【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请本申请要求2013年10月22日提交的美国临时申请序列No.61/894,299和2014年3月14日提交的美国临时申请序列No.61/953,516的优先权，其公开内容通过引用并入本文。序列表本说明书参考序列表(于2014年10月22日以名称为“2006685-0687_SL.txt”的.txt文件形式按电子方式提交)。.txt文件于2014年10月22日生成且大小为35,552字节。序列表的全部内容通过引用并入本文。背景已广泛探讨递送核酸作为潜在的治疗选择用于某些疾病状态。特别地，RNA干扰(RNAi)已经是重要的研究和临床开发的目标。尽管RNAi诸如短干扰RNA(siRNA)可能具有治疗潜力，但是其在治疗涉及缺少一种或多种蛋白质的疾病方面用处甚微。信使RNA(mRNA)疗法已成为日益重要的用于治疗各种疾病(特别是与缺少一种或多种蛋白质相关的疾病)的选择。专利技术概述本专利技术提供用于高度有效的体内递送和表达mRNA和编码蛋白质的改进的方法和组合物。本专利技术部分基于令人惊讶的发现，即基于一类特定的阳离子脂质(诸如具有本文所述的式I-c的结构的那些)的脂质体出乎意料地在体内递送mRNA和产生编码蛋白质方面有效，甚至比被认为是现有技术中递送mRNA方面最好的那些阳离子脂质更有效。实际上，在本专利技术之前，已广泛探讨阳离子脂质作为常用于包封包括mRNA的核酸以进行体内递送的脂质体的重要组分。由于独特地...
【技术保护点】
一种体内递送信使RNA(mRNA)的方法，所述方法包括向需要递送的受试者施用包含包封在脂质体内的编码蛋白质的mRNA的组合物，以使施用所述组合物导致由所述mRNA编码的蛋白质的体内表达；其中所述脂质体包含式I‑c的阳离子脂质：或其药学上可接受的盐，其中：p是1至9之间的整数，包括端值；R2的每个实例独立地为氢或任选取代的C1‑6烷基；R6和R7的每个实例独立地为式(i)、(ii)或(iii)的基团；式(i)、(ii)和(iii)为：其中：R’的每个实例独立地为氢或任选取代的烷基；X为O、S或NRX，其中RX为氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、或氮保护基团；Y为O、S或NRY，其中RY为氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、或氮保护基团；RP为氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、连接至氧原子的氧保护基团、连接至硫原子的硫保护基团、或连...
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.10.22 US 61/894,299;2014.03.14 US 61/953,5161.一种体内递送信使RNA(mRNA)的方法，所述方法包括
向需要递送的受试者施用包含包封在脂质体内的编码蛋白质的mRNA的组合物，以使施
用所述组合物导致由所述mRNA编码的蛋白质的体内表达；
其中所述脂质体包含式I-c的阳离子脂质：
或其药学上可接受的盐，
其中：
p是1至9之间的整数，包括端值；
R2的每个实例独立地为氢或任选取代的C1-6烷基；
R6和R7的每个实例独立地为式(i)、(ii)或(iii)的基团；
式(i)、(ii)和(iii)为：
其中：
R’的每个实例独立地为氢或任选取代的烷基；
X为O、S或NRX，其中RX为氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取
代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、或氮保护基团；
Y为O、S或NRY，其中RY为氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取
代的碳环基、任选取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、或氮保护基团；
RP为氢、任选取代的烷基、任选取代的烯基、任选取代的炔基、任选取代的碳环基、任选
取代的杂环基、任选取代的芳基、任选取代的杂芳基、连接至氧原子的氧保护基团、连接至
硫原子的硫保护基团、或连接至氮原子的氮保护基团；以及
RL为任选取代的C1-50烷基、任选取代的C2-50烯基、任选取代的C2-50炔基、任选取代的杂
C1-50烷基、任选取代的杂C2-50烯基、任选取代的杂C2-50炔基、或聚合物。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述阳离子脂质为cKK-E12：
3.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述脂质体还包含一种或多种非阳离子
脂质、一种或多种基于胆固醇的脂质和/或一种或多种PEG-修饰的脂质。
4.如权利要求3所述的方法，其中所述一种或多种非阳离子脂质选自DSPC(1，2-二硬脂
酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)、DPPC(1，2-二棕榈酰基-sn-甘油-3-磷酸胆碱)、DOPE(1，2-二
油基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、DOPC(1，2-二油基-sn-甘油-3-磷脂酰胆碱)DPPE(1，2-二棕
榈酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、DMPE(1，2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酸乙醇胺)、DOPG
