本发明专利技术涉及一种果胶、该果胶的衍生物、包含所述果胶和所述果胶衍生物的组合物、所述果胶及其衍生物的用途。所述果胶能被人肠粘膜上皮HIMC细胞，HT-29结肠癌细胞吸收，并抑制半乳糖凝集素-3(Galectin-3)的mRNA表达而靶向肿瘤细胞，达到实现对结肠癌的抑制作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种果胶、该果胶的衍生物、包含所述果胶和所述果胶衍生物的组合物、所述果胶及其衍生物的用途。所述果胶能被人肠粘膜上皮HIMC细胞、HT-29结肠癌细胞吸收，并抑制半乳糖凝集素-3(Galectin-3)的mRNA表达而靶向肿瘤细胞，达到实现对结肠癌的抑制作用。
技术介绍
果胶是一种无味的高分子多糖，存在于多种植物组织中，易溶于水且呈微酸性，具有良好的乳化稳定性和凝胶性，广泛应用于食品工业、生物医药、化妆品等多种行业里。果胶是一种水溶性的膳食纤维，参与调节肠道机能。果胶在肠道中占据空间大，使人有饱食感，有利于减肥；同时其可刺激肠道，使消化液分泌增多、促进肠道蠕动，亦可改变肠转运时间，在肠内形成凝胶使得糖吸收减慢，可防治糖尿病。与此同时，果胶有利于肠内大肠杆菌合成多种维生素，有利于身体健康。近年来研究表明，果胶具有某些重要的生理学功能，如降血糖、降血脂、降低胆固醇含量、止血、止泻等。目前，大量的研究报道表明，果胶能够特异性的靶向肿瘤细胞，越来越多的研究人员也开始关注此点。果胶作为一种天然的多糖有望为肿瘤防治开辟新的途径。半乳糖凝集素-3是一种能够被半乳糖识别的凝集素，在正常组织和肿瘤细胞中均有表达，参与多种生理和病理过程，包括细胞生长、增殖、凋亡、黏附，血管的生成，炎症反应，并能促进肿瘤细胞的生长、侵袭与转移，与肿瘤细胞的恶性生物学行为密切相关。半乳糖凝集素-3在肿瘤的发生与发展中发挥着广泛的生物学功能，近年来已被应用于某些肿瘤临床诊断及预测其预后，如其可作为甲状腺癌鉴别诊断的标志物。目前，手术切除是肿瘤治疗最基本最主要的治疗手段，但肿瘤的良恶性鉴别及术后复发仍然是临床的一大难题。近年研究表明，半乳糖凝集素-3可能成为脑肿瘤良恶性鉴别的重要标志及治疗靶点。研究发现某些低分子果胶作为半乳糖凝集素-3配体竞争性抑制剂，与半乳糖凝集素-3结合，有效地封闭肿瘤细胞表面的半乳糖凝集素-3位点，抑制肿瘤的发生、发展(汪峰等，广东医学，2011年10月第32卷第20期，2747-2749.)。在乳腺癌研究过程中发现，高表达半乳糖凝集素-3的BT-549细胞中，磷酸化的半乳糖凝集素-3可以从胞核中转运到胞浆，激活细胞内ERK和JNK两条MAPKs信号通路，进而抑制细胞凋亡，而果胶的作用抵消了这种由半乳糖凝集素-3高表达带来的效应。果胶在抗肿瘤产品的开发方面有着巨大的
优势，半乳糖凝集素-3有望成为肿瘤防治的靶点分子，二者的结合有望成为肿瘤防治的新方向。因此，迫切需要开发具有上述作用的果胶。
技术实现思路
本专利技术的专利技术人从橘皮中提取出了一种果胶，并通过实验发现，该种果胶可被人肠粘膜上皮HIMC细胞、HT-29结肠癌细胞吸收，并抑制HT-29结肠癌细胞的增殖但对正常人肠道上皮细胞的增殖的影响不明显；该种果胶能够下调高表达半乳糖凝集素-3的HT-29结肠癌细胞中的半乳糖凝集素-3mRNA表达水平，抑制了HT-29细胞中的半乳糖凝集素-3mRNA的表达；可见该种果胶能发挥抑制结肠癌细胞的增殖，具有防治结肠癌的作用。在此基础上，完成了本专利技术。本专利技术的一个方面是提供一种果胶，其是从橘皮中提取的多糖。优选地，所述果胶的单糖组成的摩尔比约为Rha:GalA:Glc:Gal:Ara＝1.6:50:38.6:7.4:2.4，摩尔比的偏差范围可以为±40％之间，优选为±30％之间，更优选为±20％之间，再优选为±10％之间。优选地，根据本专利技术的果胶的重均分子量在约194至2,000,000D之间。优选地，根据本专利技术的果胶可具有双峰分子量分布，且双峰之一的重均分子量(Mw)为约8.13×105D，分子量分布的多分散指数(PDI＝Mw/Mn，Mn为数均分子量)为约4.49，另一峰的重均分子量为约6.86×102D，分子量分布的多分散指数为约3.33。优选地，根据本专利技术的果胶具有大体上如图1所示的分子量分布图。所述分子量分布图采用Agilent 1260高效液相色谱，配备串联Waters凝胶色谱柱UltrahydrogelTM 2000和UltrahydrogelTM 500(25cm×0.75cm)色谱柱，流动相为0.1M NaNO3，流速为0.5ml/min，色谱柱工作温度为25℃，用RID检测器检测。