用于评估李斯特菌菌株的减毒和感染性的组合物和方法技术

提供了用于评估细菌或如单核细胞增生性李斯特菌等李斯特菌菌株的减毒和/或感染性的方法和组合物。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于评估李斯特菌菌株的减毒和感染性的组合物和方法相关申请的交叉引用本申请要求于2018年3月9日提交的美国申请第62/640,855号的权益，所述美国申请出于所有目的通过引用整体并入本文。对通过EFSWEB以文本文件形式提交的序列表的引用写入文件528092_SeqListing_ST25.txt中的序列表为89千字节，创建于2019年2月25日，并且通过引用并入本文。
技术介绍
单核细胞增生性李斯特菌(Listeriamonocytogenes，Lm)是造成人类李斯特菌病的革兰氏阳性、无芽孢形成的细菌生物体。为了使用基于Lm的免疫疗法(如癌症免疫疗法)，对细菌进行了生物工程改造以使其减毒，从而可以将其用于递送肿瘤特异性抗原并且产生抗原特异性免疫应答，但不会引起李斯特菌病。原代巨噬细胞可以用于评估基于Lm的免疫疗法感染并在细胞溶质中复制的能力。然而，需要更好的方法来评估李斯特菌菌株的减毒和感染性。
技术实现思路
提供了用于评估细菌或如单核细胞增生性李斯特菌等李斯特菌菌株的减毒和/或感染性的方法和组合物。在一些方面，提供了用本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种评估测试李斯特菌菌株的减毒或感染性的方法，所述方法包括：/n(a)用所述测试李斯特菌菌株感染分化的THP-1细胞，其中在用所述测试李斯特菌菌株感染之前，已将所述THP-1细胞分化为巨噬细胞；/n(b)裂解所述THP-1细胞，并将裂解物平板接种在琼脂上；以及/n(c)通过在所述琼脂上的生长来计数已在所述THP-1细胞内部繁殖的所述李斯特菌。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20180309 US 62/640,8551.一种评估测试李斯特菌菌株的减毒或感染性的方法，所述方法包括：
(a)用所述测试李斯特菌菌株感染分化的THP-1细胞，其中在用所述测试李斯特菌菌株感染之前，已将所述THP-1细胞分化为巨噬细胞；
(b)裂解所述THP-1细胞，并将裂解物平板接种在琼脂上；以及
(c)通过在所述琼脂上的生长来计数已在所述THP-1细胞内部繁殖的所述李斯特菌。


2.根据权利要求1所述的方法，其进一步包括在步骤(a)之前，使用佛波醇12-肉豆蔻酸酯13-乙酸酯(PMA)将所述THP-1细胞分化为巨噬细胞。


3.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中步骤(a)包括以1:1的感染复数(MOI)感染所述分化的THP-1细胞。


4.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括在步骤(a)与(b)之间，杀死未被所述THP-1细胞摄取的李斯特菌。


5.根据权利要求4所述的方法，其中使用抗生素进行所述杀死，任选地其中所述抗生素是庆大霉素。


6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在感染后0小时进行步骤(b)。


7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中在感染后3小时进行步骤(b)。


8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其进一步包括比较所述测试李斯特菌菌株与野生型李斯特菌菌株和/或参考样品的摄取和细胞内生长。


9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述测试李斯特菌菌株是单核细胞增生性李斯特菌菌株。


10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述测试李斯特菌菌株是重组李斯特菌菌株，所述重组李斯特菌菌株包括有包括对融合多肽进行编码的第一开放阅读框的核酸，其中所述融合多肽包括与疾病相关型抗原肽融合的含PEST的肽。


11.根据权利要求10所述的方法，其中所述含PEST的肽是李斯特菌溶血素O(LLO)或其片段，并且所述疾病相关型抗原肽是人乳头瘤病毒(HPV)蛋白E7或其片段。


...

【专利技术属性】
技术研发人员：帕纳姆·莫利，安努·瓦勒查，
申请(专利权)人：阿德瓦希斯公司，
类型：发明
国别省市：美国;US