(，2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酸-(1′-rac-甘油))。
5.如权利要求3或4所述的方法，其中所述一种或多种基于胆固醇的脂质是胆固醇和/
或聚乙二醇化的胆固醇。
6.如权利要求3-5中任一项所述的方法，其中所述一种或多种PEG-修饰的脂质包含共
价连接至具有C6-C20长度的烷基链的脂质的长度为至多5kDa的聚(乙二醇)链。
7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述脂质体包含cKK-E12、DOPE、胆固醇
和DMG-PEG2K。
8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述阳离子脂质构成约30-50％摩尔比
的所述脂质体。
9.如权利要求8所述的方法，其中所述阳离子脂质构成约40％摩尔比的所述脂质体。
10.如权利要求7-9中任一项所述的方法，其中cKK-E12∶DOPE∶胆固醇∶DMG-PEG2K的比
率为约40∶30∶20∶10摩尔比。
11.如权利要求7-9中任一项所述的方法，其中cKK-E12∶DOPE∶胆固醇∶DMG-PEG2K的比
率为约40∶30∶25∶5摩尔比。
12.如权利要求7-9中任一项所述的方法，其中cKK-E12∶DOPE∶胆固醇∶DMG-PEG2K的比
率为约40∶32∶25∶3摩尔比。
13.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述脂质体具有小于约250nm、200nm、
150nm、100nm、75nm或50nm的大小。
14.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中静脉内施用所述组合物。
15.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中经由肺递送施用所述组合物。
16.如权利要求15所述的方法，其中通过气溶胶化、吸入、雾化或滴注进行所述肺递送。
17.如权利要求1-13中任一项所述的方法，其中鞘内施用所述组合物。
18.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中由所述mRNA编码的蛋白质的表达可于
肝、肾、心、脾、血清、脑、骨骼肌、淋巴结、皮肤和脑脊液中检测到。
19.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中由所述mRNA编码的蛋白质的表达可在
所述施用后3小时检测到。
20.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中由所述mRNA编码的蛋白质的表达可在
所述施用后6小时检测到。
21.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中由所述mRNA编码的蛋白质的表达可在
所述施用后12小时检测到。
22.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中由所述mRNA编码的蛋白质的表达可在
所述施用后24小时检测到。
23.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中由所述mRNA编码的蛋白质的表达可在
所述施用后1周检测到。
24.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述mRNA具有为或大于约0.5kb、1kb、
1.5kb、2kb、2.5kb、3kb、3.5kb、4kb、4.5kb或5kb的长度。
25.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中由所述mRNA编码的蛋白质为胞质蛋白
质。
26.如权利要求1-24中任一项所述的方法，其中由所述mRNA编码的蛋白质为分泌蛋白。
27.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中由所述mRNA编码的蛋白质为酶。
28.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中由所述mRNA编码的蛋白质为精氨琥珀
酸合成酶(ASS1)、因子IX、运动神经元生存蛋白1、或苯丙氨酸羟化酶。
29.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述mRNA以约0.1-2.0mg/kg体重范围
内的剂量施用。
30.如权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述mRNA以为或小于约1.0mg/kg体重
的剂量施用。
31.如权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述mRNA以为或小于约0.5mg/kg体重
的剂量施用。
32.如权利要求1-28中任一项所述的方法，其中所述mRNA以为或小于约0.3mg/kg体重
的剂量施用。
33.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述mRNA包含一种或多种修饰的核苷
酸。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述一种或多种修饰的核苷酸包含假尿苷、N-1-甲
基-假尿苷、2-氨基腺苷、2-硫代胸苷、肌苷、吡咯并-嘧啶、3-甲基...
【专利技术属性】
技术研发人员：M·哈特莱因，D·安德森，Y·董，F·德罗莎，
申请(专利权)人：夏尔人类遗传性治疗公司，麻省理工学院，
类型：发明
国别省市：美国;US
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