用于治疗HER2/NEU过表达肿瘤的组合物和方法技术

本发明专利技术提供用于治疗HER2/neu抗原表达肿瘤和接种所述肿瘤的疫苗以及诱导受试者的对所述肿瘤的免疫应答的组合物和方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗HER2/NEU过表达肿瘤的组合物和方法
本专利技术提供用于诱导人和犬科动物受试者的对HER2/neu抗原表达肿瘤的免疫应答以及用于治疗该肿瘤和接种该肿瘤的疫苗的组合物和方法。在另一个实施例中，人受试者是儿童或青少年。
技术介绍
单核细胞增多性李斯特菌(Listeriamonocytogenes)是主要感染抗原呈递细胞并且已适应在这些细胞的细胞质中生活的细胞内病原体。宿主细胞诸如巨噬细胞、主动吞噬细胞单核细胞增多性李斯特菌和大部分细菌在吞噬溶酶体中降解。一些细菌通过溶血素、李斯特菌溶血素O(LLO)的作用刺穿噬菌溶酶体膜而逃入宿主胞质溶胶。一旦处于胞质溶胶中，单核细胞增多性李斯特菌即可使宿主肌动蛋白聚合，并且直接从细胞传递到细胞，从而进一步入侵宿主免疫系统并产生可忽略的对单核细胞增多性李斯特菌的抗体应答。HER2/neu(在本文中也称为“Her-2”)是185kDa的糖蛋白，它是酪氨酸激酶的表皮生长因子受体(EGFR)家族成员，并由胞外域、跨膜域和胞内域(已知涉及细胞信号转导)组成。在人中，Her2抗原在所有乳腺癌的25至40％中过表达，并且也在很多骨(骨肉瘤–OSA)、卵巢、肺、胰腺、脑和胃肠道癌中过表达。Her-2的过表达与不受控制的细胞生长和信号转导相关，它们二者均有助于肿瘤的发展。过表达Her-2的癌症患者表现出耐受性，即使存在可检测的直接对Her-2的体液、CD8+T细胞和CD4+T细胞应答。大型养殖狗自发发展成OSA，再现了小儿OSA的多个方面，包括组织学异质性、侵袭性局部疾病和早期转移。在狗中，OSA可出现于任何骨骼中，但肢骨仅占所有受影响骨骼的75％-85％，并且在其中，OSA被称为“肢体骨肉瘤”。其余的OSA影响中轴骨骼，包括上颌骨、下颌骨、脊骨、头盖骨、肋骨、鼻腔骨、鼻旁窦骨和骨盆。在诊断中，95％的狗患有微转移性疾病，并且尽管进行了截肢和化疗，但中值存活时间也只有10个月，大部分狗由于进行性转移性疾病而被实施安乐死。肺转移性疾病是两个物种发病和死亡的主要原因。小儿至年轻成年人群体的原发性恶性骨肿瘤相对不常见，在不到20岁的群体中占所有癌症的约6％，并且在年龄范围为15至29岁的青少年和年轻成年人(AYA)中占所有癌症的3％。每年在美国骨肉瘤影响了约400名儿童和青少年，这代表了在几十年里几乎无治疗改进的小但高需求的领域。虽然骨肉瘤(OS)是罕见的恶性肿瘤，但在小儿年龄组中它被列为癌症相关性死亡的主要原因。现代、多药剂、剂量密集化疗与手术结合在60-70％局限于肢体的非转移性疾病中实现了5年无事件存活期。然而，主要的、但未解决的问题是转移性复发或再次出现以及中轴疾病患者的预后差。此外，在美国尚无批准用于骨肉瘤的产品，表明对治疗该疾病的新型疗法具有强烈需求。本专利技术通过提供使用LmddA疫苗载体生成的重组李斯特菌(Listeria)-HER2/neu疫苗株满足了此需求，该载体具有明确的减毒机制且不含抗生素选择标记，并且据发现该载体在治疗犬科动物骨肉瘤中有效。
技术实现思路
