位点特异性抗体缀合方法和组合物技术

提供了抗体药物缀合物(ADC)，以及使用这种ADC以治疗增殖性病症的方法。在一些方面，本公开提供了改造抗体，其免疫特异性地与肿瘤起始细胞的决定簇(如DLL3、SEZ6、或CD324)进行反应。包括一个或多个未配对的半胱氨酸残基的抗体为与治疗剂或诊断剂的选择性和受控的缀合提供了位点。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】交叉引用的申请本申请要求于2013年8月28日提交的美国临时申请号61/871173、于2013年8月28日提交的美国临时申请号61/871289，2014年8月27日提交的PCT国际申请号PCT/US2014/053014的权益，在此通过引用将前述各个申请整体并入本文。序列表本申请包含已经由EFS-Web以ASCII格式提交的序列表，并且在此通过引用将其整体并入。所述ASCII副本是2014年8月28日创建的，被命名为“sc0003pct_S69697_1190WO_SEQL_082814.txt”，并且大小是538KB(551,262字节)。专利
本申请总体涉及包含具有一个或多个缀合至细胞毒素的未配对的半胱氨酸残基的抗体或其免疫反应性片段的新型化合物，并涉及所述新化合物用于治疗或预防癌症和癌症的任何复发或转移的用途。专利技术背景许多常用的癌症治疗剂往往因没有选择性地靶向正在增殖的肿瘤细胞的能力而导致实质性的毒性。相反，这些传统的化疗剂非特异性地发挥作用，并且经常破坏或消除正常正在增殖的健康组织连同肿瘤细胞。往往这种意外的细胞毒性限制了患者可以忍受的剂量或方案，从而有效地限制了药剂的治疗指数。其结果是，已经进行许多尝试以使得细胞毒性治疗剂靶向肿瘤位点，其伴有不同程度的成功。一个有希望的研究领域已涉及使用抗体以将细胞毒性剂导向至肿瘤，以便提供治疗有效的局部药物浓度。在这方面，早已认识到，使用缀合到所选细胞毒性剂的靶向单克隆抗体(“mAbs”)提供了，将相对较高水平的这种细胞毒性有效载荷直接递送至肿瘤位点，同时减少正常组织对这种细胞毒性有效载荷的暴露。虽然已在实验室或临床前环境中对使用这样的抗体药物缀合物(“ADCs”)进行了广泛探索，但这样的抗体药物缀合物在临床上的实际应用却受限得多。在某些情况下，这些限制是弱或无效的毒素与肿瘤靶向分子联合的结果，肿瘤靶向分子不足以选择性与肿瘤结合或未能有效地与肿瘤结合。在其他情况下，分子构建体被证明是在施用后不稳定或太快被从血流清除，以致于不能在肿瘤位点以治疗显著浓度积累。虽然这种不稳定性可能是连接体选择或缀合方法的结果，但它也可以是采用毒性的有效载荷过载靶向抗体(即，该药物与抗体的比率或“DAR”太高)、从而在药物制剂中产生不稳定的缀合物质种类的结果。在一些情况下，不论是来自设计或来自不稳定DAR物质种类，构建体不稳定，由于有效的细胞毒性有效载荷过早从药物缀合物中浸出，已经导致不可接受的非特异性毒性，并且由于身体试图清除未靶向的有效载荷，在注射位点或在关键器官中积累。这样，虽然几种这类化合物目前正处于临床试验阶段，但是迄今为止相对较少的ADCs已经由联邦药物管理局批准。因此，仍然需要表现出有利的治疗指数的稳定、相对均质的抗体药物缀合物制剂。专利技术概述本专利技术提供了这些和其他的目的，本专利技术，在广义上，涉及提供表现出有利的药代动力学和药效学性质的改进的位点特异性抗体和缀合物的新型方法、化合物、组合物和制品。本专利技术所提供的益处是广泛适用于抗体治疗学和诊断学领域，并且可以结合与各种靶反应的抗体一起使用。如将在下面详细讨论，所公开的位点特异性缀合物包含改造的抗体构建体，所述构建体具有一个或多个未配对的半胱氨酸，可使用新型选择性还原技术，优先地将所述半胱氨酸缀合于治疗剂或诊断剂有效载荷。当与常规的缀合制剂比较时，这样的位点特异性缀合物制剂是相对稳定的，并且平均DAR分布和载荷位置是基本上均匀的。如在所附实施例中所示，所公开的抗-DLL3位点特异性缀合物制剂(关于平均DAR分布和载荷定位)的稳定性和均质性提供了，有助于改善的治疗指数的有利毒性特征。在一个实施方案中，本专利技术涉及包含一个或多个未配对的半胱氨酸残基的位点特异性改造抗体。本领域技术人员将认识到，未配对的链间半胱氨酸残基提供用于药学活性部分的选择性和受控的缀合，以产生根据本文的教导的改造缀合物。因此，在一个实施方案中，本专利技术涉及包含一个或多个未配对的半胱氨酸残基的改造抗体，其中所述改造抗体免疫特异性地与选自DLL3，SEZ6和CD324的决定簇反应。在相关实施方案中，位点特异性抗体用于制造在相关实施方案中，位点特异性抗体用于制造改造的缀合物，其中游离的半胱氨酸缀合至治疗剂或诊断剂。在这方面，本专利技术包括下式的抗体药物缀合物：Ab-[L-D]n或其药学上可接受的盐，其中Ab包含抗体，所述抗体含有一个或多个未配对的半胱氨酸；L包含任选的连接体；D包含药物；和n为约1至约8的整数。除了前述的抗体药物缀合物，本专利技术还提供了通常包含所公开的ADC的药物组合物和使用这样的ADC在患者中诊断或治疗病症(包括癌症)的方法。在特别优选的实施方案中，改造抗体或缀合物将与选自DLL3、SEZ6和CD324的决定簇相缔合。在另一个实施方案中，本专利技术涉及包含至少一个未配对的半胱氨酸残基的位点特异性改造的IgG1同种型抗体。在一些实施方案中，未配对的半胱氨酸残基将包含重链/轻链的链间残基，而不是重链/重链的链间残基。在其他实施方案中，未配对的半胱氨酸残基由链内二硫键产生。在另一个实施方案中，本专利技术提供一种改造抗体，其中在另一个实施方案中，本专利技术提供一种改造抗体，其中组成所述位点特异性改造抗体的轻链的C214残基(根据KabatEU索引编号)被置换成其他残基或删除。在进一步的实施方案中，本专利技术提供一种改造抗体，其中组成改造抗体的重链的C220残基(根据Kabat EU索引编号)被置换成其他残基或删除。在一个相关实施方案中，本专利技术涉及杀死肿瘤细胞或致瘤性细胞，减少肿瘤细胞或致瘤性细胞的增殖频率或抑制肿瘤细胞或致瘤性细胞的增殖的方法，其包括用本专利技术的位点特异性的ADC处理所述肿瘤细胞或致瘤性细胞。在一个相关实施方案中，本专利技术提供治疗癌症的方法，包括向受试者施用包含本专利技术的位点特异性缀合物的药物组合物。在另一个实施方案中，本专利技术包括制备本专利技术的抗体药物缀合物的方法，其包括以下步骤：a)提供包含未配对的半胱氨酸的改造抗体；b)选择性还原改造抗体；和c)将选择性还原的改造抗体缀合至药物。在相关的优选实施方案中，选择性还原抗体的步骤包括将抗体与稳定剂接触的步骤。在又一个实施方案中，所述方法可进一步包括用温和的还原剂接触抗体的步骤。如所指出的，这样的缀合物可用于增殖性病症或它们的复发或进展的治疗，管理，改善或预防。本专利技术的选择的实施方案提供了，这种位点特异性缀合物用于恶性肿瘤的免疫治疗的用途，所述免疫治疗优选包括在肿瘤起始细胞频率降低。所公开的ADC可以单独使用或与多种抗癌化合物如化学治疗剂或免疫治疗剂(例如，治疗性抗体)或生物反应调节剂组合使用。在其它选择的实施方案中，两种或更多种分开的位点特异性抗体药物缀合物可联合使用以提供增强的抗肿瘤作用。在上面讨论的治疗用途之外，还可以理解的是，本专利技术的改造缀合物可被用于检测、诊断或分类病症，尤其，增殖性病症。它们也可以在此类病症的预后和/或治疗诊断中被使用。在一些实施方案中，位点特异性缀合物可以施用给受试者，并被体内检测或监测。本领域的技术人员将理解，这样的调节剂可以采用如下文所公开的效应物、标记物或报道分子标记或与之相缔合，并且可以使用多种标准技术(例如，MRI，CAT扫描，PET扫描等)中的任何本文档来自技高网...

