人ILK基因治疗肿瘤的用途及其相关药物制造技术

本发明专利技术涉及生物技术领域，具体公开了单独的人ILK基因；以及人ILK基因与人EGFR基因作为协同施药靶标，在制备或筛选肿瘤治疗药物中的用途。本发明专利技术还进一步构建了ILK基因小干扰RNA、ILK基因干扰慢病毒载体、ILK基因干扰慢病毒，并公开了他们在与EGFR基因协同治疗肿瘤中的用途。本发明专利技术提供的siRNA或者包含该siRNA序列的慢病毒载体、慢病毒能够特异性抑制人ILK基因和/或人EGFR基因的表达，尤其是慢病毒，本发明专利技术的ILK基因干扰慢病毒能单独、或者与EGFR基因干扰慢病毒协同抑制肿瘤细胞的生长，促进肿瘤细胞凋亡，在肿瘤治疗中具有重要意义。

【技术实现步骤摘要】
人ILK基因治疗肿瘤的用途及其相关药物
本专利技术涉及生物
，具体地涉及单独的人ILK基因；以及人ILK基因和人 EGFR基因协同治疗肿瘤的用途及其相关药物。
技术介绍
目前肿瘤的基因治疗已经取得了蓬勃快速的发展，但是迄今为止，仍然存在很多 需要解决的问题。目前用于肿瘤基因治疗的基因太少，能抑制肿瘤生长的基因为数不多，急 需提供更多可利用的基因。另外，由于肿瘤的发生、发展、转移等过程是一个多基因参与、涉 及多条信号通路的复杂网络系统，因此单个基因治疗或单一治疗方法往往疗效有限。因此， 未来基因治疗发展的重点将在于挖掘并鉴定在临床上有重要价值的基因，探索多个具有不 同抗肿瘤作用机理的基因联合治疗以及将多基因靶向药物联合治疗等。 整合素连接激酶（integrin-linked kinase, ILK)是一种相对分子质量为 59X 103、非受体的Ser/Thr蛋白激酶，同细胞中多种信号转导有关（Duxbury MS，Ito Hj Benoit Ej et al. RNA interference demonstrates a novel role for integrin-1 inked kinase as a determinant of pancreatic adenocarcinoma cell gemcitabine chemoresistance. Clin Cancer Res. 2005Mayl; 11 (9) : 3433-8. )?有研究表明：ILK 具 有介导整合素胞内的信号传导的功能，它能偶联整合素和生长因子受体，参与介导细胞 与基底膜的跨膜信号传导，调控生长因子介导的信号传导、fct信号通路以及整合蛋白， 调节细胞的粘附。生长增殖、分化、黏着和侵袭及组织的纤维化等。体外实验表明，ILK 与许多肿瘤的形成、凋亡、黏附、增殖、侵袭和转移密切相关（Persad S, Dedhar S. The role of integrin-linked kinase(ILK)in cancer progression. Cancer Metastasis Rev.2003Dec;22(4):375-84.)。 表皮生长因子受体（epidermalgrowth factor receptor, EGFR) EGFR 是一种跨膜 蛋白质，属于ErbB受体家族成员，其配体（EGF、TGF-a等）与EGFR胞外段结合使之二聚 化，由此导致胞内段酪氨酸激酶活化以及一系列信号转导的级联反应，促进细胞增殖，血管 生成，转移并抑制细胞凋亡(梁后杰，邹岚.EGFR靶向药物治疗晚期结直肠癌最新进展.中 国处方药2009; 84:58-61.)，从而导致肿瘤的发生。大量研究发现EGFR基因在多种肿瘤组 织中过表达或异常活化，从而使肿瘤细胞增殖、侵袭和转移能力增强。EGFR已成为经临床 验证的多种类型肿瘤的治疗祀点（Ciardiello F, Tortora G. EGFR antagonists in cancer treatment. N Engl J Med2008;358:1160-1174. )〇 RNAi是利用双链RNA介导的序列特异性的转录后基因沉默现象，已成为研究 基因功能的一种新兴的有效手段，并有望成为肿瘤等疾病基因治疗的工具（Izquierdo M.Short interfering RNAs as a tool for cancer gene therapy.Cancer Gene Ther. 2005; 12(3) :217-27.)。慢病毒（Ientivirus)载体是高效的基因转导工具，主要用于 感染对常规方法转染效率较低的细胞，如原代细胞等。慢病毒颗粒可同时感染增殖和非增 殖的细胞，且感染比较稳定、持久。运用慢病毒载体，可实现特定基因的高表达，也可以表 达发夹结构 RNA (short hairpin RNA，shRNA)以 RNA 干扰（RNA interference，RNAi)方式 下调某基因的表达。本专利技术拟采用慢病毒介导的RNAi技术研究ILK基因在与EGFR基因协 同抑制肿瘤细胞增殖中的功能，为恶性肿瘤的非手术临床治疗提供理论依据。
技术实现思路
本专利技术的目的在于公开了 ILK基因作为癌症治疗的靶标，治疗肿瘤的用途及其相 关药物；以及将ILK基因和EGFR基因共同作为癌症治疗的靶标，通过同时沉默ILK基因和 EGFR基因的表达，实现协同治疗肿瘤的用途，及其肿瘤治疗药物。 本专利技术以RNA干扰为手段，研究了单独的ILK基因在肿瘤发生和发展中的作用，以 及，ILK基因与EGFR基因在肿瘤发生和发展中的协同作用，公开了一种抑制或降低肿瘤细 胞生长、增殖、分化和/或存活的方法，该方法包括：向肿瘤细胞施用一种能够特异性抑制 ILK基因和/或EGFR基因的转录、翻译，或能够特异性抑制ILK蛋白和/或EGFR蛋白表达 的活性的物质，以此来抑制肿瘤细胞的生长、增殖、分化或存活。 本专利技术第一方面，公开了分离的人ILK基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在 制备肿瘤诊断药物中的用途。 本专利技术中，所述人ILK基因作为针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备或筛选肿瘤 治疗药物，或者制备肿瘤诊断药物。进一步的，所述针对肿瘤细胞的作用祀标为RNA干扰作 用靶标。 所述将分离的人ILK基因用于制备或筛选肿瘤治疗药物包括两方面的内容：其 一，将人ILK基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗药物；其 二，将人ILK基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗药物。 所述将ILK基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于制备肿瘤治疗 药物具体是指：将ILK基因作为RNA干扰作用的靶标，来研制针对肿瘤细胞的药物或制剂， 从而提高或降低肿瘤细胞内ILK基因的表达水平。 所述将ILK基因作为药物或制剂针对肿瘤细胞的作用靶标应用于筛选肿瘤治疗 药物具体是指：将ILK基因作为作用对象，对药物或制剂进行筛选，以找到可以抑制或促进 人ILK基因表达的药物作为肿瘤治疗备选药物。如本专利技术所述的ILK基因小分子干扰RNA (SiRNA)即是以人ILK基因为作用对象筛选获得的，可用作具有抑制肿瘤细胞增殖作用的 药物。除此之外，诸如抗体药物，小分子药物等也可将ILK基因及其蛋白作为作用对象。 所述将ILK基因用于制备肿瘤诊断药物，是指将ILK基因表达产物作为一项肿瘤 诊断指标应用于肿瘤诊断药物的制备。 所述肿瘤治疗药物为能够特异性抑制ILK基因的转录或翻译，或能够特异性抑制 ILK蛋白的表达或活性的分子，从而降低肿瘤细胞中ILK基因的表达水平，达到抑制肿瘤细 胞的增殖、生长、分化和/或存活的目的。 所述的肿瘤可以为其肿瘤细胞的增殖与人ILK基因的表达相关的任意一种肿瘤； 更进一步的，为一种恶性肿瘤，例如选自：肺癌或结肠癌。 本专利技术第一方面，还公开了分离的人ILK基因和人EGFR基因在制备或筛选肿瘤治 疗药物，或者在制备肿瘤诊断药物中的用途。 本专利技术中，所述人ILK基因和人EGFR基因作为针对肿瘤细胞的作本文档来自技高网...