在一个方面，本文提供的专利技术涉及包含融合多肽的免疫原性组合物，其中所述融合多肽包含融合至另外的多肽的HER2/neu嵌合抗原，并且其中将融合蛋白施用于患有HER2/neu表达肿瘤的受试者绕开肿瘤引起的突变回避(mutationavoidance)。在另一个实施例中，绕开突变回避是由于表位扩展。在又一个实施例中，绕开突变回避是由于抗原的嵌合性质。在另一个实施例中，本文提供的专利技术涉及包含核酸分子的重组李斯特菌疫苗株，其中并且在另一个实施例中，核酸分子包含编码多肽的第一开放阅读框，其中该多肽包含HER2/neu嵌合抗原，其中该核酸分子还包含编码代谢酶的第二开放阅读框，并且其中该代谢酶互补重组李斯特菌菌株的染色体中突变的内源性基因。在一个实施例中，本文提供的专利技术涉及治疗受试者的HER2/neu表达肿瘤生长或癌症的方法，该方法包括施用包含编码融合多肽的核酸的重组减毒李斯特菌的步骤，其中所述融合多肽包含融合至另外的多肽的HER2/neu嵌合抗原，其中所述核酸分子包含编码所述融合多肽的第一开放阅读框，其中所述核酸分子还包含编码代谢酶的第二开放阅读框，并且其中所述代谢酶互补所述重组李斯特菌疫苗株的染色体中突变的内源性基因。在另一个实施例中，受试者是人。在另一个实施例中，人受试者可以是成人或儿童。在另一个实施例中，受试者是犬科动物。在另一个实施例中，嵌合HER2是犬科动物嵌合HER2。在另一个实施例中，嵌合HER2是人嵌合HER2。在另一个实施例中，将所述融合多肽施用于所述受试者防止所述肿瘤内的逃逸突变。在另一个实施例中，所述人HER2/neu嵌合抗原包含至少5、9、13、14或17个标绘的人MHCI类表位。在另一个实施例中，本文提供的专利技术涉及防止HER2/neu表达肿瘤生长或癌症的方法。在一个实施例中，治疗HER2/neu表达肿瘤生长或癌症的方法使所述受试者的总体存活期增加。在另一个实施例中，治疗HER2/neu表达肿瘤生长或癌症的方法使受试者的转移性疾病延缓。在另一个实施例中，治疗使HER2/neu特异性T细胞应答增强。在一个实施例中，本专利技术提供引起受试者的对HER2/neu表达肿瘤生长或癌症的增强免疫应答的方法，该方法包括施用包含编码融合多肽的核酸的重组减毒李斯特菌的步骤，其中所述融合多肽包含融合至另外的多肽的HER2/neu嵌合抗原，其中所述核酸分子包含编码所述融合多肽的第一开放阅读框，其中所述核酸分子还包含编码代谢酶的第二开放阅读框，并且其中所述代谢酶互补所述重组李斯特菌疫苗株的染色体中缺乏的内源性基因。在另一个实施例中，所述引起增强免疫应答的方法使所述受试者的总体存活期增加。在另一个实施例中，所述引起增强免疫应答的方法使受试者的转移性疾病延缓。在另一个实施例中，所述引起增强免疫应答的方法使HER2/neu特异性T细胞应答增强。在一个实施例中，本专利技术提供延长患有HER2/neu表达肿瘤生长或癌症的受试者的存活期的方法，该方法包括施用包含编码融合多肽的核酸的重组减毒李斯特菌的步骤，其中所述融合多肽包含融合至另外的多肽的HER2/neu嵌合抗原，其中所述核酸分子包含编码所述融合多肽的第一开放阅读框，其中所述核酸分子还包含编码代谢酶的第二开放阅读框，并且其中所述代谢酶互补所述重组李斯特菌疫苗株的染色体缺乏的内源性基因。在另一个实施例中，受试者是人。在另一个实施例中，人受试者可以是成人或儿童。在另一个实施例中，受试者是犬科动物。在一个实施例中，所述方法还包括在所述受试者中复发或转移后施用所述重组减毒李斯特菌。在一个实施例中，本文提供的专利技术涉及延缓患有HER2/neu表达肿瘤生长或癌症的受试者的转移性疾病的方法，该方法包括施用包含编码融合多肽的核酸的重组减毒李斯特菌的步骤，其中所述融合多肽包含融合至另外的多肽的HER2/neu嵌合抗原，其中所述核酸分子包含编码所述融合多肽的第一开放阅读框，其中所述核酸分子还包含编码代谢酶的第二开放阅读框，并且其中所述代谢酶互补所述重组李斯特菌疫苗株的染色体中缺乏的内源性基因。在另一个实施例中，受试者是人。在另一个实施例中，人受试者可以是成人或儿童。在另一个实施例中，受试者是犬科动物。