【技术保护点】
包含一个或多个未配对的半胱氨酸残基的改造抗体，其中所述改造抗体免疫特异性地与选自DLL3、SEZ6和CD324的决定簇反应。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.08.28 US 61/871,173;2013.08.28 US 61/871,289;1.包含一个或多个未配对的半胱氨酸残基的改造抗体，其中所述改造抗体免疫特异性地与选自DLL3、SEZ6和CD324的决定簇反应。2.根据权利要求1的改造抗体，其中所述抗体包括IgG1抗体。3.根据权利要求1或2的改造抗体，其中所述抗体包括单克隆抗体。4.根据权利要求1至3中任一项的改造抗体，其中所述抗体包括人源化抗体或CDR移植的抗体。5.根据权利要求1至4中任一项的改造抗体，其中所述抗体包括两个未配对的半胱氨酸。6.根据权利要求5的改造抗体，其中每个抗体轻链包含未配对的半胱氨酸。7.根据权利要求6的改造抗体，其中每个未配对的半胱氨酸位于位置C214。8.根据权利要求5的改造抗体，其中每个抗体重链包含未配对的半胱氨酸。9.根据权利要求1至8中任一项的改造抗体，还包含缀合至一个或多个未配对的半胱氨酸的药物。10.根据权利要求1至9中任一项的改造抗体，其中所述抗体包括选自hSC16.13、hSC16.15、hSC16.25、hSC16.34和hSC16...

【专利技术属性】
技术研发人员：W·R·阿拉松，I·帕达维尔，L·A·卡诺，V·N·西索迪亚，K·N·曼妮，D·刘，
申请(专利权)人：施特姆森特克斯股份有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US