使用辛德毕斯病毒载体和肿瘤相关抗原诱导抗肿瘤免疫的方法技术

一种用于治疗患有肿瘤的哺乳动物的方法，包括以下步骤：鉴定由该肿瘤表达的肿瘤相关抗原(TAA)，向该哺乳动物胃肠外给予治疗有效量的携带编码TAA的基因的辛德毕斯病毒载体，使该哺乳动物足以引起针对该肿瘤的免疫应答，从而治疗肿瘤。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利说明】使用辛德毕斯病毒载体和肿瘤相关抗原诱导抗肿瘤免疫的 方法因为本专利技术受到美国国家癌症研究所、国立卫生研究院、及卫生和公共事业部的 美国公共健康基金CA100687的资助，美国政府享有本专利技术的一定权利。
技术介绍
溶瘤病毒(Oncolytic VirUSeS，0V)是肿瘤细胞中特异性靶向和复制的病毒。 由于它们的选择性和溶瘤性，OV作为常规癌症治疗的备选或补充已引起了极大的兴趣。 然而，OV疗法的主要限制是在肿瘤部位不适当的复制和增殖。此外，出于安全性原因， 许多OV被设计成复制缺陷型以防止其扩散至健康组织，这进一步限制了它们的溶瘤潜能。 对此问题的一种可行的解决方案是补充具有旁观者效应(bystander effect)的 直接病毒溶瘤作用，其中不直接被OV感染的肿瘤细胞也将被摧毁。这例如可通过将治疗性 或细胞毒性基因插入OV基因组而递送至肿瘤部位来实现。赋有天然免疫原性，某些OV 能够有效刺激免疫系统，提高使用OV诱导免疫学抗癌旁观者效应的可能性。这种既得的 观点进一步推动了可由0V(0V/TAA)递送至肿瘤部位的各种临床相关的肿瘤相关抗原 (TAA)的鉴定和近期的优化。在其自然状态下，TAA通常免疫原性低下。然 而，通过将抗病毒免疫应答重定向到TAA，免疫原性0V/TAA能够潜在地打破这种免疫耐受 性。因此，OV研究的主要目标应当为开发安全有效的0V/TAA试剂。辛德毕斯病毒（Sindbis virus，SV)为含正单链RNA基因组的甲病毒属，代表选定数量的已展示出既作为0V也作为病毒疫苗的特殊潜能的病毒之一。之前已示出复制缺陷型SV载体靶向并抑 制小鼠中异种移植、同系和自发的肿瘤的生长。 近来，还已经发现SV诱导荷瘤小鼠中自然杀伤(natural killer，NK)细胞和巨噬 细胞的活化。另外，表达免疫调苄基因如白细胞介素12(IL-12)的SV载体具有提高的抗 肿瘤和免疫刺激作用。然而，这些方法通常还未导致完全的肿瘤缓解（tumor remission) 。此外，某些肿瘤细胞可能不被SV有效祀向，强调了对于开发增强SV抗 癌疗法的新途径的需求。 之前，假设SV载体的使其成为有效的溶瘤剂和基因递送系统的特质（如通过血流 传播和递送高水平异源蛋白的能力)还能够用于有效的TAA递送。此外，SV生命周期的 特征在于缺少DNA相，使载体更加安全，还涉及高水平双链RNA(dsRNA)(强烈的免疫学'危险 信号'）、以及随后的I型干扰素通路的活化。安全性、免疫原性、有效传播和高TAA 表达的组合使SV/TAA成为引人注目的0V/TAA的候选者。因此，本领域所需要的是使用SV/ TAA治疗患有肿瘤的哺乳动物的方法，从而利用所有上文提到的益处。
技术实现思路
本文公开的BALB/c CT26结肠癌肿瘤模型用于探究SV作为0V/TAA试剂的用途。发 现并不像其它试验的肿瘤模型，CT26细胞在体内并不被SV靶向。然而，携带β半乳糖苷酶的 SV载体(SV/LacZ)在荷有表达LacZ的CT26肿瘤的小鼠中具有显著的治疗效力。使用活体成 像系统（in vivo imaging system, IVIS)用于焚光素酶活性的体内灵敏检测，纵膈淋 巴结(mediastinal lymph nodes，MLN)被识别为腹膜内（intraperitoneal，i ·ρ·)注射携带 萤火虫荧光素酶基因的SV载体（SV/Fluc)之后早期瞬时异源蛋白表达的部位。TAA递送至 MLN中标志着强烈免疫应答的起点，而该强免疫应答以显示对LacZ阳性和阴性肿瘤细胞的 强细胞毒性的效应和记忆CD8+T细胞的产生为顶峰。