【技术保护点】
分离的人ILK基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在制备肿瘤诊断药物中的用途。

【技术特征摘要】
1. 分离的人ILK基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在制备肿瘤诊断药物中的用 途。2. 如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述人ILK基因作为针对肿瘤细胞的作用靶 标应用于制备或筛选肿瘤治疗药物，或者制备肿瘤诊断药物。3. 如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述针对肿瘤细胞的作用靶标为RNA干扰作 用靶标。4. 分离的人ILK基因和人EGFR基因在制备或筛选肿瘤治疗药物，或者在制备肿瘤诊断 药物中的用途。5. -种降低肿瘤细胞中ILK基因表达的分离的核酸分子，所述核酸分子包含： a) ILK基因双链RNA，所述ILK基因双链RNA中含有能够在严紧条件下与ILK基因杂交 的核苷酸序列；或者 b) ILK基因 shRNA，所述ILK基因 shRNA中含有能够在严紧条件下与ILK基因杂交的核 苷酸序列。6. 如权利要求5所述的分离的核酸分子，其特征在于，所述ILK基因双链RNA包含第一 链和第二链，所述第一链和所述第二链互补共同形成RNA二聚体，并且所述第一链的序列 与ILK基因的靶序列基本相同；所述ILK基因 shRNA包括正义链片段和反义链片段，以及连 接所述正义链片段和反义链片段的茎环结构，所述正义链片段和所述反义链片段的序列互 补，并且所述正义链片段的序列与ILK基因的靶序列基本相同。7. 如权利要求6所述的分离的核酸分子，其特征在于，所述ILK基因的靶序列为SEQ ID NO: 1所示序列。8. 如权利要求5-7任一权利要求所述的分离的核酸分子，其特征在于，所述双链RNA 为小干扰RNA，并且ILK基因小干扰RNA第一链的序列如SEQ ID NO :9所示；所述ILK基因 shRNA的序列如SEQ ID NO: 11所示。9. 一种ILK基因干扰核酸构建体，含有编码权利要求5-8...

【专利技术属性】
技术研发人员：朱向莹，孙琴，杨敏，沈浩，金杨晟，瞿红花，曹跃琼，
申请(专利权)人：上海金鉴生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31