本发明专利技术涉及一种利用嗜松青霉转化甜菊糖制备杜尔可苷A的方法是将嗜松青霉接种到固体或液体培养基中进行发酵产酶，用菌或酶液转化莱鲍迪苷C或含有莱鲍迪苷C的混合甜菊糖苷，得到杜尔可苷A。本发明专利技术利用嗜松青霉将莱鲍迪苷C高效转化为杜尔可苷A，为稀有糖苷杜尔可苷A的制备提供了新的方法与途径。所用嗜松青霉液体发酵或固体发酵工艺成熟、其酶为胞外酶，酶使用方便，提取成本低。本发明专利技术不仅使RC得到充分利用，适宜条件下的转化率可接近100％，同时得到价值更高的稀有糖苷杜尔可苷A。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种制备杜尔可苷A(DA)的新方法，特别是用嗜松青霉发酵产生的菌 或酶转化RC为DA的方法。属于天然产物的生物转化领域。
技术介绍
甜菊糖苷是从甜菊叶中提取的高倍天然甜味剂，因其安全、低热等特点，被誉为 "最佳天然甜味剂"、"第三糖源"。中国是目前世界上最大的甜菊糖生产国和出口国。甜 菊糖苷不仅广泛应用于食品行业，在医药行业也倍受青睐。甜菊糖苷的生物活性广泛，主 要有降血压、调节血糖、抗菌抗炎等活性（朱焕铃，刘景彬，谢印芝.甜菊糖苷的性质 及在食品中的应用 ?食品研究与开发，2011，11:189-192 ;Sidd Purkayastha, George Pugh Jr. , Barry Lynch, Ashley Roberts, David Kwok d,Stanley M. Tarka Jr. In vitro metabolism of rebaudioside B，D，and Munder anaerobic conditions:Comparison with rebaudioside A. Regulatory Toxicology and Pharmacology，2014, 68:259 - 268.) 〇 甜菊糖苷的通用结构式为： 表1甜菊糖苷主要成分与结构[C 表2甜菊叶中不同糖苷的含量、甜度比较 从甜叶菊中提取得到甜菊糖含多种成分：甜菊苷、莱鲍迪苷（Rebaudi〇side)A、B、 C、D、E、F、甜茶苷及杜尔可苷A(Dulc〇Side A，简称DA)。由表1中各甜菊糖苷的结构可 见，莱鲍迪苷C的C13位的0-1，2糖苷键选择性水解断裂可以产生杜尔可苷A。而从表 2(陈秋实.甜菊苷的研究概况.中国药师，2007, 10(6) :598-599 ;杨远志，庞明利， 杨海军.天然甜味剂甜菊糖中国市场应用处于导入期.中国食品报，2009-11-24)中 数据可见：甜叶菊中甜菊苷占总苷量的46-48%，莱鲍迪苷A占总苷量的20-30%，莱鲍迪 苷C占总苷量的4-7%。杜尔可苷A、甜茶苷，莱鲍迪苷B、D、E在甜叶菊中含量稀少，难以 直接从甜叶菊中获得大量的这些成分。这些稀有糖苷由于原料中含量少、提取成本高等方 面的限制，是量少而价高的产品。研究表明甜茶苷、甜菊双糖苷等是备受关注的有着潜在 药用价值的品种（陈育如，姜中玉，刘虎.一种由甜菊糖苷制备甜茶苷的方法:中 国，ZL200910035921. 0. 2010-5-5 ;陈育如，刘虎，姜中玉等?一种生物转化甜菊糖中甜菊 苷为甜菊双糖苷的方法:中国，CN201010170786. 3. 2010-10-13)。 甜菊糖的苷元甜菊醇分子具有对映贝壳杉烯型四环二萜骨架结构，具有独特的 生理活性（Li J，Zhang D Y, ffu X M. Synthesis and biological evaluation of novel exomethylene cyclopentanone tetracyclic diterpenoids as antitumor agents. Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters, 2011,21 (1) :130_132;汪吴林，石浩.异斯特 维醇衍生物的应用研究进展.浙江化工，2014, 10:7-11)。杜尔可苷A水解掉去除鼠李 糖基后，其产物是甜茶苷。甜茶苷具有降脂、降血糖、止咳、镇静、抗过敏、抗疲劳、增强免疫 力等功能（谢莹，陈全斌，罗达伟等.高纯度甜茶苷抗疲劳及免疫调节功能研究.时 珍国医国药，2010, 21 (6) : 1421-1422)。作为稀有甜菊糖苷类，因受原料供应的限制，目前 杜尔可苷 A 的研究极少（Masaru Kobayashi，Shuji Horikawa，Isolde H.Degrandi，Junko Ueno, Hiroshi Mitsuhashi. Dulcosides A and B, new diterpene glycosides from Stevia rebaudiana. Phytochemistry, 1977, 16(9):1045-1048) 〇 本课题组在甜菊糖的分离纯化和生物转化方面进行了系列研究（陈育 如，玄燕，赵乙萱等.巴氏微杆菌XJ及应用该菌制备甜菊醇的方法:中 国，ZL201110159563. 1.2011-10-19;陈育如，姜中玉，玄燕，张玉千，夏文静?黄杆菌 胞内酶提取和快速转化甜菊糖为甜茶苷的方法:中国，ZL201010569609. 2. 2011-5-18 ; 陈育如，刘虎，姜中玉等.一种生物转化甜菊糖中甜菊苷为甜菊双糖苷的方法:中 国，CN201010170786. 3. 2010-10-13;陈育如，姜中玉，刘虎?一种由甜菊糖苷制备甜茶 苷的方法:中国，ZL200910035921. 0. 2010-5-5)，本专利技术是在前期工作基础上的深入研 究。 嗜松青霉应用广泛，本专利技术用的典型菌株（CGMCC No. 63664)筛选方法见文 献（孙欢，纤维素热解产物及甜叶菊的微生物转化研究，南京师范大学硕士论文， 2014)，嗜松青霉可用于转化内醚糖（陈育如，孙欢，赵乙萱，刘军利，卫民.一株嗜 松青霉及其应用:中国，ZL201210467779. 9.2013-2-13.)，、产木聚糖酶（Hongying Cai,Pengjun Shi, Yingguo Bai, Huoqing Huang, Tiezheng Yuan, Pei long Yang, Huiying Luo,Kun Meng,Bin Yao. A novel thermoacidophi1ic family lOxylanase from Penici11ium pinophilum Cl .Process Biochemistry:2011, 46, 2341 - 2346.), 产 0 _ 甘露糖苷酉每(Hongying Cai, Pengjun Shi, Huiying Luo, Yingguo Bai, Huoqing Huang,Pei long Yang,Bin Yao.Acidic 0 -mannanase from Penicillium pinophilum Cl:Cloning, characterization and assessment of its potential for animal feed application. Journal of Bioscience and Bioengineering:2011, 112(6), 551 - 557.) 及产 0-1,4 葡萄糖苷酶（Ah-Reum Joo,Marimuthu Jeya，Kyoung_Mi Lee，Kyoung_Min Lee, Hee-Jung Moon, Yeong-Suk Kim, Jung-Kul Lee. Production and characterization of 0-1,4-glucosidase from a strain of Penicillium本文档来自技高网...
【技术保护点】
嗜松青霉(Penicillium pinophilum)在制备杜尔可苷A中的应用。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈育如，杨凤平，赵文文，曹亚丽，殷承启，
申请(专利权)人：南京师范大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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