后一种现象被称为表位扩散(epitope spreading)，现已提议为患者中有效癌症免疫疗法的重要组分。 -方面，本专利技术提供一种用于治疗患有肿瘤的哺乳动物的方法，所述方法包括以 下步骤:鉴定由该肿瘤表达的肿瘤相关抗原(TAA)，并向该哺乳动物胃肠外给予治疗有效量 的携带编码TAA的基因的辛德毕斯病毒载体，使所述哺乳动物足以引起针对所述肿瘤的免 疫应答，从而治疗所述肿瘤。 另一方面，本专利技术提供一种在哺乳动物中诱导针对肿瘤的CD8+T-细胞介导的免疫 应答的方法，所述方法包括以下步骤:鉴定至少一种由该肿瘤表达的肿瘤相关抗原(TAA)， 和向需要此类治疗的哺乳动物以有效引起针对肿瘤的CD8+T-细胞介导的免疫应答的量胃 肠外给予携带编码TAA的基因的辛德毕斯病毒载体。 根据本说明书、权利要求和附图，本专利技术的这些及其它方面对于本领域普通技术 人员将是明显的。【附图说明】 图Ia-Ic · SV/LacZ抑制表达LacZ的CT26 · CL25肿瘤的生长。（a)将0 · 5 X IO6的表达 LacZ的CT26.CL25(左图）或LacZ阴性CT26.WT(右图）细胞皮下（s.c.)注射到BALB/c小鼠的 右胁腹。肿瘤接种后第9天开始，用SV/LacZ、对照SV/Fluc载体或培养基(假处理(Mock))腹 膜内处理小鼠。测量肿瘤体积(mm 3)并绘图（N=3-4)。数据代表至少两次独立的实验。（b)腹 膜CT26 · CL25荷瘤小鼠的Kaplan-Meier存活图。将2 · 5 X IO4的CT26 · CL25细胞腹膜内注射并 在第4天开始处理(N=S)t3SVAacZ和假处理组的数据代表2次独立实验。（c)示出经SV/LacZ 和对照处理的CT26.CL25.Fluc肺荷瘤小鼠的代表性IVIS图像(左图）。相对肿瘤生长(右上 图）通过将各个体小鼠的发光标准化至第一图像(第2天)来测定，并对存活率作图（右下图） (N = 5-8)。数据代表至少两次独立的实验。（a)和（c)中的数据表示为平均值土SEM.*p〈 0 · 05**p〈0 · 01。SV，辛德毕斯病毒载体。 图2a-2c. TAA表达和T细胞活化在纵膈淋巴结中发生。（a)皮下CT26. CL25荷瘤小鼠 (左图）或无瘤小鼠（右图）用SV/Fluc.腹膜内处理。在第5次（左图）或第1次(右图）处理后3 小时，拍摄生物发光图像来监测来自载体的Fluc表达。为了确定上身信号的来源，提取MLN 并单独成像(右图）。左图中的红色圈表示各小鼠中皮下瘤的位置。（b)CT26.CL25.Fluc肺荷 瘤小鼠用SV/LacZ处理。24小时后，提取纵膈和腹股沟淋巴结并染色，以确定T细胞(CD3阳 性，MHC II类阴性)在淋巴结中的百分比。示出代表性图（左图）及其定量(右图；11 = 3)。（(：） 分析在腹膜内SV/LacZ注射后24小时从肺荷瘤小鼠的纵膈和腹股沟淋巴结提取的CD8+T细 胞上CD69的表达。示出代表性流式细胞图（左图）、和示出CD69高的细胞的百分比的柱状图 (右图；n = 3) Jb)和（c)中的数据代表两次独立的实验（第二实验在腹膜内荷瘤小鼠中完 成），并表示为平均值土 SEMjpW. 05#p〈0.01 Jluc，萤火虫荧光素酶;MLN，纵膈淋巴结； ILN，腹股沟淋巴结;S/L，SV/LacZ(SV，辛德毕斯病毒载体）；TAA，肿瘤相关抗原。 图3a和3b. SV/LacZ诱导强烈的CD8+T细胞应答。（a)CT26. CL25 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于治疗患有肿瘤的哺乳动物的方法，所述方法包括以下步骤：鉴定由所述肿瘤表达的肿瘤相关抗原(TAA)，并向所述哺乳动物胃肠外给予治疗有效量的携带编码TAA的基因的辛德毕斯病毒载体，使所述哺乳动物足以引起针对所述肿瘤的免疫应答，从而治疗所述肿瘤。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：D·梅鲁埃洛，T·格兰诺特，山梨好秀，
申请(专利权)人：纽约大学，
类型：发明
国别省市：美国;US