一种甜菊素质量检测方法技术

本发明专利技术涉及一种药品的检测方法，具体讲，涉及一种甜菊素质量检测方法，所述的检测方法包括供试品溶液制备、对照品溶液制备、色谱条件的确定和测定方法，本发明专利技术的甜菊素的质量检测方法主要是对色谱条件的改进，使用两个不同的色谱串联对样品进行测定，并且可以确定甜菊糖苷的种类，建立了一种有效的甜菊素的含量测定方法，选择系统性适用性、回收率、精密度、重复性、定量限、线形、耐用性等项目，进行验证，符合标准。

【技术实现步骤摘要】
一种甜菊素质量检测方法
本专利技术涉及一种药品的检测方法，具体讲，涉及一种甜菊素质量检测方法。
技术介绍
甜叶菊为菊科植物甜叶菊的干燥叶，原产地在南美洲巴拉圭东北部与巴西接壤的阿曼拜山脉中，后来被引入中国。甜叶菊化学成分多种多样，其中甜味成分是各种糖苷，其含量占10％以上，这些糖苷中，含量高，且有经济价值的糖苷体有甜菊苷(stevioside)、瑞鲍迪苷A(rebaudiosideA)、瑞鲍迪苷C(rebaudiosideC)、杜克苷A(dulcosideA)等，甜菊素(又名甜菊糖苷，甜菊糖)为上述各种甜味苷的总称，是以(C38H60O18)为主的混合苷，甜菊素的甜度是蔗糖的200-300倍，其热量却只有蔗糖的1/300，经大量药物实验证明，甜菊素无毒副作用，无致癌物，安全性高。甜菊素是天然高甜、低热的保健型甜味剂，可用于医药品的呈味改良剂和矫味剂，也可作为医药辅助治疗剂，是继蔗糖、甜菜糖之外第三种有开发价值和健康推崇的天然蔗糖替代品，被称为第三大天然糖源。目前甜菊素的相关质量检测方法有三种：(1)根据中国药典2010年二部，系指以甜菊素为主的混合苷，甜菊素按干燥品计，含甜菊素(C38H60O18)不得少于95.0％，含量测定采用滴定法，计算的滴定度为40.24，是由甜菊素(分子量为804.88)的反应方程式计算所得；由于目前市场上的甜菊素基本上是混合苷，混合苷中其他甜菊糖苷的分子量比甜菊素有大有小，比如：瑞鲍迪苷A分子量为967.02，瑞鲍迪苷C分子量为951.02，瑞鲍迪苷D分子量为1129.15，甜叶悬钩子苷分子量为642.73，甜菊双糖苷分子量为642.73，所以采用滴定法计算甜菊素中甜菊苷的含量并不十分准确。(2)甜菊糖苷，收载于国标GB8270-2014，系指以甜叶菊干叶为原料，经提取、精制而得的甜菊糖苷，主要糖苷为甜菊糖苷和瑞鲍迪苷A，其他已知糖苷为瑞鲍迪苷B、C、D、F，杜克苷A，甜茶苷，甜菊双糖苷。含量不得少于85.0％。含量测定有两种方法，均为液相色谱法，大同小异，只对照品和计算方式不一样。(3)甜菊糖苷，收载于FAOJECFA-2010(联合国粮食及农业组织-联合食品添加剂专家委员会)，系指以甜叶菊干叶为原料，经提取、精制而得的甜菊糖混合苷；按干燥品计，甜菊糖苷的质量主要是甜菊糖中的9种成分，这9种成分包括甜菊苷，瑞鲍迪苷A、B、C、D、F，杜克苷A，甜叶悬钩子苷，甜菊双糖苷，这9种甜菊糖苷的总量不得少于95.0％。国标GB8270-2014和FAOJECFA-2010含量测定均采用液相色谱法，色谱条件基本相同，采用C18(十八烷基硅烷键合硅胶，以下简称C18)色谱柱，以甜菊素1种对照品溶液，测定9种甜菊糖苷的含量，或者配制9种甜菊糖苷对照品溶液，测定9种甜菊糖苷的含量。申请号为201410288581.3的中国专利技术专利公开了一种评价甜菊糖品质的方法，所述的评价甜菊糖品质的方法包括采用色谱分析方法测定甜菊糖中9种主要糖苷的百分含量，色谱条件为：色谱柱：C18柱(250×4.6mm，5μm)；流动相：乙腈-10mmol/L磷酸钠(32:68)，pH2.6；流速为1ml/min；检测波长为210nm；柱温为40℃，此种方法检测的待测成分与相邻共存物之间的分离度达不到要求，并且由于色谱柱的不同，9种甜菊糖苷的保留时间并不相同，仅仅凭一种色谱图所得的标准色谱峰，并不能准确定位除甜菊素外的其他8种甜菊糖苷。鉴于以上原因，本专利技术人经过研究，建立了一种有效的甜菊素的含量测定方法，选择系统性适用性、回收率、精密度、重复性、定量限、线形、耐用性等项目，进行验证，均符合中国药典2015年版质量标准分析方法验证指导原则的要求。
技术实现思路
本专利技术的目的是在于克服上述缺陷，提供了一种新的甜菊素质量检测方法，选用两根色谱柱串联使用，达到了规定的分离度要求，并且还根据国家药典委员会中药色谱指纹图谱应用服务系统发布的中药指纹图谱软件，制定了甜菊素电子标准图谱，从而确定了6种甜菊糖苷。为了实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种甜菊素质量检测方法，所述的质量检测方法包括如下步骤：(1)供试品溶液制备：精密称取甜菊素，加入溶液使其均匀溶解，并稀释配成1mg/1ml供试品溶液；(2)对照品溶液制备：精密称取甜菊苷对照品，加入溶液使其溶解，制备成1mg/1ml的对照品溶液；(3)色谱条件：两根填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱串联，流动相为乙腈-10mmol/L磷酸二氢钠溶液，流动速率为1.0ml/min，柱温为40℃，检测波长为210nm，理论塔板数按甜菊苷峰计算不低于15000；(4)测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，得到对照品指纹图谱和供试品指纹图谱。进一步的，步骤(1)和步骤(2)中，所述的溶液为乙腈和水以体积比为3:7配成的混合溶液。进一步的，步骤(3)中所述的两根色谱柱为不同品牌。现有技术中采用一般的色谱柱进行分离，分离度达不到中国药典2015版规定要求，待测成分与相邻共存物之间的分离度大于1.5，因此本专利技术中采用两个不同的色谱柱串联而成，进行测定，另一方面由于色谱柱的不同，不同种甜菊糖苷的保留时间并不相同，仅仅凭一种色谱峰柱所得的标准色谱图，并不能准确定位除甜菊素外的其他几种甜菊糖苷，因此采用不同的色谱柱串联。进一步的步骤(3)中所述的流动相乙腈-10mmol/L磷酸二氢钠溶液的体积比为32:68、34:66、38:72，优选为34:66。进一步的，所述的质量检测方法还包括甜菊糖苷种类的确定：采用中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件对所述的供试品指纹图谱与所述的对照品指纹图谱进行分析，相似度≥0.90为合格产品。进一步的，所述的供试品指纹图谱与所述的对照品指纹图谱进行分析包括如下步骤：(1)复原标准图谱：按照甜菊糖苷的标准图谱的色谱条件进行供试品的测定，得到一致的标准色谱图；(2)供试品色谱图：按照权利要求1中所述的色谱条件进行测定，测定供试品，分别精密吸取供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，得到供试品色谱图；(3)对照色谱图：按中药色谱指纹图谱相似度评价系统，根据供试品溶液的色谱图生成对照色谱图；(4)校正因子：甜菊苷的校正因子为1.00，除甜菊苷以外的其他甜菊糖苷的分子量与所述的甜菊苷的分子量的比值为校正因子；(5)样品测定：根据权利要求1所述的检测方法测定样品，将样品色谱图与对照色谱图进行分析对比。进一步的，步骤(1)中甜菊糖苷的标准图谱为FAOJECFA-2010，所述的色谱条件为色谱柱为CapcellpakC18MGⅡ4.6×250mm×5μm，流动相为乙腈-10mmol磷酸二氢钾溶液体积比32:68，pH为2.6，流动速率为1.0ml/min，精密吸取供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。本专利技术中由于9种甜菊糖苷的对照品较难购买，为了节约成本和检验方便，采用校正因子法测定供试品中甜菊糖苷的含量，由于9种甜菊糖苷的母核完全相同，而且其最大吸收波长都确定为210nm，结合FAOJECFA-2010甜菊素标准，将甜菊素的校正因子定为1.00，以其余甜菊糖苷的分子量和甜菊苷分子量的比值，作为校正因子，因此各甜菊糖苷的校正因子为：甜菊糖1.0本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种甜菊素质量检测方法，其特征在于，所述的质量检测方法包括如下步骤：(1)供试品溶液制备：精密称取甜菊素，加入溶液使其均匀溶解，并稀释配成1mg/1ml供试品溶液；(2)对照品溶液制备：精密称取甜菊苷对照品，加入溶液使其溶解，制备成1mg/1ml的对照品溶液；(3)色谱条件：两根填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱串联，流动相为乙腈‑10mmol/L磷酸二氢钠溶液，流动速率为1.0ml/min，柱温为40℃，检测波长为210nm，理论塔板数按甜菊苷峰计算应不低于15000；(4)测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，得到对照品指纹图谱和供试品指纹图谱。

