双阴性T细胞的转化扩增方法技术

本发明专利技术公开了一种双阴性T细胞的转化扩增方法，包括如下步骤：(1)提取起始样品中的单个核细胞，去除该单个核细胞中的CD8+T细胞和NK细胞；(2)将步骤(1)得到的样品在体外用包含T细胞刺激剂及细胞因子的培养基中培养；在培养过程中同时加入OX40的激活抗体或OX40的配体；(3)培养5～7天后，提纯双阴性T细胞。本发明专利技术无需提纯CD4+T细胞或天然DN T细胞即可实施，降低了操作难度，增加了操作效率。培养周期短。本发明专利技术可有效降低DN T细胞在扩增中的凋亡率，同时增强其免疫抑制功能。DN T细胞的收获率较之现有技术有极大的提升。本发明专利技术获得的DN T细胞具有显著的免疫抑制功能，分裂增殖的CD4T细胞的百分比较之现有技术下降到2.94％，抑制率可达到93％。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种双阴性Τ细胞的转化扩增方法，具体地说是一种可以有效降低扩增过程中双阴性Τ细胞细胞凋亡并促进双阴性Τ细胞免疫抑制功能的双阴性Τ细胞体外转化扩增方法。
技术介绍
自体免疫细胞治疗，是将患者自身的免疫细胞在体外进行各种处理后，再回输给病人，以达到治疗疾病的目的。免疫学者已经发现了多种免疫抑制性细胞，包括经典的CD4+CD25+细胞，ΝΚΤ细胞以及CD4—CD8—Τ细胞(Double Negative T Regulatory Cells，简写为双阴性T细胞或DN T细胞)等，其中DN T细胞在小鼠和人的研究中已经证实了此类免疫抑制型细胞具有下调免疫反应、抑制移植排斥、防止移植物抗宿主病(GVHD)以及预防和治疗自身免疫性疾病等作用。但由于此类细胞在人体内含量极少、提取困难;体外扩增难度高、难以达到治疗数量级;缺乏特异的细胞表面标志物而遭遇瓶颈，难以成功地推广到临床应用。如何获得足够量的DN Τ细胞，降低特定的机体免疫反应，是目前重要的技术难题。目前已知涉及体外扩增DNΤ细胞的方法，主要是体外对天然存在的少量DN Τ细胞进行扩增。该方法首先在体外去除外周血中的CD本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种双阴性T细胞的转化扩增方法，其特征在于包括如下步骤：(1)提取起始样品中的单个核细胞，去除该单个核细胞中的CD8+T细胞和NK细胞；(2)将步骤(1)得到的样品在体外用包含T细胞刺激剂及细胞因子的培养基中培养；在培养过程中同时加入OX40的激活抗体或OX40的配体；(3)培养5～7天后，提纯双阴性T细胞。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张栋，李新民，赵新颜，孙广永，刘锴，田丹，田月，施文，孙晓静，许虎峰，
申请(专利权)人：首都医科大学附属北京友谊医院，
类型：发明
国别省市：北京;11