一种从玄参中分离出来的化合物及其制备方法、应用技术

本发明专利技术涉及一种从玄参中分离出来的化合物及其制备方法，还涉及它在生物医药中的应用。一种从玄参中分离出来的化合物，它是具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，该天然化合物结构新颖，该天然产物具有对肺癌具有治疗作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物医药领域，涉及一种从玄参中分离出来的化合物及其制备方法，还涉及它在生物医药中的应用。
技术介绍
玄参，中药名。为玄参科草本植物，可达1米余。支根数条，纺锤形或胡萝卜状膨大，粗可达3厘米以上。生于海拔1700米以下的竹林、溪旁、丛林及高草丛中。产河北(南部)、河南、山西、陕西(南部)、湖北、安徽、江苏、浙江、福建、江西、湖南、广东、贵州、四川。味甘、苦、咸，性微寒，有清热凉血，滋阴降火，解毒散结的功效。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种从玄参中分离出来的天然化合物，该天然化合物结构新颖，该天然产物具有对肺癌具有治疗作用。另外，本专利技术还提供一种上述化合物的制备方法。本专利技术的上述目的是通过下面的技术方案得以实现的：一种从玄参中分离出来的化合物，它是具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，上述化合物的制备方法，包含以下操作步骤：(a)将玄参粉碎，用65～85％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用6％乙醇洗脱8个柱体积，再用70％乙醇洗脱8个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1、25:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1、5:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75％的甲醇水溶液等度洗脱，收集8～14个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)。作为优选，所述大孔树脂为AB-8型大孔吸附树脂。上述化合物(Ⅰ)在制备治疗肺癌的药物中的应用。本专利技术的优点：本专利技术提供的一种结构新颖的天然产物，该天然产物单独作用时，对肺癌具有治疗作用；配以其他药物联合协同作用时，可以开发成治疗肺癌的药物。具体实施方式下面结合实施例进一步说明本专利技术的实质性内容，但并不以此限定本专利技术保护范围。实施例1：化合物(Ⅰ)分离制备及结构确证分离方法：(a)将玄参(3kg)粉碎，用75％乙醇热回流提取(20L×3次)，合并提取液，浓缩至无醇味(4L)，依次用石油醚(4L×3次)、乙酸乙酯(4L×3次)和水饱和的正丁醇(4L×3次)萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用AB-8型大孔树脂除杂，先用6％乙醇洗脱8个柱体积，再用70％乙醇洗脱8个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依次用体积比为50:1(8个柱体积)、25:1(8个柱体积)、15:1(8个柱体积)和5:1(10个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到4个组分；(d)步骤(c)中组分4用正相硅胶进一步分离，依次用体积比为10:1(8个柱体积)、5:1(10个柱体积)和2:1(5个柱体积)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脱得到3个组分；(e)步骤(d)中组分2用十八烷基硅烷键合的反相硅胶分离，用体积百分浓度为75％的甲醇水溶液等度洗脱，收集8～14个柱体积洗脱液，洗脱液减压浓缩得到化合物(Ⅰ)(纯度大于98％)。结构确证：HR-ESI-MS显示[M+H]+为m/z247.1259，结合核磁特征可得分子式为C15H18O3，不饱和度为7。