本发明专利技术涉及一种LAK细胞保存液及其制备和保存LAK细胞的方法，所述LAK细胞保存液包含人血清白蛋白、肝素钠、灵芝多糖和保存基础液，所述保存基础液为复方电解质溶液。使用上述任一项所述的LAK细胞保存液将LAK细胞制成细胞制剂，在常温以下温度即可保存LAK细胞。本发明专利技术LAK细胞保存液可以有效维持LAK细胞的活力；使用本发明专利技术LAK细胞保存液保存LAK细胞，在常温下保存12小时或在4℃条件下保存72小时后，细胞活力维持在90％以上；当细胞活力维持在90％以上时，LAK细胞的杀伤活性和表面标志物的表达情况均没有显著变化。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及细胞培养领域，尤其涉及一种LAK细胞保存液及其制备和保存LAK细 胞的方法。
技术介绍
伴随着老龄化加剧、生态环境遭受破坏、不健康生活方式及食品安全问题凸现，我 国肿瘤发病率多年持续上升，已成为一个必须高度重视的公共卫生问题乃至社会问题。据 世界癌症报告估计，2012年中国癌症发病人数为306. 5万，约占全球发病的五分之一；癌症 死亡人数为220. 5万，约占全球癌症死亡人数的四分之一。当前我国癌症发病率、死亡率 呈持续增长趋势，我国癌症发病率接近世界水平，但死亡率高于世界水平。更为严峻的是， 这种势头并未得到有效的遏制。今后20年，我国癌症的发病数和死亡数还将持续上升：根 据国际癌症研究署预测，如不采取有效措施，我国癌症发病数和死亡数到2020年将上升至 400万人和300万人；2030年将上升至500万人和350万人。长期以来，肿瘤的治疗一般都采用手术、化疗和放疗三种治疗模式。随着生物科学 的发展，生物治疗成为肿瘤治疗的第四种治疗模式。生物治疗是指利用人体自身的免疫系 统来杀死清除肿瘤细胞的治疗方法。这种方法安全有效，只杀肿瘤细胞，不伤害正常组织， 副作用非常小。生物治疗还能缓解放疗和化疗的副作用，增强患者对其他治疗的敏感性和 耐受性。LAK细胞治疗是一种有效的抗肿瘤生物治疗方法，是将体外激活和扩增的LAK细 胞再过继输入给患者的治疗方法。LAK细胞（Lymphokine-activated killer)即淋巴因子 激活的杀伤细胞，是一种外周血淋巴细胞在体外经淋巴因子白介素-2 (IL-2)激活3~5天 而扩增为具有广谱抗瘤作用的杀伤细胞。研究表明LAK细胞与IL-2合用（IL-2/LAK系统 过继免疫疗法）比单用IL-2效果好，因为经IL-2激活的LAK细胞在输入人体后仍需IL-2 才能维持其杀伤活性。IL-2/LAK系统过继免疫疗法被评价为20世纪80年代十大重大科 学成就之一，其对转移性肾细胞癌、黑色素癌、结肠癌和非何杰金氏淋巴瘤患者疗效特别显 著，也能使其他类型肿瘤的肺、肝、骨骼、皮肤等处的转移性病灶消退，并使循环中的瘤细胞 消失。 目前国内外对LAK细胞疗法的研究大多只专注于研究LAK细胞的培养方法、培养 体系以及LAK细胞的增殖能力、杀伤活性，对临床治疗级的LAK细胞制剂的保存方法鲜有研 究和报道。在现有技术中，LAK细胞的保存液均是含有人血清白蛋白的生理盐水，如在生理 盐水中添加1 %的人血清白蛋白，这种保存液保存的LAK细胞制剂在常温下超过2小时或是 在4°C的条件下超过24小时细胞的活力就会下降，不适用于LAK细胞的长途运输或保存。
技术实现思路
有鉴于此，有必要针对LAK细胞在现有保存液中细胞活性下降的问题，提供一种 新的LAK细胞保存液及其制备和保存LAK细胞的方法。本专利技术提供一种LAK细胞保存液，包含人血清白蛋白、肝素钠、灵芝多糖和保存基 础液，所述保存基础液为复方电解质溶液。 优选地，LAK细胞保存液，由下述质量体积百分数的下述组分组成： 人血清白蛋白1-5%，肝素钠1-10%， 灵芝多糖1-5%， 复方电解质溶液余量。 优选地，所述LAK细胞保存液由下述质量体积百分数的下述组分组成： 人血清白蛋白1-2%， 肝素钠溶液3-8%， 灵芝多糖2-3%， 复方电解质溶液余量。 优选地，所述LAK细胞保存液由下述质量体积百分数的下述组分组成： 人血清白蛋白1%， 肝素钠溶液5%， 灵芝多糖2%， 复方电解质溶液余量。 优选地，所述复方电解质溶液包含氯化钠、葡萄糖酸钠、醋酸钠、氯化钾和氯化镁。 