一种人TSCM细胞的制备方法及应用技术

本发明专利技术公开了一种人TSCM细胞的制备方法，包括步骤：（1）在无菌条件下用血细胞分离机或注射器采集或者外周静脉血，经聚蔗糖-泛影葡糖胺密度梯度离心获得单个核细胞；（2）将上述分离的PBMCs置于含有刺激剂和细胞因子培养基内，调整细胞密度为（0.5～2）×106个/mL，转入细胞培养板、培养瓶或者培养袋内，于培养箱内培养；（3）细胞培养48-72小时后进行半量更换培养液并补加等量的培养液，以维持细胞密度为（0.5～2.0）×106个/mL;根据细胞的生长状态，第10～21天收获细胞。本发明专利技术利用抗CD3单抗和抗CD28单抗作为刺激剂，激活TSCM细胞，并联合细胞因子rh IL-7、rh IL-15和rh IL-2共同刺激，利用IM-12阻断干细胞分化培养TSCM细胞，使获得的细胞具有记忆细胞和干细胞的共同特性。从而为临床过继性免疫细胞治疗提供新的可选方案。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于细胞免疫学
，具体地说是一种体外扩增人外周血TSCM细胞的方法及应用。
技术介绍
近年来，随着免疫学技术的发展，非特异性免疫细胞治疗在临床上因为有一定的效果，被越来越多的人接受。目前现有的免疫细胞治疗的有CIK、CTL等细胞，这些在体内存活时间短，并且治疗效果随个体差异及制备手段的不同效果差异也很大。免疫细胞的自我更新、维持稳态、杀瘤能力都会随着分化而减弱，最后变成终末分化细胞，呈现衰老等状态。而市面上的CIK、CTL等细胞大多都趋近于终末分化细胞。TSCM细胞可以通过自我更新在体内长期存在，维持自我稳态，并具有更强的杀瘤活性。国外现有的TSCM培养方法培养细胞量较少，不能满足一次回输所需要的量。本方法，通过使用细胞IL-7、IL-15维持体内干性细胞数量并且增强细胞毒性和记忆性，頂-12独断GSK-30信号并且增强Wnt信号通路是TSCM细胞增殖但是维持干性，降低其分化程度，提高表达CD45RA的细胞的量，使这群细胞具有干细胞特性，维持稳态及自我更新能力，并具有更强的杀瘤活性。而不仅仅是使用终末分化的CIK或者CTL细胞。并且TSCM细胞也是唯一一种可本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人TSCM细胞的制备方法，包括步骤：（1）在无菌条件下用血细胞分离机或50mL注射器采集或者外周静脉血，经聚蔗糖‑泛影葡糖胺密度梯度离心获得单个核细胞；（2）将上述分离的PBMCs置于含有刺激剂和细胞因子为1‑500ng/mL rh IL‑7、1‑500 ng/mL rh IL‑15、10‑1500IU rh IL‑2、1‑50ng/mL抗CD3单抗、5‑300ng/mL 抗CD28单抗、0.05‑50μM IM‑12和1‑10%自体血浆的RPMI 1640、OpTmizer、AIM‑V、SCGM或GT‑T551培养基内，调整细胞密度为（0.5～2）×106个/mL，转入细胞培养板、培养瓶...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：崔博靖，付凡，饶秀茸，马飞，王宇环，
申请(专利权)人：深圳市合一康生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44