新的综合性耳聋相关基因突变检测体系及试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种新的综合性耳聋相关基因突变检测体系，针对目前已知的6个与Waardenburg综合征相关的基因，选取的59个检测位点组成耳聋基因突变检测体系，采用连接酶连接反应的高特异性对目的区域进行杂交、连接，然后通过在连接探针末段引入不同长度的非特异序列以及通过连接酶加接反应获得位点对应的不同长度连接产物，利用标记荧光的通用引物对连接产物进行PCR扩增。本发明专利技术的优越性在于通过对现有多重核酸分子扩增技术加以改进，设计特定的检测探针，设置特定的检测体系组分和反应条件，以同时对6个已知与Waardenburg综合征有关的基因上的共59个位点进行快速拷贝数变异检测，检测可在一个工作日内完成，最低仅需200纳克的DNA即可得到准确的检测结果。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术设及生物学研究和Waardenburg综合征的分子检测领域，具体设及一种新 的综合性耳聋相关基因突变检测体系及试剂盒。
技术介绍
Waardenburg综合征(Waardenburg Syn化ome，WS)，是最常见的染色体显性和隐性 遗传性综合征型耳聋，又称听力-色素综合征，主要的临床特征为感音神经性耳聋W及虹 膜、头发和皮肤的色素分布异常，根据不同的伴随表型又分为4型。WS的人群发病率为1/ 212000,但由于该综合征的不完全外显率达20%，故推测实际人群发病率为1/42000,占先 天性耳聋的2~5%，聋哑人群中发病率为0.9~2.8%。据目前研究表明，WS具有高度的遗传 异质性，已证实与WS有关的基因有6个，分别为:Μ 口F、PAX3、SOX 10、SNA 12、ENDRB、EDN3，已报 道WS基因突变位点有近278个。关于WS的拷贝数变异(Copy number variation,CNV)国外已 有报道，Mil un sky、Wildhardt G利用多重连接依赖探针扩增（Multiplex li gat ion- dependent probe本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种新的综合性耳聋相关基因突变检测体系，其特征在于，针对目前已知的6个与Waardenburg综合征相关的基因，选取的59个检测位点组成耳聋基因突变检测体系，采用连接酶连接反应的高特异性对目的区域进行杂交、连接，然后通过在连接探针末段引入不同长度的非特异序列以及通过连接酶加接反应获得位点对应的不同长度连接产物，利用标记荧光的通用引物对连接产物进行PCR扩增，通过荧光毛细管电泳对扩增产物进行电泳分离，最后通过对电泳图谱的分析获取各个位点的峰高，其中：1)共设计了91对多重PCR引物，91对引物中包括59对检测探针和32对参照探针；针对每个位点设计2条探针：1条5'端探针和1条3'端探针，其5'端...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：冯永，刘德远，刘亚兰，梅凌云，贺楚峰，刘畅，陈红胜，姜正文，
申请(专利权)人：中南大学湘雅医院，天昊生物医药科技苏州有限公司，
类型：发明
国别省市：湖南;43