附图说本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种治疗受试者的HER2/neu表达肿瘤生长或癌症的方法，所述方法包括施用包含重组减毒李斯特菌的组合物的步骤，所述重组减毒李斯特菌包含编码重组多肽的核酸，其中所述重组多肽包含融合至另外的多肽的HER2/neu嵌合抗原，其中所述核酸分子包含编码所述重组多肽的第一开放阅读框，其中所述核酸分子还包含编码代谢酶的第二开放阅读框，并且其中所述代谢酶互补所述重组李斯特菌菌株的染色体中突变的内源性基因。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.02.25 US 14/189,008;2014.05.02 US 14/268,436;1.一种治疗受试者的HER2/neu表达肿瘤生长或癌症的方法，所述方法包括施用包含重组减毒李斯特菌的组合物的步骤，所述重组减毒李斯特菌包含编码重组多肽的核酸，其中所述重组多肽包含融合至另外的多肽的HER2/neu嵌合抗原，其中所述核酸分子包含编码所述重组多肽的第一开放阅读框，其中所述核酸分子还包含编码代谢酶的第二开放阅读框，并且其中所述代谢酶互补所述重组李斯特菌菌株的染色体中突变的内源性基因。2.根据权利要求1所述的方法，其中所述组合物包含约3.3×109个李斯特菌的李斯特菌剂量。3.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者是人或犬科动物受试者。4.根据权利要求3所述的方法，其中所述人受试者是儿童、青少年或成人。5.根据权利要求1所述的方法，其中将所述融合多肽施用于所述受试者防止所述肿瘤内的逃逸突变。6.根据权利要求1所述的方法，其中所述HER2/neu嵌合抗原是包含至少5、9、13、14或17个标绘的人MHCI类表位的人嵌合HER2/neu。7.根据权利要求1所述的方法，其中所述嵌合HER2/neu是嵌合犬科动物HER2/neu。8.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸分子整合进所述李斯特菌基因组。9.根据权利要求1所述的方法，其中所述核酸分子在所述重组李斯特菌疫苗株的质粒中，并且其中所述质粒在不存在抗生素选择的情况下稳定维持在所述重组李斯特菌疫苗株中。10.根据权利要求1所述的方法，其中所述重组李斯特菌包含actA毒性基因中的突变。11.根据权利要求1所述的方法，其中所述另外的多肽选自：a)非溶血LLO蛋白或N-末端片段、b)PEST序列或c)ActA片段。12.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二开放阅读框编码的所述代谢酶是丙氨酸消旋酶或D-氨基酸转移酶。13.根据权利要求1所述的方法，还包含独立的佐剂。14.根据权利要求12所述的方法，其中所述佐剂包含粒细胞/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)蛋白、编码GM-CSF蛋白的核苷酸分子、皂草苷QS21、单磷酰脂质A或未经甲基化的含CpG寡核苷酸。15.根据权利要求1所述的方法，其中所述肿瘤是HER2/neu阳性肿瘤，并且其中所述癌症是HER2/neu表达癌症。16.根据权利要求1所述的方法，其中所述癌症是骨肉瘤、卵巢癌、胃癌、中枢神经系统(CNS)癌症或尤因氏肉瘤(ES)。17.根据权利要求16所述的方法，其中所述骨肉瘤癌症是犬科动物骨肉瘤。18.根据权利要求16所述的方法，其中所述骨肉瘤是小儿骨肉瘤。19.一种引起受试者的对HER2/...

【专利技术属性】
技术研发人员：V·谢哈比，A·瓦勒查，P·C·马西亚格，Y·佩特森，N·梅森，M·西维，
申请(专利权)人：阿德瓦希斯公司，宾夕法尼亚大学理事会，
类型：发明
国别省市：美国,US