【技术特征摘要】
1.一种甜菊素质量检测方法，其特征在于，所述的质量检测方法包括如下步骤：(1)供试品溶液制备：精密称取甜菊素，加入溶液使其均匀溶解，并稀释配成1mg/1ml供试品溶液；(2)对照品溶液制备：精密称取甜菊苷对照品，加入溶液使其溶解，制备成1mg/1ml的对照品溶液；(3)色谱条件：两根填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶的色谱柱串联，流动相为乙腈-10mmol/L磷酸二氢钠溶液，流动速率为1.0ml/min，柱温为40℃，检测波长为210nm，理论塔板数按甜菊苷峰计算应不低于15000；(4)测定方法：分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，按照高效液相色谱法测定，得到对照品指纹图谱和供试品指纹图谱。2.根据权利要求1所述的甜菊素质量检测方法，其特征在于，步骤(1)和步骤(2)中，所述的溶液为乙腈和水以体积比为3:7配成的混合溶液。3.根据权利要求1所述的甜菊素质量检测方法，其特征在于，步骤(3)中所述的两根色谱柱为不同品牌。4.根据权利要求1所述的甜菊素质量检测方法，其特征在于，步骤(3)中所述的流动相乙腈-10mmol/L磷酸二氢钠溶液的体积比为32:68、34:66、38:72，优选为34:66。5.根据权利要求1-4任意一项所述的甜菊素质量检测方法，其特征在于，所述的质量检测方法还包括甜菊糖苷...

【专利技术属性】
技术研发人员：邹节明，雷肖琳，
申请(专利权)人：桂林三金药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广西,45