 留言:0更新日期:2017-02-05 20:39
本发明专利技术公开了一种甲状腺球蛋白(TG)的测试试剂盒,该试剂盒由磁分离试剂,试剂R1,试剂R2,标准品,质控品,校准品,清洗浓缩液,稀释液及发光底物组成,本发明专利技术还公开了该试剂盒的制备方法。本发明专利技术试剂盒将化学发光技术与免疫磁微粒相结合,提供了一种接近均相的反应体系,与现有酶联免疫的技术相比,本发明专利技术具有更高的特异性,灵敏度,获得检测结果的时间短,操作方式简便,检测结果准确可靠,大大降低了产品成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及测定血清的试剂盒及其测试方法,尤其是涉及测定血清中甲状腺球蛋白含量的试剂盒及其测试方法。
技术介绍
甲状腺球蛋白(Thyroglobulin,TG),是甲状腺滤泡上皮分泌的660ku糖蛋白,每个TG约有2个甲状腺素(T4)和0.5个三碘甲腺原氨酸(T3)分子,储存在滤泡腔中。溶酶体水解TG表面T4、T3并使之释放入血,同时少量的TG也释放入血,部分TG经甲状腺淋巴管分泌入血。血循环中的TG被肝脏的巨噬细胞清除。血清TG的改变较多见于甲状腺部位的恶性肿瘤,如TG在甲状腺滤泡状癌、甲状腺乳头状癌和间变癌都可出现不同程度的升高;而甲状腺髓样癌血TG可正常或降低。前者主要是因为甲状腺的破坏以及肿瘤组织分泌一定量的TG,而致血中TG升高;后者的肿瘤组织来源于甲状腺C细胞,而非甲状腺上皮细胞,故其血清TG并不升高。甲状腺功能亢进症、甲状腺瘤、亚急性甲状腺炎以及慢性淋巴细胞性甲状腺炎等甲状腺疾病都可出现血中TG水平升高。从检测的角度上来说,目前临床上用于测定TG的方法主要放免法、ELISA法、化学发光法等。过去以放免为代表的甲状腺球蛋白(TG)测定试剂盒受方法学的限制,其灵敏度和抗干扰能力严重不足,存在很大的弊端,已基本上退出市场;酶联免疫法(ELISA)作为定性检测的方法,抗原、抗体的结合反应是在固相(ELISA板反应孔)表面进行的,其灵敏度、特异性均较好,且经济实惠,所以是应用得最广、最多的方法。化学发光法其灵敏度高,从化学角度和自动化程度看,化学发光法优于酶联免疫法。这些方法虽然都有很多优点,但在检测的灵敏度、特异性、稳定性、检测用时等方面还有待进一步提高。
技术实现思路
有鉴于此,本专利技术所要解决的技术问题是克服上述现有技术的不足,提供一种特异性强,灵敏度高,获得检测结果的时间短,操作方式简便,检测结果稳定可靠的甲状腺球蛋白(TG)的测试试剂盒及其测试方法。为达到上述目的,本专利技术提供如下技术方案:一种甲状腺球蛋白测试试剂盒,该试剂盒由磁分离试剂,试剂R1,试剂R2,标准品,质控品,校准品,清洗浓缩液,稀释液及发光底物组成,其中:磁分离试剂:标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球,所述标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球浓度为167μg/ml;试剂R1:含有碱性磷酸酶标记的TG抗体,所述碱性磷酸酶标记的TG抗体的浓度为0.3μg/ml;试剂R2:含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液;标准品,质控品和校准品:含有一定量TG抗原的小牛血清溶液,所述标准品的浓度为0(S0)、2(S1)、10(S2)、100(S3)、250(S4)、500(S5)ng/ml,所述质控品浓度为6,250ng/ml,所述校准品浓度为10,250ng/ml;清洗浓缩液:含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液;稀释液:含有小牛血清的溶液;发光底物:金刚烷的衍生物IUMIPHOS530,所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml;一种甲状腺球蛋白测试试剂盒,由下述体积分数组成的:磁分离试剂4%-6%,试剂R16%-8%,试剂R26%-8%,标准品4%-6%,质控品1%-3%,校准品2%-4%,清洗浓缩液15%-30%,稀释液10%-25%,发光底物25%-40%。