琼脂糖在PCR扩增中的应用、PCR扩增试剂盒及PCR扩增方法技术

本发明专利技术提供了琼脂糖在PCR扩增中的应用，在配置PCR扩增体系过程中加入琼脂糖。进一步的，本发明专利技术还提供了相应的PCR扩增试剂盒及PCR扩增方法，PCR扩增试剂盒包括盒体及盒体中单独存放的试剂，所述试剂包括琼脂糖。所述PCR扩增方法，包括在配置PCR扩增体系过程中加入琼脂糖的步骤。本发明专利技术通过实验证明了在配置PCR扩增体系过程中加入琼脂糖，可以提高PCR扩增反应敏感度，使反应更加充分，提高微量DNA的PCR扩增效果，最终获得完整STR分型结果。并且，由于PCR扩增反应敏感度的提高，PCR扩增过程中试剂的使用量可明显降低，从而降低实验成本。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，特别涉及琼脂糖在PCR扩增中的应用、PCR扩增试剂盒及PCR扩增方法。
技术介绍
PCR是聚合酶链式反应的简称，是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术，其研究对生物学各个领域有着深刻的影响，与医、农业、生物工程等的关系十分密切，例如PCR技术涉及在农业上育种的新途径，涉及在医学上检测、治疗遗传疾病，涉及以基因工程为基础的新兴工业，涉及法医物证鉴定、亲子鉴定等。然而，对于极其微量DNA样本，由于PCR扩增反应敏感度低，很难捕捉到有效的DNA信息。对于微量的DNA样本，常规的PCR扩增方法的反应敏感度低是导致后续PCR扩增效果差的主要原因。例如，在法医侦检工作中，犯罪现场的法医学物证的鉴定和检出，对于及时有效地指证犯罪分子，打击犯罪起到至关重要的作用。犯罪现场中指纹、烟蒂、指甲等都含有微量的DNA信息，可为找出或指证犯罪嫌疑人提供科学依据。但由于犯罪现场的DNA残留甚微，采集到的痕迹法医物证DNA极其微量，常规PCR扩增方法的反应敏感度低，难以捕捉到有效DNA信息从而扩增效果较差，直接导致后续的DNA检出率低，STR分型失败，不能指认犯罪个体。因此，如何提高PCR扩增的反应敏感度，从而提高微量DNA的PCR扩增效果，对最终获得完整STR分型结果具有重要意义。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术有必要提供一种能提高PCR扩增的反应敏感度，从而提高微量DNA的PCR扩增效果的琼脂糖在PCR扩增中的应用、PCR扩增试剂盒及PCR扩增方法。一种琼脂糖在PCR扩增中的应用，在配置PCR扩增体系过程中加入琼脂糖。一种PCR扩增试剂盒，包括盒体及盒体中单独存放的试剂，所述试剂包括琼脂糖。一种PCR扩增方法，所述方法包括在配置PCR扩增体系过程中加入琼脂糖的步骤。本专利技术提供的琼脂糖在PCR扩增中的应用、PCR扩增试剂盒及PCR扩增方法的有益效果是：在配置PCR扩增体系过程中加入琼脂糖，由于琼脂糖对DNA具有极强的吸附力，并提高反应体系的沸点使体系缓冲液不易蒸发，同时琼脂糖流体是由许多微小球体组成，可以包裹反应体系，使整个PCR扩增反应在一个微小空间完成，从而提高PCR扩增的反应敏感度，使反应更加充分，提高微量DNA的PCR扩增效果，最终获得完整STR分型结果。附图说明图1是实验组一的STR图谱，即采用常规的STR荧光检测试剂盒在10μlPCR扩增反应体系下对志愿者一使用过的牙刷上提取的口腔脱落细胞DNA进行PCR扩增后的STR分型结果。图2是实验组二的STR图谱，即采用本专利技术实施方式提供的添加了琼脂糖的PCR扩增试剂盒在10μlPCR扩增反应体系下对志愿者一使用过的牙刷上提取的口腔脱落细胞DNA进行PCR扩增后的STR分型结果。图3是实验组三的STR图谱，即采用常规的STR荧光检测试剂盒在10μlPCR扩增反应体系下对志愿者二使用过的牙刷上提取的口腔脱落细胞DNA进行PCR扩增后的STR分型结果。图4是实验组四的STR图谱，即采用常规的STR荧光检测试剂盒在5μlPCR扩增反应体系下对志愿者二使用过的牙刷上提取的口腔脱落细胞DNA进行PCR扩增后的STR分型结果。