本发明专利技术提供一种脑脊液和尿蛋白液体单试剂检测试剂盒及其制备方法，属于体外诊断试剂领域。解决现有的脑脊液和尿蛋白液体单试剂检测试剂盒精密度和稳定性低,试剂污染仪器等的问题。所述的试剂盒由单试剂组成。本发明专利技术还提供一种脑脊液和尿蛋白液体单试剂检测试剂盒的制备方法。所述试剂中使用二甲基亚砜溶解邻苯三酚红，溶解前，在二甲亚砜中加入TritonX-305，再加入邻苯三酚红，可有效消除试剂粘比色杯，避免比色杯污染，且使邻苯三酚红分散均匀，提高了试剂的灵敏度和精密度。所述试剂中加入2-甲酰-1，1-二甲基肼，使邻苯三酚红钼与蛋白质形成的蓝紫色复合物颜色明显变深，提高试剂灵敏度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术提供，属于涉及体外诊断试 剂领域。
技术介绍
目前市场上常用的脑脊液和尿蛋白分析方法有邻苯三酚红钼法、双缩脲法和磺基 水杨酸比浊法。双缩脲是由两分子尿素加热缩合而成的化合物，双缩脲在碱性条件下与硫 酸铜生成紫红色络合物，蛋白质分子中含有肽键，与双缩脲结构类似，故蛋白质与碱性硫酸 铜也能生成紫红色络合物，在一定条件下其颜色深浅与蛋白质浓度成正比，可用来蛋白质 定量。但该法无论手工法还是试剂盒，在测定低值时都存在测值偏高，偏差大等问题，尤其 在测定随机尿样时，由于随机尿样中蛋白含量约为10-140mg/L，用该法检测准确度低，且尿 样用量大。 磺基水杨酸比浊法是在略低于蛋白质等电点的pH条件下，蛋白质带有正电荷的氨 基与带负电荷的磺基水杨酸根结合，形成不溶性蛋白质盐而沉淀。其浊度的变化与酸性沉 淀剂的化学性质、温度及酸的浓度等因素均影响测定，且抗干扰性能差，一般用于定性，很 少用于定量。 目前市场上的试剂盒都存在精确度不够，低值测试出现负值，反应生成物粘性大， 易沾比色杯，造成仪器污染，降低仪器使用寿命。
技术实现思路
本专利技术提供一种脑脊液和尿蛋白液体单试剂，提供了 一种可在全自动生化分析仪 上适用的脑脊液和尿蛋白定量检测试剂盒，本专利技术的脑脊液和尿蛋白定量检测试剂盒通过 不同于现有技术的药品和配制方法，使该试剂更稳定，分散性更好，检测更准确，且不会污 染损伤仪器，线性范围达到2-3000mg/L。 本专利技术提供一种脑脊液和尿蛋白液体单试剂的制备方法，适用于工业化生产。 本专利技术所述的一种脑脊液和尿蛋白液体单试剂，其特征在于是由以下药物按重量 份数比制成的： 丁二酸-苯甲酸钠缓冲液:50mmol/L、邻苯三酚红:0.01g-0.1g、二甲亚砜:20-100 ml、 TritonX-305:5-20 ml、草酸钠：1 · 39-5 · 56 g、2-甲酰-1，1-二甲基肼:0 · 09-0 · 54g。 本专利技术提供一种脑脊液和尿蛋白液体单试剂的制备方法，包括以下步骤： 称取5.94g丁二酸加入到1L纯化水中，搅拌溶解，再加入苯甲酸钠0.5g，搅拌溶解，HC1 调节pH到2.0-3.5作为缓冲液;量取TritonX-305 5-20ml加入到20-100ml二甲亚砜中，充分 搅拌混匀，再加入0.01-0. lg邻苯三酚红，搅拌至完全溶解，加入到丁二酸-苯甲酸钠缓冲液 中，再依次加入0.012-0.0484g钼酸钠、1.39-5.56g草酸钠、0.09-0.54g 2-甲酰-1，1-二甲 基餅。 本专利技术所使用的溶剂是二甲亚砜，在二甲亚砜中加入适量TritonX-305，两种药品 协同作用，有助于邻苯三酚红的溶解，对试剂的均一性和稳定性起到重要作用，有效改善测 试低值的准确性。 在加入2-甲酰-1，1-二甲基肼后，试剂反应的颜色变化更明显，进一步提高试剂灵 敏度，提高线性测值上线30%。 本专利技术的积极效果在于： 邻苯三酚红与钼酸结合形成红色复合物，在467nm有最大的吸收，此复合物在酸性条件 下与蛋白结合形成蓝紫色复合物，在598nm下有最大的吸收峰，通过测定598nm的峰值可就 算蛋白浓度。邻苯三酚红难溶于水，常用甲醇等有机溶剂溶解，但甲醇等有机溶剂溶解的邻 苯三酚红具有较大的粘性，且邻苯三酚红分散不均匀，在全自动生化分析仪上测试易出现 异常值，且粘比色杯，导致比色杯污染。 使用二甲基亚砜溶解邻苯三酚红，溶解前，在二甲亚砜中加入TritonX-305，再加 入邻苯三酚红，可有效消除试剂粘比色杯，且提高了试剂的灵敏度，具有更好的重复性，测 低值尿样和脑脊液时，偏差小，适用于全自动生化分析仪。邻苯三酚红钼法的优点在于试剂 配制后稳定，可以长期保存。