天然抗肿瘤化合物及其制备方法和用途技术

本发明专利技术公开了一种如式I所示的天然二萜类化合物或其药学上可接受的盐及其制备方法和用途。该化合物具有抑制肿瘤细胞生殖生长的活性，可用于制备抑制真核生物肿瘤细胞增殖的药物或用于制备预防和/或治疗肿瘤的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一株旁盾壳霉属真菌（Paraconiothyriumhawaiiense)稻米发酵物中 一种二萜类化合物的制备方法和用途，该化合物具有抑制肿瘤细胞生殖生长的作用。
技术介绍
肿瘤严重威胁着人类的健康，最新的统计资料显示，全世界每年新发肿瘤患者人 数已达1410万，死于恶性肿瘤的人数增加至820万；我国每10万人群中肿瘤患者约280人， 因肿瘤死亡人数约180人，且肿瘤的发病率呈逐年上升和年轻化的趋势。癌症正在成为人 类健康的第一大杀手。虽然经过各国科学家们多年的努力，出现了一些新的抗肿瘤药物，但 是至今还未出现一种彻底治愈肿瘤的药物，且对危害人类健康最严重的、占恶性肿瘤90% 以上的恶性肿瘤如宫颈癌、乳腺癌、肺癌、肝癌及胃癌等还缺乏有效治疗药物。此外，目前 出现的抗肿瘤药物的高昂价格、临床治疗中产生的耐药性及给患者带来的毒副作用等都表 明，人类迫切需要研究与开发新型、高效的抗癌药物。 在特殊生境或极端环境下形成的生物资源拥有特殊的基因及其表达产物，是人类 的珍贵遗传资源宝库。如近年来发挥着巨大医疗作用的抗癌物质紫杉醇、治疗心血管病洛 伐他汀、抗疟疾药物青蒿素等。特殊生境真菌和植物来源中功能性活性物质的开发利用，可 产生丰富的自主知识产权成果，同时孕育着巨大的产业前景与经济效益。本专利技术涉及的从 旁盾壳霉属真菌稻米发酵物中分离制备的一种新二萜类化合物的抗肿瘤活性及其用途至 今未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种天然二萜类化合物、其制备方法及其在制备抗肿瘤药物 中的用途。 本专利技术的第一方面提供式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，以及化合物的 抗肿瘤生物活性。 本专利技术的第二方面提供一种制备式I所述的化合物的方法，该方法使用分类命名 为旁盾壳霉属（P.hawaiiense)、名称为EC1-38的菌株制备所述化合物。 在本专利技术的一个优选的实施方案中，所述方法包括下列步骤： a)将旁盾壳霉属（P.hawaiiense)菌株EC1-38进行固体发酵，得到发酵培养物； b)将步骤a)中获得的发酵培养物用合适的有机溶剂提取合适的次数，合并提取 液，将所述提取液分离有机溶剂后，得到粗提物； c)将步骤b)中获得的粗提物进行层析分离，得到活性组分溶液，将所述活性组分 溶液用高效液相色谱分离，得到所述化合物。 在本专利技术的另一个优选的实施方案中，所述的制备方法，步骤a)中，发酵使用的 培养基是稻米培养基；优选的发酵温度为20~30°C，进一步优选22~28°C，更优选25°C; 优选的发酵时间为15~25天，进一步优选18~22天，更优选20天。 在本专利技术的又一个优选的实施方案中，所述的制备方法，步骤b)中所述的提取方 式为浸泡提取； 优选地，所述的提取方式是将步骤a)得到的发酵培养物在所述的有机溶液中浸 泡一定的时间（优选的浸泡时间为〇. 5~2天，更优选的浸泡时间为1天）； 优选地，提取的次数为1~5次，进一步优选的提取次数为2~4次，更优选的提 取次数为3次； 优选地，所述的有机溶剂为甲醇、丙酮或乙酸乙酯，进一步优选的有机溶剂为丙酮 或乙酸乙酯，更优选的有机溶剂为乙酸乙酯； 优选地，步骤b)中分离有机溶剂的方式为蒸馏，更优选的分离方式为减压蒸馏。 在本专利技术的又一个优选的实施方案中，所述的制备方法，其中，所述的层析分离为 硅胶柱层析分离和/或凝胶色谱分离，其中所述的硅胶柱层析分离优选为减压硅胶柱层析 分离； 优选地，将步骤b)中获得的粗提物依次进行硅胶柱层析和凝胶色谱分离； 优选地，硅胶柱层析分离步骤中，流动相为石油醚和乙酸乙酯的混合物；进一步优 选地，石油醚与乙酸乙酯的体积比为90~40 : 10~60;更优选地，石油醚与乙酸乙酯的 体积比为70~60 : 30~40 ;更优选地，石油醚与乙酸乙酯的体积比为65 : 35 ; 优选地，凝胶色谱分离步骤中，流动相为甲醇溶液。 