核磁共振氢谱数据δH(ppm，CD2Cl2，500MHz)：H-1a(1.12，m)，H-1b(1.83，m)，H-2(1.84，m，2H)，H-4(5.71，s)，H-5(2.59，d，J＝10.6Hz)，H-9(2.18，m)，H-10(1.67，m)，H-12a(5.41，t，J＝2.0Hz)，H-12b(5.02，t，J＝2.0Hz)，H-13a(4.35，dd，J＝13.4，2.0Hz)，H-13b(4.58，dd，J＝13.4，2.0Hz)，H-14(1.02，d，J＝6.4Hz)，H-15(1.84，s)；核磁共振碳谱数据δC(ppm，CD2Cl2，125MHz)：26.8(CH2，1-C)，30.1(CH2，2-C)，135.9(C，3-C)，145.1(CH，4-C)，48.2(CH，5-C)，79.2(C，6-C)，111.1(C，7-C)，204.2(C，8-C)，36.6(CH，9-C)，40.3(CH，10-C)，146.2(C，11-C)，112.1(CH2，12-C)，68.2(CH2，13-C)，14.7(CH3，14-C)，18.4(CH3，15-C)。该化合物的氢谱中有一个乙烯基甲基信号[δH1.84(3H，br，s，Me-15)]，一个双峰甲基信号[δH1.02(3H，d，J＝6.4Hz，Me-14)]，一个末端双键质子信号[δH5.41(1H，t，J＝2.0Hz，H-12a)和5.02(1H，t，J＝2.0Hz，H-12b)]，一个含氧亚甲基质子信号[δH4.35(1H，dd，J＝13.4，2.0Hz，H-13a)和4.58(1H，dd，J＝13.4，2.0Hz，H-13b)]以及一个烯属次甲基质子信号[δH5.71(1H，br，s，H-4)]。该化合物的碳谱显示15个碳信号，包括两个甲基，四个亚甲基(一个烯烃碳，一个连氧碳)，四个次甲基(一个烯烃碳)以及五个季碳(两个烯烃碳，一个酮羰基和两个连氧季碳)。综合高分辨质谱和核磁数据显示，该化合物可能为一个倍半萜类化合物。查阅文献可知，该化合物和已知化合物LyophylloneB具有相似的结构。比较两者核磁数据可知，相较于已知化合物，新化合物中C-8位连氧碳信号的缺失的同时多了一个酮羰基碳信号。在该化合物的HMBC谱中，H-14/C-8，H-9/C-8，H-10/C-8的相关性说明多出来的酮羰基是位于C-8位的。解析至此，已解析出7个不饱和度中的6个，故而该化合物中还有一个额外的环。分析核磁数据可以发现，该化合物C-6和C-7位的碳谱数据发生很大的变化，都向高场位移。结合高分辨，以及核磁谱图，可以确定在该化合物的C-6和C-7位存在一个三元氧环。NOESY谱中，H-10/H3-14，H-5/H-9之间的相关性说明H-10以及14-CH3都是位于β位的。此外，五元含氧环与六元环是顺式稠合的，同时C-6和C-7之间的三元氧环是α型的。综合氢谱、碳谱、HMBC谱和NOESY谱，以及文献关于相关类型核磁数据，可基本确定该化合物如下所示，立体构型进一步通过ECD试验确定，理论值与实验值基本一致。该化合物化学式及碳原子编号如下：实施例2：药理作用本实施例使用右腋皮下接种肺癌瘤株细胞建立lewis肺癌小鼠模型，测定各组的抑瘤率和Bcl-2及Bax表达水平，观察药物上调Bax、下调Bcl-2的表达、诱导肿瘤细胞凋亡来抑制肿瘤生长的抗肿瘤作用。1、材料与方法1.1动物C57BL/6纯系小鼠，雄性6～8周，(20±2)g，北京维通利华公司动物实验中心。1.2试剂与样品盐酸纳美芬购自中国药品生物制品检定所。化合物(Ⅰ)自制，制备本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种从玄参中分离出来的化合物，其特征在于：它是具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，

【技术特征摘要】
1.一种从玄参中分离出来的化合物，其特征在于：它是具有下述结构式的化合物(Ⅰ)，2.权利要求1所述的化合物的制备方法，其特征在于，包含以下操作步骤：(a)将玄参粉碎，用65～85％乙醇热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(b)步骤(a)中正丁醇萃取物用大孔树脂除杂，先用6％乙醇洗脱8个柱体积，再用70％乙醇洗脱8个柱体积，收集70％洗脱液，减压浓缩得70％乙醇洗脱浓缩物；(c)步骤(b)中70％乙醇洗脱浓缩物用正相硅胶分离，依...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵浩浩，
申请(专利权)人：赵浩浩，
类型：发明
国别省市：浙江;33