更优选地，所述复方电解质溶液由下述质量体积百分数的下述组分组成：氯化钠5. 26%、 葡萄糖酸钠5. 02 %、醋酸钠3. 68 %、氯化钾0. 37 %、氯化镁0. 30 %，水余量。 本专利技术还提供上述LAK细胞保存液的制备方法，用少量复方电解质溶液溶解肝素 钠和灵芝多糖，再向其中加入人血清白蛋白，补足复方电解质溶液后混匀即得本专利技术LAK 细胞保存液。 本专利技术还提供一种LAK细胞的保存方法，使用上述任一项所述的LAK细胞保存液 将LAK细胞制成细胞制剂，在常温以下温度保存。 优选地，所述细胞制剂中LAK细胞浓度为1X107/mL。 优选地，保存条件为常温保存12小时以内。 优选地，保存条件为4°C保存72小时以内。 与现有技术相比，本专利技术具有如下有益效果： 本专利技术LAK细胞保存液组分少，在复方电解质溶液中加入人血清白蛋白、肝素钠 以及灵芝多糖，可以直接回输，各组分及其含量稳定，成本低廉，保存液安全、无任何毒副作 用； 本专利技术LAK细胞保存液可以有效维持LAK细胞的活力；使用本专利技术LAK细胞保存 液保存LAK细胞，在常温下保存12小时后细胞活力维持在90%以上，或在4°C条件下保存 72小时后，细胞活力也维持在90%左右； 本专利技术LAK细胞保存液不影响LAK细胞的杀伤活性和表面标志物的表达；本专利技术 LAK细胞保存液中细胞活力维持在90%以上时，LAK细胞的杀伤活性没有显著变化，表面标 志物的表达最优；本专利技术LAK细胞保存液制备简单，能在短时间内大量配制，可规模化生产，使用本 专利技术LAK细胞保存液保存LAK细胞的方法也简单，在常温以下温度就能保存交长时间，便于 推广应用。【附图说明】 图1是实施例5中PBMC培养14天后得到的LAK细胞形态图，放大倍数400倍。 图2为效果实施例3中流式检测图。【具体实施方式】 为了更好的说明本专利技术，下面结合附图和【具体实施方式】做进一步说明。本专利技术LAK 细胞保存液中所用试剂或仪器均可由市场购得，使用的检测方法第都是本领域所熟知的， 在此不再赘述。 在本专利技术中使用的主要仪器分别购自以下公司：细胞培养箱购自德国MEMMERT公 司，倒置显微镜购自福建M0TIC公司，流式细胞仪购自美国BD公司，酶标仪购自美国梅里埃 公司。 在本专利技术中使用的主要试剂分别购自以下公司：人血清白蛋白注射液购自奥地利 百特国际有限公司，其中人血清白蛋白的质量体积百分数为20%。肝素钠（粉末）购自广 州中山医医药有限公司。灵芝多糖（冻干粉）购自广州中山医医药有限公司。复方电解质 注射液购自广州中山医医药有限公司；每升复方电解质溶液含有氯化钠5. 26g、葡萄糖酸 钠5. 02g、醋酸钠3. 68g、氯化钾0? 37g、氯化镁0? 30g。 本专利技术中人血清白蛋白可以防止细胞聚集成团；肝素钠具有抗凝血作用，可以防 止血液凝固；灵芝多糖可提高机体免疫力，在癌症病人经放疗、化疗机体免疫力受损的情况 下，将其与放疗、化疗配合使用可达到治愈疾病的目的。 复方电解质溶液与血液成分相容，因此使用本专利技术LAK细胞保存液保存的LAK细 胞直接进行回输，不需要再培养或进行其他处理，简化了使用过程，节省时间。 实施例1、LAK细朐保存液及其制备方法 用少量复方电解质溶液将8g肝素钠粉末和2. 5g灵芝多糖冻干粉溶解，再向其中 加入5mL质量百分数20%的人血清白蛋白注射液，补加复方电解质溶液至100mL混匀即得 本专利技术LAK细胞保存液。在本实施例中各组分质量体积百分数为：人血清白蛋白1%，肝素 钠8 %，灵芝多糖2. 5 %，余量为复方电解质溶液。 实施例2、LAK细本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种LAK细胞保存液，其特征在于，包含人血清白蛋白、肝素钠、灵芝多糖和保存基础液，所述保存基础液为复方电解质溶液。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：葛啸虎，陈海佳，王一飞，罗二梅，张维敏，
申请(专利权)人：广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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