图5是实验组五的STR图谱，即采用本专利技术实施方式提供的添加了琼脂糖的PCR扩增试剂盒在5μlPCR扩增反应体系下对志愿者二使用过的牙刷上提取的口腔脱落细胞DNA进行PCR扩增后的STR分型结果。图6是采用本专利技术实施方式提供的添加了琼脂糖的PCR扩增试剂盒在3μlPCR扩增反应体系下进行PCR扩增后的STR分型结果示例1。图7是采用本专利技术实施方式提供的添加了琼脂糖的PCR扩增试剂盒在3μlPCR扩增反应体系下进行PCR扩增后的STR分型结果示例2。具体实施方式本专利技术提供了一种琼脂糖在PCR扩增中的应用。琼脂糖在生物学领域主要用于PCR扩增后的产物检测阶段进行琼脂糖凝胶电泳，并未用于PCR扩增阶段。本专利技术提供的琼脂糖在PCR扩增中的应用，为在配置PCR扩增体系过程中加入琼脂糖。所述琼脂糖溶解于一溶剂后配置为琼脂糖流体使用。所述溶剂为水或缓冲液。所述琼脂糖流体中，琼脂糖的质量百分比为0.01％～0.5％。所述琼脂糖在PCR扩增中的应用包括向PCR扩增反应体系中加入琼脂糖后进行变性、退火及延伸。本专利技术还提供了一种PCR扩增试剂盒，该试剂盒包括盒体及盒体中单独存放的试剂，所述试剂包括琼脂糖。所述琼脂糖为质量浓度为0.01％～0.5％的流体。所述试剂还包括PCRmix、Taq酶、引物。本专利技术还提供了一种PCR扩增方法，该方法包括在配置PCR扩增体系过程中加入琼脂糖的步骤。所述PCR扩增方法还包括琼脂糖溶解于一溶剂后配置为琼脂糖流体。所述溶剂为水或缓冲液。所述琼脂糖流体中，琼脂糖的质量百分比为0.01％～0.5％。所述PCR扩增方法包括向PCR扩增反应体系中加入琼脂糖后进行变性、退火及延伸。下面将结合具体实施例对本专利技术提供的琼脂糖在PCR扩增中的应用、PCR扩增试剂盒及PCR扩增方法予以进一步说明。实施例一将琼脂糖应用于从志愿者一使用过的牙刷上提取的口腔脱落细胞DNA的PCR扩增。称取0.03g琼脂糖加入100g水中加热混合均匀使其溶解，得琼脂糖流体待用。一种PCR扩增试剂盒，包括盒体及盒体内单独存放的试剂，所述试剂包括：琼脂糖，PCRmix，HotStartTaq酶，复合引物。所述琼脂糖为0.03g琼脂糖溶解于100g水中得到的琼脂糖流体。将上述PCR扩增试剂盒用于从志愿者一使用过的牙刷上提取的口腔脱落细胞DNA的PCR扩增。向志愿者一提供一支牙刷，由志愿者洗漱一次后提供给研究人员，提取牙刷中口腔脱落细胞DNA以备后续PCR扩增。设置实验组一、实验组二，对牙刷中提取的相同口腔脱落细胞DNA样本进行PCR扩增，实验组一采用常规STR荧光检测试剂盒进行PCR扩增，实验组二采用本实施方式提供的添加了琼脂糖的PCR扩增试剂盒进行PCR扩增。实验组一的PCR扩增体系配制为：按常规STR荧光检测试剂盒中10μl反应体系的配比，量取4μlPCRmix，0.4μlHotStartTaq酶，2μl复合引物，3.6μlsdH2O混合均匀。实验组二的PCR扩增体系配制为：量取本实施方式提供的添加了琼脂糖的PCR扩增试剂盒中4μlPCRmix，0.4μlHotS本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种琼脂糖在PCR扩增中的应用，其特征在于：在配置PCR扩增体系过程中加入琼脂糖。

【技术特征摘要】
1.一种琼脂糖在PCR扩增中的应用，其特征在于：在配置PCR扩增体
系过程中加入琼脂糖。
2.如权利要求1所述的琼脂糖在PCR扩增中的应用，其特征在于：所
述琼脂糖溶解于一溶剂后配置为琼脂糖流体使用。
3.如权利要求2所述的琼脂糖在PCR扩增中的应用，其特征在于：所
述溶剂为水或缓冲液。
4.如权利要求2所述的琼脂糖在PCR扩增中的应用，其特征在于：所
述琼脂糖流体中，琼脂糖的质量百分比为0.01％～0.5％。
5.一种PCR扩增试剂盒，包括盒体及盒体中单独存放的试剂，其特征
在于：所述试剂包括琼脂糖。
6.如权利要求5所述的PCR扩增试剂盒，其特征在于：...

【专利技术属性】
技术研发人员：罗冰科，佟浩，
申请(专利权)人：武汉瑞博祥生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：湖北;42