优选地，根据本专利技术的果胶具有大体上如图3所示的1H-NMR谱图和大体上如图4所示的13C-NMR谱图，其中，在图4中，图4A是dept 135谱图，图4B是BB谱图，图4C为HMBC谱图。所述谱图用500M低温探头核磁共振仪(Bruker AVANCEⅢ)分析得到。本专利技术的另一方面是提供所述果胶的制备方法，所述方法包括：(1)、将去除色素后的橘皮用酸法提取果胶得到果胶提取液；(2)、将所得果胶提取液浓缩、沉淀得到果胶。在步骤(1)中，所述酸法可以如下进行：将去除色素后的橘皮按照一固液比加入水，然后调节pH至2至4进行反应，之后过滤得到果胶提取液。所述固液比(质量比)可以为1:10至1:30，优选为约1:20。调节pH可以使用盐酸，例如5％盐酸。反应可以在50℃
至100℃下的温度下进行0.5至20小时，优选1至10小时，例如大约1.5小时、2小时、2.5小时或3小时。在步骤(2)中，所述浓缩可以如下进行：将果胶提取液进行真空减压浓缩得到浓缩液。浓缩温度可以为30至80℃，例如大约45℃、50℃、55℃、60℃等。浓缩程度没有具体限定，例如可以浓缩至原体积的约1/4到约1/3。在步骤(2)中，所述沉淀可以通过向浓缩液中加入酸性醇析出果胶进行。所述酸性醇溶液例如可以pH为约5.5至6.5，优选约6的酸性乙醇或丙醇。所述酸性醇溶液与浓缩液的比例没有具体限定，例如酸性醇可以为浓缩液的1-10倍体积量，例如大约2、3、4、5倍体积量。所述析出的条件没有特殊限定，只要能够使果胶析出即可，例如可以在0至10℃，优选1-8℃，例如大约2、3、4、5℃下静置0.5至10小时，优选1至5小时，例如大约2、3、4小时。根据本专利技术的果胶的制备方法还可以包括进一步纯化所得果胶和/或干燥并粉碎所得果胶的步骤。所述纯化可以如下进行，例如，将析出的果胶进一步洗涤以除去残留色素，例如，用例如大约95％的乙醇洗涤。所述干燥没有具体限定，例如可以进行真空干燥，例如在45℃下进行。粉碎可以采用本领域中采用的各种常规粉碎方式进行。产品粉碎后可以过筛，例如60目筛。根据本专利技术的果胶的制备方法还可以包括橘皮预处理。所述橘皮预处理没有具体限定，例如可以如下进行，将柑橘皮原料清洗干净后绞碎，60-80℃烘干，粉碎，过40-80目。根据本专利技术的果胶的制备方法还可以包括去除色素。所述去除色素没有具体限定，例如可以如下进行，将预处理后的橘皮按大约1:20的质量比加70％乙醇在60-80℃浸提2h，压滤得固形物，重复提取3次。本专利技术的再一方面是提供一种根据本专利技术的果胶的衍生物。所述衍生物可以通过对根据本专利技术的果胶进行修饰得到。所述修饰可以为本领域中常规的对于多糖或纤维素的修饰方法，例如通过荧光标记反应(即将果胶与荧光物质结合的反应)、醚化反应、酯化反应、水解反应等进行。所述衍生物可以是根据本专利技术的果胶的荧光标记产物、羧甲基化产物、羟甲基化产物、羟丙基化产本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种果胶，所述果胶的单糖组成的摩尔比为Rha:GalA:Glc:Gal:Ara＝1.6:50:38.6:7.4:2.4，摩尔比的偏差范围可以为±40％之间；优选地，所述果胶的重均分子量在194至2,000,000D之间。优选地，所述果胶具有双峰分子量分布，且双峰之一的重均分子量Mw为8.13×105D，分子量分布的多分散指数PDI为4.49，另一峰的重均分子量Mw为6.86×102D，分子量分布的多分散指数PDI为3.33，其中PDI＝Mw/Mn，Mn为数均分子量。
【技术特征摘要】
1.一种果胶，所述果胶的单糖组成的摩尔比为Rha:GalA:Glc:Gal:Ara＝1.6:50:38.6:7.4:2.4，摩尔比的偏差范围可以为±40％之间；优选地，所述果胶的重均分子量在194至2,000,000D之间。优选地，所述果胶具有双峰分子量分布，且双峰之一的重均分子量Mw为8.13×105D，分子量分布的多分散指数PDI为4.49，另一峰的重均分子量Mw为6.86×102D，分子量分布的多分散指数PDI为3.33，其中PDI＝Mw/Mn，Mn为数均分子量。2.一种果胶衍生物，其通过对根据权利要求1所述的果胶进行修饰得到。3.根据权利要求2所述的果胶衍生物，其为权利要求1所述的果胶的荧光标记产物、羧甲基化产物、羟甲基化产物、羟丙基化...
【专利技术属性】
技术研发人员：丁侃，崔恒祥，廖文峰，王武成，秦毅，谢桂琴，
申请(专利权)人：中国科学院上海药物研究所，
类型：发明
国别省市：上海;31
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