本专利技术制备的试剂盒，在加入2-甲酰-1，1-二甲基肼后，邻苯三 酚红钼与蛋白质形成的蓝紫色复合物颜色明显变深，使得测值更加灵敏，线性较之前高出 30% 〇【附图说明】图1为实施例1至实施例3的线性测值散点图。【具体实施方式】通过以下实施例进一步举例描述本专利技术，并不以任何方式限制本专利技术，在不背离 本专利技术的技术解决方案的前提下，对本专利技术所作的本领域普通技术人员容易实现的任何改 动或改变都将落入本专利技术的权利要求范围之内。 实施例1: 称取5.94g丁二酸加入到1L纯化水中，搅拌溶解，再加入苯甲酸钠0.5g，搅拌溶解，HC1 调节pH到2.0(25°C)作为丁二酸-苯甲酸钠缓冲液备用。量取TritonX-305 5ml加入到20ml 二甲亚砜中，充分搅拌混匀，再加入O.Olg邻苯三酚红，搅拌至完全溶解，加入到丁二酸-苯 甲酸钠缓冲液中，再依次加入〇. 012g钼酸钠、1.39g草酸钠、0.09g 2-甲酰-1，1-二甲基肼。 实施例2 称取5.94g丁二酸加入到1L纯化水中，搅拌溶解，再加入苯甲酸钠0.5g，搅拌溶解，HC1 调节pH到2.6(25°C)作为丁二酸-苯甲酸钠缓冲液备用。量取TritonX-305 10ml加入到50ml 二甲亚砜中，充分搅拌混匀，再加入0.05g邻苯三酚红，搅拌至完全溶解，加入到丁二酸-苯 甲酸钠缓冲液中，再依次加入〇. 〇24g钼酸钠、2.78g草酸钠、0.27g 2-甲酰-1，1-二甲基肼。 实施例3 称取5.94g丁二酸加入到1L纯化水中，搅拌溶解，再加入苯甲酸钠0.5g，搅拌溶解，HC1 调节pH到3.5(25°C)作为丁二酸-苯甲酸钠缓冲液备用。量取TritonX-305 20ml加入到 100ml二甲亚砜中，充分搅拌混匀，再加入0 . lg邻苯三酚红，搅拌至完全溶解，加入到丁二 酸-苯甲酸钠缓冲液中，再依次加入〇.〇484g钼酸钠、5.56g草酸钠、0.54g 2-甲酰-1，1-二甲 基餅。 通过以下比较例证明本专利技术的积极效果所在： 比较例1: 配制以下成分试剂，检测参数同实施例1，配制步骤如下： 称取5.94g丁二酸加入到1L纯化水中，搅拌溶解，再加入苯甲酸钠0.5g，搅拌溶解，HC1 调节pH到2.6(25°C)作为丁二酸-苯甲酸钠缓冲液备用。在50ml二甲亚砜中，加入0.05g邻苯 三酚红，搅拌至完全溶解，加入到丁二酸-苯甲酸钠缓冲液中，再依次加入!^七 〇11父-30510ml、0·024g钼酸钠、2·78g草酸钠，0·27g 2-甲酰-1，1-二甲基肼。 比较例2: 配制以下成分试剂，检测参数同实施例1，配制步骤如下： 称取5.94g丁二酸加入到1L纯化水中，搅拌溶解，再加入苯甲酸钠0.5g，搅拌溶解，HC1 调节pH到2.6(25°C)作为丁二酸-苯甲酸钠缓冲液备用。量取TritonX-305 10ml加入到50ml 二甲亚砜中，充分搅拌混匀，再加入0.05g邻苯三酚红，搅拌至完全溶解，加入到丁二酸-苯 甲酸钠缓冲液中，再依次加入〇. 〇24g钼酸钠、2.78g草酸钠。 有关脑脊液和尿蛋白液体单检测试剂盒准确度的实验 根据各实施例1、实施例2、实施例3和比较例的要求设定自动生化仪参数，使用朗道校 准品定标，检测朗道质控品浓度，每个质控品测3次。CSF浓度检测结果见表1。 表 1从表1中可以看出，实施例测定值比比较例测定值更接近靶值，当不加入2-甲酰-1，1-二甲基肼时，测值明显偏低，而邻苯三酚本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种脑脊液和尿蛋白液体单试剂，其特征在于，所述的试剂盒由单试剂组成：缓冲液： 30‑100mmol/L；钼酸钠 0.012‑0.0484g ；邻苯三酚红 0.01g‑0.1g ；二甲亚砜 20‑100 ml；TritonX‑305 5‑20 ml；草酸钠 1.39‑5.56 g；2‑甲酰‑1，1‑二甲基肼 0.09‑0.54g。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：苏恩本，徐李鹏，刘玲，陈元安，牛莹莹，
申请(专利权)人：吉林基蛋生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：吉林;22
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