优选地,所述试剂盒由下述体积分数组成:磁分离试剂4%,试剂R16%,试剂R26%,标准品4%,质控品1%,校准品4%,清洗浓缩液15%,稀释液25%,发光底物35%。优选地,所述试剂盒由下述体积分数组成:磁分离试剂4.76%,试剂R17.14%,试剂R27.14%,标准品4.76%,质控品1.59%,校准品3.17%,清洗浓缩液23.82%,稀释液15.87%,发光底物31.75%。优选地,所述试剂盒由下述体积分数组成:磁分离试剂6%,试剂R18%,试剂R28%,标准品6%,质控品3%,校准品2%,清洗浓缩液30%,稀释液10%,发光底物27%。所述试剂盒中各组分按照如下制备方法制得:第一步:磁分离试剂的制备过程一、磁珠缓冲液配制操作规程:(1)称取Tris4.58g和NaCl6.81g于1L容器中,称取0.96gTween-20于20ml容器中加适量水使其完全溶解后,倒入上述容器中;(2)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后,倒入上述1L容器中;然后在1L容器中加入800ml纯化水,充分搅拌,使试剂完全溶解;(3)调节PH计测量其PH值;用4MHCl或4MNaOH调PH,测量其PH在7.95-8.05之间即符合要求;(4)称取BSAV(牛血清白蛋白(第五组分))3g倒入上述1L容器中;(5)最后定容至1000ml,测PH值,范围在7.95-8.05之间即符合要求,用0.2um滤器过滤即得;过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存;二、磁分离试剂的配制:(1)将1.0mgDSS(辛二酸二琥珀酰亚胺)溶于50ulDMSO中,即浓度为20mg/mL;取2mgTG抗体溶于PH9.5的0.1mol/LPB缓冲液中至总体积为1ml;(2)计算DSS的投入量,按照以下公式计算:(抗体质量/16000)×10×368/CDSS),其中CDSS指代DSS的物质的量浓度mol/L;(3)用移液枪吸取相应体积的DSS加入到步骤1的抗体溶液中,置室温90min;(4)将步骤3抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中,然后放入到sigma2-16k高速冷冻离心机中在3000g的离心力下浓缩约30min至体积为0.5ml;(5)取0.5ml磁珠,所述的磁珠直径在0.9-1.5μm之间,加入5ml反应杯中,放入专用试管架,经磁铁吸附2分钟后吸取上清;(6)每次加入1.5mlPH9.50.1mol/LPB,混匀30秒,上架,去上清,重复操作3次;将步骤4获得的抗体溶液加入到磁珠中,混匀后室温反应4小时,保持混匀状态;(7)加入0.3ml1mol/L的Tris溶液37℃15分钟,其中Tris的加样量为1mg抗体加0.15mlTris;(8)每次加入1.5mlPH7.20.1mol/LPB清洗已经标记的磁珠,混匀30秒,上架,去上清,重复操作3次;(9)用100ml磁珠保存液将磁珠转入125ml玻璃瓶,即为0.05%的TG磁分离试剂;(10)将步骤9获得的磁分离试剂用磁珠缓冲液按照1:1的比例混匀,即得本专利技术试剂盒中磁分离试剂。第二步:试剂R1的制备过程一、试剂R1稀释液配制操作规程:...

