一种纳米仿脂蛋白结构药物载体及其制备方法和应用技术

本发明专利技术提供了一种原料易得、安全性高、具有pH敏感释药功能的纳米仿脂蛋白结构药物载体及其制备方法和在制备治疗肿瘤中的应用。本纳米仿脂蛋白结构药物载体，由脂质核心和包覆蛋白组成，所述脂质核心由包载药物，二油酰磷脂酰乙醇胺，油酸，胆固醇和十八胺组成；所述包覆蛋白通过静电作用吸附于脂质核心外围。所述纳米仿脂蛋白结构药物载体，用于制备治疗肿瘤的药物，在pH 7.4的溶液环境中结构稳定，在pH 6.5以下的溶液环境中快速释放包载药物。本发明专利技术的纳米仿脂蛋白结构药物载体作为具有生物相容性，肿瘤靶向以及pH敏感释药功能的一种新型仿纳米仿脂蛋白结构药物载体，可有效将药物脂溶性抗肿瘤药物递送至肿瘤细胞内，达到理想的抗肿瘤效果。

Nanostructured lipoprotein structural drug carrier and preparation method and application thereof

The present invention provides a kind of nano lipoprotein structure drug carrier with easy raw material, high safety, pH sensitive releasing function and its preparation method and application in preparing tumor treatment. The imitation of lipoprotein structure nano drug carrier, composed of lipid core and coating protein, the lipid core by drug loaded two oil, phosphatidyl ethanolamine, oleic acid, cholesterol and eighteen amine; the protein coated by electrostatic adsorption on lipid core periphery. The nano structure imitation lipoprotein drug carrier, preparation of medicine for treating tumor, stable structure in solution environment pH 7.4, rapid release of drug loaded in the solution is below 6.5 in pH. Nano imitation of lipoprotein structure as drug carrier of the invention has good biocompatibility, tumor targeting and pH sensitive drug release function of a novel biomimetic nano imitation of lipoprotein structure drug carrier, the drug can effectively lipid soluble antitumor drug delivery to tumor cells, to achieve the ideal antitumor effect.

