本发明专利技术公开了一种测定D‑3‑羟丁酸的试剂盒及其制备方法，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：缓冲液20~180mmol/L、D‑3‑羟丁酸脱氢酶0.1~4.9KU/L、聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物0.1‑6.0mL/L、防腐剂0.01~0.059 mmol/L，其溶剂为纯化水，试剂R2：草酸盐10~40mmol/L、NAD+0.1~4.9mmol/L、防腐剂、0.01~0.059 mmol/L，其溶剂为纯化水，本发明专利技术还公开了上述测定D‑3‑羟丁酸的试剂盒的制备方法和使用方法，包括以下步骤：按照组分含量配制好试剂：将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；根据吸光度变化值计算出样本中的D‑3‑羟丁酸的浓度。本发明专利技术具有无污染、稳定性好等优点。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及医学及生物化学
，具体来说是一种测定D-3-羟丁酸的试剂盒及其制备方法。
技术介绍
糖尿病是一种常见病、多发病，其发病率呈现逐年上升趋势。当机体代谢紊乱发展至脂肪分解加速，血清酮体积聚超过正常水平时称为酮血症，其临床表现成为酮症；当酮酸积聚而发生代谢性酸中毒时称为酮症酸中毒，如病情严重至发生昏迷时，则成为“糖尿病性昏迷”。而酮体的主要成分是D-3-羟丁酸，约占酮体总量的78%，是糖尿病酮症酸中毒的主要物质，早期缺乏典型的临床症状，而传统的酮体检测法为亚硝基铁氰化钠法，此方法是半定量的，其检测方法虽然具有特异性，然而其主要测定的是乙酰乙酸和丙酮，敏感性低及不能定量，为了及时、准确地判断病情，需要有一个灵敏度高且特异性强的指标，D-3-羟丁酸测定方法的建立和应用，使其逐渐成为糖尿病酮症早期诊断的重要手段。一般，D-3-羟丁酸检测方法有酶法、气相色谱法、放射化学法等，放射化学法有放射性污染，气相色谱法操作复杂，且耗时较长，均不能快速且大量的应用于临床检测；酶法的试剂稳定性不佳，因此需要改进。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是为了克服放射化学法有放射性污染、气相色谱法操作复杂和耗时较长以及酶法的试剂稳定性不佳的缺陷，而提供一种测定D-3-羟丁酸的试剂盒及其制备方法。本专利技术解决上述技术问题提供的技术方案是：本专利技术公开了一种测定D-3-羟丁酸的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：缓冲液 20~180mmol/LD-3-羟丁酸脱氢酶 0.1~4.9KU/L聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 0.1-6.0mL/L防腐剂 0.01~0.059 mmol/L其溶剂为纯化水。试剂R2：草酸盐 10~40mmol/LNAD+ 0.1~4.9mmol/L防腐剂 0.01~0.059 mmol/L其溶剂为纯化水。作为优选，本专利技术公开了一种测定D-3-羟丁酸的试剂盒，包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：缓冲液 100mmol/LD-3-羟丁酸脱氢酶 2.5KU/L聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 3.0mL/L防腐剂 0.035 mmol/L其溶剂为纯化水。试剂R2：草酸盐 25mmol/LNAD+ 2.5mmol/L防腐剂 0.035 mmol/L其溶剂为纯化水。作为优选，所述的试剂R1中，所述的缓冲液选自磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、1，4-哌嗪二乙磺酸缓冲液、4-羟乙基哌嗪丙磺酸缓冲液、4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液、三羟甲基甲胺基丙磺酸缓冲液、甘氨酸缓冲液、硼酸缓冲液、3-吗啉丙磺酸缓冲液、3-（N-吗啉基）-2-羟丙基磺酸缓冲液、2-吗啉乙磺酸缓冲液、磷酸二氢钠缓冲液中的一种或多种任意比例的混合，所述的试剂R1中，所述的防腐剂为叠氮钠，所述的试剂R2中，所述的防腐剂为叠氮钠。作为优选，所述的试剂R1中，所述的缓冲液的pH值为6～9。作为优选，本专利技术还公开了上述测定D-3-羟丁酸的试剂盒的制备方法和使用方法，包括以下步骤：（a）按照下列组分含量配制好试剂：试剂R1：缓冲液 20~180mmol/LD-3-羟丁酸脱氢酶 0.1~4.9KU/L聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 0.1-6.0mL/L防腐剂 0.01~0.059 mmol/L其溶剂为纯化水。试剂R2：草酸盐 10~40mmol/LNAD+ 0.1~4.9mmol/L防腐剂 0.01~0.059 mmol/L其溶剂为纯化水。（b）将待测样本与试剂R1和试剂R2混合，使其充分反应；（c）用全自动生化分析仪测定反应后的吸光度差值；（d）根据吸光度变化值计算出样本中的D-3-羟丁酸的浓度。本专利技术的检测原理是：本试剂通过D-3-羟丁酸在D-3-羟丁酸脱氢酶的催化下，D-3-羟丁酸被氧化，生成乙酰乙酸，同时NAD+被还原成NADH，NADH在340nm波长下有特定吸收峰，因此在340nm波长下检测NADH的吸光度变化率，计算出血清中D-3-羟丁酸的浓度。