【技术保护点】
一种甲状腺球蛋白测试试剂盒,该试剂盒由磁分离试剂,试剂R1,试剂R2,标准品,质控品,校准品,清洗浓缩液,稀释液及发光底物组成,其中:磁分离试剂:标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球,所述标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球浓度为167μg/ml;试剂R1:含有碱性磷酸酶标记的TG抗体,所述碱性磷酸酶标记的TG抗体的浓度为0.3μg/ml;试剂R2:含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液;标准品,质控品和校准品:含有一定量TG抗原的小牛血清溶液,所述标准品的浓度为0(S0)、2(S1)、10(S2)、100(S3)、250(S4)、500(S5)ng/ml,所述质控品浓度为6,250ng/ml,所述校准品浓度为10,250ng/ml;清洗浓缩液:含有Tween‑20和Proclin‑300的缓冲液;稀释液:含有小牛血清的溶液;发光底物:金刚烷的衍生物IUMIPHOS530,所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml。

【技术特征摘要】
1.一种甲状腺球蛋白测试试剂盒,该试剂盒由磁分离试剂,试剂R1,试剂R2,标准品,质
控品,校准品,清洗浓缩液,稀释液及发光底物组成,其中:磁分离试剂:标记有小鼠抗人TG
的单克隆抗体的纳米磁性微球,所述标记有小鼠抗人TG的单克隆抗体的纳米磁性微球浓度
为167μg/ml;试剂R1:含有碱性磷酸酶标记的TG抗体,所述碱性磷酸酶标记的TG抗体的浓度
为0.3μg/ml;试剂R2:含有牛γ球蛋白质组分的缓冲液;标准品,质控品和校准品:含有一定
量TG抗原的小牛血清溶液,所述标准品的浓度为0(S0)、2(S1)、10(S2)、100(S3)、250(S4)、
500(S5)ng/ml,所述质控品浓度为6,250ng/ml,所述校准品浓度为10,250ng/ml;清洗浓缩
液:含有Tween-20和Proclin-300的缓冲液;稀释液:含有小牛血清的溶液;发光底物:金刚
烷的衍生物IUMIPHOS530,所述金刚烷的衍生物IUMIPHOS530的浓度为10μg/ml。
2.根据权利要求1所述的一种甲状腺球蛋白测试试剂盒,其特征在于:所述试剂盒由下
述体积分数组成:磁分离试剂4%-6%,试剂R16%-8%,试剂R26%-8%,标准品4%-6%,
质控品1%-3%,校准品2%-4%,清洗浓缩液15%-30%,稀释液10%-25%,发光底物25%-
40%。
3.根据权利要求2所述的一种甲状腺球蛋白测试试剂盒,其特征在于:所述试剂盒由下
述体积分数组成:磁分离试剂4%,试剂R16%,试剂R26%,标准品4%,质控品1%,校准品
4%,清洗浓缩液15%,稀释液25%,发光底物35%。
4.根据权利要求2所述的一种甲状腺球蛋白测试试剂盒,其特征在于:所述试剂盒由下
述体积分数组成:磁分离试剂4.76%,试剂R17.14%,试剂R2,7.14%,标准品4.76%,质控
品1.59%,校准品3.17%,清洗浓缩液23.82%,稀释液15.87%,发光底物31.75%。
5.根据权利要求2所述的一种甲状腺球蛋白测试试剂盒,其特征在于:所述试剂盒由下
述体积分数组成:磁分离试剂6%,试剂R18%,试剂R28%,标准品6%,质控品3%,校准品
2%,清洗浓缩液30%,稀释液10%,发光底物27%。
6.根据权利要求1-5所述的一种甲状腺球蛋白测试试剂盒,其特征在于:所述试剂盒中
各组分按照如下制备方法制得:
第一步:磁分离试剂的制备过程
一、磁珠缓冲液配制操作规程:
(1)称取Tris4.58g和NaCl6.81g于1L容器中,称取0.96gTween-20于20ml容器中加适
量水使其完全溶解后,倒入上述容器中;
(2)用移液器将Proclin-300量取0.2ml于10ml纯化水的烧杯中完全溶解后,倒入上述
1L容器中;然后在1L容器中加入800ml纯化水,充分搅拌,使试剂完全溶解;
(3)调节PH计测量其PH值;用4MHCl或4MNaOH调PH,测量其PH在7.95-8.05之间即符
合要求;
(4)称取BSAV(牛血清白蛋白(第五组分))3g倒入上述1L容器中;
(5)最后定容至1000ml,测PH值,范围在7.95-8.05之间即符合要求,用0.2um滤器过滤
即得;过滤完后贴好标签于2-8℃冷库贮存;
二、磁分离试剂的配制:
(1)将1.0mgDSS(辛二酸二琥珀酰亚胺)溶于50ulDMSO中,即浓度为20mg/mL;取2mgTG
抗体溶于PH9.5的0.1mol/LPB缓冲液中至总体积为1ml;
(2)计算DSS的投入量,按照以下公式计算:(抗体质量/16000)×10×368/CDSS),其中
CDSS指代DSS的物质的量浓度mol/L;
(3)用移液枪吸取相应体积的DSS加入到步骤1的抗体溶液中,置室温90min;
(4)将步骤3抗体溶液加入到Centricon-10浓缩管中,然后放入到sigma2-16k高速冷冻
离心机中在3000g的离心力下浓缩约30min至体积为0.5ml;
(5)取0.5ml磁珠,所述的磁珠直径在0.9-1.5μm之间,加入5ml反应杯中,放入专用试管
架,经磁铁吸附2分钟后吸取上清;
(6)每次加入1.5mlPH9.50.1mol/LPB,混匀30秒,上架,去上清,重复操作3次;将步骤
4获得的抗体溶液加入到磁珠中,混匀后室温反应4小时,保持混匀状态;
(7)加入0.3ml1mol/L的Tris溶液37℃15分钟,其中Tris的加样量为1mg抗体加
0.15mlTris;
(8)每次加入1.5mlPH7.20.1mol/LPB清洗已经标记的磁珠,混匀30秒,上架,去上
清,重复操作3次;
(9)用100ml磁珠保存液将磁珠转入125ml玻璃瓶,即为0.05%的TG磁分离试剂;
(10)将步骤9获得的磁分离试剂用磁珠缓冲液按照1:1的比例混匀,即得本发明试剂盒
中磁分离试剂。
第二步:试剂R1的制备过程
一、试剂R1稀释液配制操作规程:
(1)取Tris6.06g、NaCl13.0g、Zncl20.05g、Proclin-3000.2ml和MgCl20.05g于烧
瓶中;然后在烧瓶中加入800ml纯化水,充分搅拌,使试剂完全溶解;
(2)用4MHCl或4MNaOH调PH,测量使PH在7.35-7.45范围内;
(3)称取BSAV3g倒入上述烧瓶中;
(4)最后定容至1000ml,测PH值,范围在7.35-7.45之间即符合要求,用0.2um滤器过滤;

【专利技术属性】
技术研发人员:朱驰王键
申请(专利权)人:北京豪迈生物工程有限公司
类型:发明
国别省市:北京;11

网友询问留言 已有0条评论
  • 还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。

1