【技术实现步骤摘要】
一种纳米仿脂蛋白结构药物载体及其制备方法和应用
本专利技术属于医药制剂领域，涉及一种纳米仿脂蛋白结构药物载体及其制备方法和应用。
技术介绍
脂蛋白（Lipoprotein）是由包含载脂蛋白和游离胆固醇（Freecholesterol,FC）的磷脂层以及非极性的脂质核心组成的生物大分子，作为内源性载体，在血浆中承担胆固醇、胆固醇酯的运送。早在20世纪60年代天然脂蛋白已作为药物载体进行研究，而近年来合成脂蛋白成为药物递送领域新的研究热点。目前研究较广泛的是基于低密度脂蛋白和高密度脂蛋白的纳米药物载体。与其他纳米粒相比，合成脂蛋白载体具有显著的优势。首先，合成脂蛋白纳米载体具有良好的生物相容性，不仅可以避免被体内网状内皮系统识别而快速清除，也可在体内被彻底降解。其次，合成脂蛋白构建的载体由亲水性表面和疏水性核心组成，这种结构有利于运输疏水性物质。合成脂蛋白载体在血液中可长时间循环，而且它的粒径大小适宜，既小到可以穿透肿瘤纤维间隙，也可避免由于粒径过小引起肾脏的快速消隙，也可避免由于粒径过小引起肾脏的快速消除，因此是一种可维持长时间疗效的良好的纳米药物载体。由于脂蛋白纳米载体都来源于血浆分离，难以大规模生产，且其生物安全性也受到质疑，因此开发新型的人工模拟脂蛋白或纳米仿脂蛋白结构药物载体极具意义。尽管相关肽的合成技术已经开发，但用作临床纳米载体还有很多因素需要考察。此外，低密度脂蛋白受体介导的机制并不是一个理想的靶向传递途径，这些受体也存在于一些正常组织中，可能导致靶点外细胞毒性，另外，低密度脂蛋白受体在许多肿瘤细胞不过度表达，都限制了其进一步的应用。因此需要构建一种新型的仿纳米仿脂蛋白结构药物载体，来继承其优点，克服其不足。
技术实现思路
针对目前抗肿瘤载体所面临的问题，本专利技术提供一种原料易得、安全性高、具有pH敏感释药功能的的纳米仿脂蛋白结构药物载体及其一种简便地制备该纳米仿脂蛋白结构药物载体的方法。本专利技术另一目是提供所述纳米仿脂蛋白结构药物载体在制备治疗肿瘤药物中的应用。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案。一种纳米仿脂蛋白结构药物载体，由脂质核心与包覆蛋白的质量比为5-20:1的脂质核心和包覆蛋白组成，所述脂质核心由包载药物，二油酰磷脂酰乙醇胺，油酸，胆固醇，十八胺组成，所述二油酰磷脂酰乙醇胺与油酸摩尔比为1-8:1；所述二油酰磷脂酰乙醇胺与胆固醇的质量比为2-6:1。作为优选，载药脂质核心与包覆蛋白的质量比为10-20:1；二油酰磷脂酰乙醇胺与油酸摩尔比为2-4:1；二油酰磷脂酰乙醇胺与胆固醇的质量比为4-6:1。上述纳米仿脂蛋白结构药物载体，二油酰磷脂酰乙醇胺与包载药物的质量比为5-20:1；二油酰磷脂酰乙醇胺与十八胺的质量比为15-60:1。作为优选，二油酰磷脂酰乙醇胺与被载药物的质量比为10-15:1；二油酰磷脂酰乙醇胺与十八胺的质量比为30-60:1。上述纳米仿脂蛋白结构药物载体，所述的包覆蛋白为血清蛋白，选自人血清蛋白或牛血清蛋白。所述包覆蛋白通过静电作用吸附于脂质核心外围，作为纳米仿脂蛋白结构药物载体的蛋白结构部分。上述纳米仿脂蛋白结构药物载体，所述的包载药物为脂溶性抗肿瘤药物，优选为紫杉烷、姜黄素、喜树碱、多西他赛，更优选为紫杉烷。所述紫杉烷选自紫杉醇、多烯紫杉醇、7-乙酰基紫杉醇、t-乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基紫杉醇、10-去乙酰基-7-表紫杉醇、7-木糖苷紫杉醇、10-去乙酰基-7-戊二酰基紫杉醇、7-N，N-二甲基甘氨酰紫杉醇和7-L-丙氨酰紫杉醇中的一种或者多种。上述纳米仿脂蛋白结构药物载体，所述纳米仿脂蛋白结构药物载体，粒径为50-150nm；所述脂质核心的粒径为60-120nm。一种制备上述纳米仿脂蛋白结构药物载体的方法，包括以下步骤：1）将二油酰磷脂酰乙醇胺、油酸、胆固醇、包载药物、十八胺用有机溶剂溶解，减压蒸干成膜；加入磷酸盐缓冲液冰浴超声，制成载药脂质核心液；（2）称取包覆蛋白，用磷酸缓冲液溶解成蛋白溶液，缓慢、搅拌加入到上述步骤（1）所得载药脂质核心液中，30-40ºC孵育6-8h，即得纳米仿脂蛋白结构药物载体。上述步骤（1）中，蒸干温度为30-50℃，优选为35-40℃；磷酸缓冲液的pH为7.4；超声时间为5-15min，优选为5-10min。上述步骤（1）中，有机溶剂选自乙醚、氯仿和二氯甲烷中的一种或几种的混合。上述步骤（2）中包覆蛋白的浓度为1-10mg/ml，优选为1-5mg/ml。所述纳米仿脂蛋白结构药物载体用于制备治疗肿瘤药物的应用。应用时，给药方式为静脉注射。在纳米仿脂蛋白结构药物载体的脂质核心中加入少量十八胺，使脂质核心带正电荷。由于血清蛋白的等电点约为4.9-5.3，因此在pH7.4的近中性环境下，血清蛋白带负电荷，通过正负电荷相互吸引的的静电作用包覆在带正电荷的脂质核心上。纳米仿脂蛋白结构药物载体中油酸成分在的中性条件下，羧酸基离子化，弥补二油酰磷脂酰乙醇胺（DOPE）的立体缺陷，共同形成稳定的脂质体双层膜，可在血浆等近中性的体液中稳定存在。表面的包覆蛋白可被肿瘤细胞表面的受体识别，介导纳米仿脂蛋白结构药物载体内吞进入肿瘤细胞。在酸性溶酶体环境中，由于pH<6.5，油酸羧酸基质子化，失去对DOPE的补缺作用，引起六方晶格（非相层结构）的形成，双分子层稳定性受到破坏，与生物膜发生膜融合作用，释放包封物质至胞浆内，实现溶酶体逃逸功能。本专利技术具有以下优点：本专利技术制备的新型纳米仿脂蛋白结构药物载体具有肿瘤靶向及pH敏感性，可制备多种包载脂溶性药物的制剂，尤其是脂溶性抗肿瘤药物制剂。血浆中含有大量带负电的血浆调理蛋白，在对外源性物质的清除中发挥重要作用：调理蛋白吸附于外源性物质，进而被内皮系统（RES）识别和清除。因此，将内源性血清白蛋白通过合适手段吸附于载药纳米颗粒表面，一方面可以降低表面电荷，另外可以增加载药纳米颗粒表面的亲水性，降低与调理蛋白等的亲和力。表面电荷的降低和亲水性的增加可以减少与血浆蛋白及调理蛋白的结合，增加载药纳米颗粒在血浆中的稳定性。本纳米仿脂蛋白结构药物载体由于具有亲水性及生物相容性蛋白层，因此在血浆中具有良好的稳定性，可延长其在血液中的循环时间，增加体内稳定性，并且通过GP60（Glycoprotein60）受体及富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白（Secretedprotein,acidicandrichincysteine，SPARC）介导的内吞，可靶向作用于肿瘤细胞。在纳米仿脂蛋白结构药物载体的脂质核心，加入具有pH敏感作用的脂质成分二油酰磷脂酰乙醇胺（1,2-dioleoyl-sn-glycero-3-phosphoethanolamine,DOPE）与油酸（Oleicacid,OA），用来实现内涵体或溶酶体逃逸功能。因此，本专利技术的纳米仿脂蛋白结构药物载体作为具有生物相容性，肿瘤靶向以及pH敏感释药功能的一种新型仿纳米仿脂蛋白结构药物载体，可有效将药物脂溶性抗肿瘤药物递送至肿瘤细胞内，达到理想的抗肿瘤效果。附图说明图1为载紫杉醇仿脂蛋白结构载体的电镜照片；图2为载紫杉醇仿脂蛋白结构载体在不同pH条件下的体外累积释放曲线；图3为各载药纳米载体对MCF-7细胞的细胞毒性。具体实施方式下面结合实施例和附图对本专利技术做进一本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种纳米仿脂蛋白结构药物载体，其特征在于，由脂质核心与包覆蛋白质量比为5‑20:1的脂质核心和包覆蛋白组成，所述脂质核心由包载药物，二油酰磷脂酰乙醇胺，油酸，胆固醇，十八胺组成，所述二油酰磷脂酰乙醇胺与油酸摩尔比为1‑8:1；二油酰磷脂酰乙醇胺与胆固醇的质量比为2‑6:1。

