本发明专利技术提供包含从NK‑92细胞培养基的上清液分离的杀肿瘤的和/或抗微生物的组分的药物组合物，和应用所述组合物杀死癌细胞的方法。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术提供包含从NK?92细胞培养基的上清液分离的杀肿瘤的和/或抗微生物的组分的药物组合物，和应用所述组合物杀死癌细胞的方法。【专利说明】
本专利技术一般地涉及具有杀肿瘤和/或抗微生物特性的药物组合物，以及使用所述 组合物杀肿瘤和/或微生物的方法。
技术介绍
皮肤癌是人和多种驯养动物中的主要癌症类型。皮肤癌和黑色素瘤的发病率由于 多种因素不断攀升，包括皮肤在缺乏保护的情况下暴露于紫外线，比如在太阳光或日晒床 中的那些紫外线暴露。如果在初期得到诊断，这些癌症可以通过切除癌症及周围组织容易 地治疗。但是，如在任何手术过程中，仍然存在异常的癌细胞可能残留在切除位点而导致癌 症复发的可能性。在黑色素瘤的情况中尤其是如此，并且未能除去全部瘤细胞可能导致伴 随着更高发病率的癌转移。 现在已经有很多积极的(aggr e s s i ve)方法可以用于最小化复发风险，包括常规的 治疗方案以及主治医生的很多检查方法。尽管有这些方案，黑色素瘤倾向于非常具有侵袭 性，且根据报道，黑色素瘤在五年内有2%到65%的复发可能性，这取决于治疗时癌症的阶 段。参见：例如，www · aimatmelanoma · org/en/aim-for-answers/moving-on-after-treatment/follow-up-by-stage.html. 动物也很容易得皮肤癌，尤其是黑色素瘤、鳞状细胞癌和肥大细胞瘤。皮肤癌对于 长时间处于阳光中的动物尤为普遍。 感染是全世界面临的一个普遍问题。很多感染是由细菌、真菌和其它微生物所引 起的。虽然现在对于这些感染的治疗方法严重依赖于抗生素和抗微生物药物，但是越来越 多的细菌感染被发现对至少某些抗生素产生了抗药性。根据美国疾病控制中心(CDC)的报 告，美国每年有超过2百万人被具有抗生素抗性的微生物感染，死亡人数超过23,000。参见： 例如，￥￥￥.1116(1；[0&1116￥81：0(1&7.00111/&1'1：；[0168/266182 41^。皮肤和软组织感染是急诊护理 情况中第三最常见的诊断，且估计所有住院患者的7 %到10 %具有皮肤或软组织感染。Ki和 Rotstein,Can. J. Infect.Dis.Med.Microbiol.2008March; 19(2): 173-184。其它常见的感 染包括全身性感染、呼吸道感染、耳部感染、胃肠感染以及尿道感染。感染在驯养动物中同 样常见，而且很难治疗。病毒感染也是常见的，并且可用于治疗病毒感染的方法很少。 因此，现在仍然需要可用于裂解癌细胞，尤其与真皮和皮下癌症相关的那些癌细 胞的杀肿瘤组合物。也仍然需要可用于治疗感染的新的抗微生物组合物。
技术实现思路
免疫系统的某些细胞对特定靶细胞具有细胞毒性活性。通常占据循环淋巴细胞的 约10-15%的天然杀伤(NK)细胞对于抗原来说非特异性地并在没有之前的免疫致敏的情况 下结合并杀死祀细胞，包括病毒感染的细胞和很多恶性细胞。Herberman等，Science 214: 24(1981)。靶细胞的杀灭可以通过裂解细胞发生。NK细胞被证明在癌症晚期患者的体外疗 法和体内治疗中都是有效的。然而，内源的NK细胞(即，从供体或患者收获的细胞)仍然很难 对免疫疗法有作用并应用到免疫疗法中。NK细胞很难在体外扩增而使得它们保持其体内的 肿瘤靶向、杀肿瘤和杀病毒能力，这也是其在过继性细胞免疫疗法中的临床应用的主要障 碍。Melder等，Cancer Research 48:3461-3469(1988) ;Stephen等，Leuk.Lymphoma 377-399(1992); Rosenberg等，New Engl · J ·Med · 316:889-897(1987)。