D-3-羟丁酸浓度（mmol/L）=CS ×（mmol/L）ΔAU/min 为待测样品平均每分钟的吸光度变化值ΔAB/min 为校准液平均每分钟的吸光度变化值CS 为校准液中D-3-羟丁酸的浓度与现有技术相比，本专利技术具有以下有益优点：专利技术所采用的酶法，操作简单，耗时短，且可快速大量的应用于临床诊断，没有放射性化学元素产生的放射性污染，并且改进了酶法试剂保存时间短，不稳定的现象，在稳定性上有了更进一步的提高，通过添加聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物，使得D-3-羟丁酸脱氢酶稳定性得到了提高，从而使得整个试剂的稳定性得到了提高，继而也就有效的提高的整个试剂的测量准确度。具体实施方式以下结合具体实施例进一步说明，但本专利技术并不仅限于这些实施例。实施例1本专利技术的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中试剂R1：三羟甲基氨基甲烷缓冲液 100mmol/LD-3-羟丁酸脱氢酶 2.5KU/L聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 3.0mL/L叠氮钠 0.035 mmol/L其溶剂为纯化水。试剂R2：草酸盐 25mmol/LNAD+ 2.5mmol/L叠氮钠 0.035 mmol/L其溶剂为纯化水。实施例2本专利技术的试剂盒包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分，其中试剂R1：4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液 90mmol/LD-3-羟丁酸脱氢酶 3.1KU/L聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 5.0mL/L叠氮钠 0.059 mmol/L其溶剂为纯化水。试剂R2：草酸盐 20mmol/LNAD+ 3.0mmol/L叠氮钠 0.059 mmol/L其溶剂为纯化水。实施例3试剂盒的制备和使用方法1、按照下列组分含量配制好试剂：试剂R1：三羟甲基氨基甲烷缓冲液 100mmol/LD-3-羟丁酸脱氢酶 2.5KU/L聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 3.0mL/L叠氮钠 0.035 mmol/L其溶剂为纯化水。试剂R2：草酸盐 25mmol/LNAD+ 2.5mmol/L叠氮钠 0.035 mmol/L其溶剂为纯化水。2、全自动生化分析仪参数设置（a）检测温度：37℃；（b）检测波长：主波长340nm、副波长700nm；（c）反应时间 ：8min，其中，孵育时间 5min，加入试剂 R2 后立即测定读取吸光度 A1，3min后读取吸光度 A2，计算吸光度变化 ΔA ＝ A2-A1 ；(d) 反应方向：负方向。3、检测步骤（a） 取200μl试剂R1与200μl待测样本混匀；（b）将混匀后的溶液在37℃的条件下孵育5min；（c）加入50μl试剂R2，立即测定读取吸光度A1，3min后读取吸光度A2，计算吸光度变化ΔA ＝ A2-A1 ；(d) 根据D-3-羟丁酸浓度（mmol/L）=CS ×（mmol/L）计算出样本中的D-3-羟丁酸的浓度。实施例4试剂盒的制备和使用方法1、按照下列组分含量配制好试剂：试剂R1：4-羟乙基哌嗪乙磺酸缓冲液 90mmol/LD-3-羟丁酸脱氢酶 3.1KU/L聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 5.0mL/L叠氮钠 0.059 mmol/L本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种测定D‑3‑羟丁酸的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：缓冲液 20~180mmol/LD‑3‑羟丁酸脱氢酶 0.1~4.9KU/L聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 0.1‑6.0mL/L防腐剂 0.01~0.059 mmol/L其溶剂为纯化水试剂R2：草酸盐 10~40mmol/LNAD+ 0.1~4.9mmol/L防腐剂 0.01~0.059 mmol/L其溶剂为纯化水。
【技术特征摘要】
1.一种测定D-3-羟丁酸的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：缓冲液 20~180mmol/LD-3-羟丁酸脱氢酶 0.1~4.9KU/L聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 0.1-6.0mL/L防腐剂 0.01~0.059 mmol/L其溶剂为纯化水试剂R2：草酸盐 10~40mmol/LNAD+ 0.1~4.9mmol/L防腐剂 0.01~0.059 mmol/L其溶剂为纯化水。2.根据权利要求1所述的一种测定D-3-羟丁酸的试剂盒，其特征在于：包括彼此独立的试剂R1和试剂R2双液体组分组成试剂盒，包括的成分及相应含量为：试剂R1：缓冲液 100mmol/LD-3-羟丁酸脱氢酶 2.5KU/L聚氧丙烯聚氧乙烯共聚物 3.0mL/L防腐剂 0.035 mmol/L其溶剂为纯化水试剂R2：草酸盐 25mmol/LNAD+ 2.5mmol/L防腐剂 0.035 mmol/L其溶剂为纯化水。3.根据权利要求1或2所述的一种测定D-3-羟丁酸的试剂盒，其特征在于：所述的试剂R1中，所述的缓冲液选自磷酸盐缓冲液、三羟甲基氨基甲烷缓冲液、1，4-哌嗪二乙磺酸缓冲液、4-羟乙...
【专利技术属性】
技术研发人员：蔡晓辉，庄庆华，吴铮，徐运，
申请(专利权)人：安徽伊普诺康生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：安徽;34
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。