【技术特征摘要】
1.一种纳米仿脂蛋白结构药物载体，其特征在于，由脂质核心与包覆蛋白质量比为5-20:1的脂质核心和包覆蛋白组成，所述脂质核心由包载药物，二油酰磷脂酰乙醇胺，油酸，胆固醇，十八胺组成，所述二油酰磷脂酰乙醇胺与油酸摩尔比为1-8:1；二油酰磷脂酰乙醇胺与胆固醇的质量比为2-6:1。2.根据权利要求1所述的纳米仿脂蛋白结构药物载体，其特征在于，二油酰磷脂酰乙醇胺与包载药物的质量比为5-20:1；二油酰磷脂酰乙醇胺与十八胺的质量比为15-60:1。3.根据权利要求1所述的纳米仿脂蛋白结构药物载体，其特征在于，采用以下制备方法获得：将二油酰磷脂酰乙醇胺、油酸、胆固醇、包载药物、十八胺用有机溶剂溶解，蒸干成膜；加入磷酸盐缓冲液冰浴超声，制成载药脂质核心液；称取包覆蛋白，用磷酸缓冲液溶解成蛋白溶液，加入到上述载药脂质核心液中，30-40ºC孵育6-8h，即得纳米仿脂蛋白结构药物载体。4.根据权利要求1所述的纳米仿脂蛋白结构药物载体，其特征在于，所述包覆蛋白通过静电作用吸附于脂质核心外围；...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈聪慧，丁昌元，王慧，李海刚，
申请(专利权)人：临沂大学，
类型：发明
国别省市：山东,37