另外，内源NK细胞的制备 物含有T细胞和/或其它免疫效应细胞，其在NK细胞用来治疗与供体不相关的患者时必须移 除。 NK-92细胞系是发现在白细胞介素-2(IL-2)存在的情况下增殖独特细胞系。Gong 等，Leukemia 8:652-658(1994)。与NK细胞不同，NK-92细胞是在患有非霍奇金淋巴瘤的受 试者的血液中发现的并然后在体外永生化的细胞溶解性癌细胞系。此细胞系对多种癌症具 有高细胞溶解活性。NK-92细胞系是同源NK细胞群体，因为这与裂解活性相关。一期临床实 验证实其安全性特征，并且在某些癌症晚期患者中观察抗肿瘤反应。 内源NK细胞与NK-92细胞显著不同，主要由于它们的不同起源:NK-92细胞是源自 癌症的细胞系，而内源NK细胞从供体(或患者)获得，并经过处理以注入到患者体内。内源NK 细胞制备物是异质细胞群体，而NK-92细胞是同质的克隆细胞系，因为它们均表现出裂解活 性。NK-92细胞很容易在培养中增殖而同时保持细胞毒性，而内源NK细胞不能。 细胞(包括NK细胞）向它们于其中生长的培养基中释放多种成分。这样的成分的实 例有蛋白质、外来体和微囊泡。外来体是由正常细胞和肿瘤细胞释放的纳米囊泡(最高100 纳米）。微囊泡与外来体相似，但是尺寸更大(大于100纳米）。外来体和微囊泡可以从细胞培 养上清液或从体液(比如血液)中检测和分离。 从内源NK细胞的细胞培养上清液分离的外来体含有蛋白质，包括CD56、穿孔蛋白、 FasL和RabSBlugini等· J Immunol · (2012) 189，2833-2842。然而，外来体和源自内源NK细 胞的其它因子对于回收的外来体的量和其中包含的蛋白质是高度可变的。同上，2839页。非 局限于理论，据信这种变异性是因为内源NK细胞从个体供体获得，且还因为内源NK细胞包 含异质细胞群体。另外，条件的差异(如细胞培养条件、纯化方法、起始细胞群体和培养中细 胞类型的比率)都可导致可从内源NK细胞纯化的外来体的组成和量的变化。例如，NK细胞制 备物中的某些细胞群体可以考虑所使用的纯化方法和/或培养条件进行选择或针对所使用 的纯化方法和/或培养条件进行选择。 与内源NK细胞相关的变异性的问题不适用于NK-92细胞系。因为其是细胞系，大量 细胞可以进行培养并且长期扩增。这些培养物是提供一致的，可重现的外来体和/或微囊泡 制备物的同源细胞群体。NK-92细胞分泌的外来体和/或微囊泡包含设想具有杀肿瘤特性的 蛋白质，比如具有细胞毒性和/或细胞裂解性。从含NK-92细胞的培养基可以分离其它成分， 包括具有抗微生物特性和免疫调节特性的成分等。 另一方面，NK-92细胞是癌细胞系。一些癌细胞已被证明释放包含在某些情况下促 进肿瘤生长的因子(例如微RNA)的外来体。很多癌细胞释放的外来体和其它因子与其非恶 性对应物释放的那些明显不同。例如NK-92细胞释放具有抗微生物特性的因子，这个特征在 内源NK细胞中没有观察到。在一个实施方式中，从NK-92细胞获得的外来体和/或微囊泡在 使用前在适当的溶液（比如PBS或等渗盐水）中孵育以提取这些因子。这个孵育期被设想极 大地减少或消除促进肿瘤生长的那些因子。 本专利技术的一个方面提供了药物组合物，其包含从NK-92细胞培养基的上清液获得 的一种或多种组分。所述组分可能是杀肿瘤和/或抗微生本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种组合物，包含从NK‑92细胞分离的外来体和/或微囊泡。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：H·G·克林格曼，B·J·西蒙，
申请(专利权)人：南克维斯特公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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