在本专利技术的又一个优选的实施方案中，所述的制备方法，其中，高效液相色谱分离 步骤中，流动相为乙腈水溶液； 优选地，乙腈与水的体积比为53 : 47。 上述制备方法中，制备式I所示的化合物中所用的生产菌株是旁盾壳霉属 (P.hawaiienSe)ECl-38,该菌株分离自云南大理苍山被隔担菌侵染的盾蚧，分类命名为旁 盾壳霉属（P.hawaiiense)，菌株名称为EC1-38。 本专利技术的第三方面提供一种药物组合物，其含有本专利技术第一方面提供的式I所示 的化合物或其药学上可接受的盐，以及任选的药学可接受的载体。 所述的药物组合物可以制成注射液、片剂、粉剂、颗粒剂、胶囊、口服液、膏剂、霜 剂等多种形式。上述各种剂型的药物均可以按照药学领域的常规方法制备。所述载体包 括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性 剂、吸附载体、润滑剂等。所述的药物组合物可通过注射、喷射、滴鼻、滴眼、渗透、吸收、物理或化学介导的 方法导入机体如肌肉、皮内、皮下、静脉、粘膜组织；或是被其他物质混合或包裹后导入机 体。 本专利技术的第四方面提供本专利技术第一方面涉及的式I所示的化合物或其药学上可 接受的盐、或本专利技术第三方面涉及的药物组合物在制备抑制真核生物肿瘤细胞增殖的药物 中的用途，或在制备预防和/或治疗肿瘤的药物中的用途； 优选地，所述的真核生物为哺乳动物； 优选地，所述的肿瘤细胞为癌细胞；进一步优选地，所述的癌细胞为肺癌细胞、乳 腺癌细胞、结肠癌细胞、宫颈癌细胞或膀胱癌细胞；更优选地，所述肺癌细胞为肺癌细胞 A549,所述乳腺癌细胞为乳腺癌细胞MCF-7,所述结肠癌细胞为结肠癌细胞HCT116,所述宫 颈癌细胞为宫颈癌细胞HeLa，所述膀胱癌细胞为膀胱癌细胞T24。 优选地，所述的肿瘤为癌；进一步优选地，所述癌为肺癌、乳腺癌、结肠癌、宫颈癌 和膀胱癌。 本专利技术所提供的式I所示的化合物是从微生物固体发酵提取物中首次分离得到 的并命名的新化合物，同时是首次报道其抗肿瘤活性。 本专利技术通过构建细胞筛选模型以鉴定该化合物是否具有抑制肿瘤发生发展的作 用。构建的细胞筛选模型有肺癌细胞（A549)、乳腺癌细胞（MCF-7)、结肠癌细胞（HCT116)、 宫颈癌细胞（HeLa)和膀胱癌细胞（T24)等，采用体外细胞增殖实验MTT法筛选该化合物能 够抑制何种肿瘤细胞的生殖生长，经试验发现该化合物能够较好的抑制上述肿瘤细胞的生 殖生长过程，并且对该化合物呈现剂量效应即随着化合物浓度的增高对肿瘤细胞的生殖生 长的抑制效果越好。【附图说明】 图1为式I所示化合物的核磁共振1H-NMR谱图； 图2为式I所示化合物的核磁共振13C_NMR谱图； 图3为式I所示化合物的核磁共振HMQC谱图； 图4为式I所示化合物的核磁共振HMBC谱图； 图5为式I所示化合物圆二色谱图； 图6为式I所示化合物单晶结构投影图；图7为肿瘤细胞对式I所示化合物的剂量效应图，肿瘤细胞包括肺癌细胞（A549)、 乳腺癌细胞（MCF-7)、结肠癌细胞（HCT116)、宫颈癌细胞（HeLa)和膀胱癌细胞（T24);图8为式I所示化合物对肿瘤细胞的IC5。值；图9为阳性对照药物顺钼（DDP)对肿瘤细胞的IC5。值。【具体实施方式】 下面将结合实施例对本专利技术的实施本文档来自技高网...

【技术保护点】
式I所示的化合物或其药学上可接受的盐，

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：车永胜，陈申习，张杨，任凤霞，牛树彬，
申请(专利权)人：中国人民解放军军事医学科学院毒物药物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11