本发明专利技术公开了一株巨大芽孢杆菌及其应用。该菌株为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)STY006，保藏编号为CGMCC No.11053。本发明专利技术还公开了一种包括所述的巨大芽孢杆菌菌株STY006的生物防治制剂及其制备方法。实验表明，本发明专利技术的巨大芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产孢量大、作用谱广、抗逆性强，在植物根际能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。由该巨大芽孢杆菌菌株制备的生物防治制剂，可以作为生物农药或生物肥料，防治多种土传植物细菌性病害，包括棉花枯萎病、大白菜软腐病、生姜姜瘟病、核桃细菌性褐斑病等。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物防治植物病害领域。具体而言，本专利技术涉及一株能够高效防治植 物病害的芽孢杆菌及其用途，以及采用该芽孢杆菌制备的生物防治制剂。
技术介绍
植物病害严重影响农林作物生长，甚至引起作物死亡，造成重大的经济损失。对于 植物病害的防治，常规采用的方法包括传统的化学防治、培育抗病品种以及生物防治。抗病 品种周期长，抗性单一。化学防治使用药剂时间长、使用量大，造成农药残留，环境污染；同 时，化学农药的长期使用，使得病原菌对其产生抗药性，导致防效下降甚至失败。利用有益 微生物防治植物病害具有广阔的前景。 芽孢杆菌是一种广泛分布于各种不同生活环境中的腐生细菌，是一群好氧兼厌氧 的产芽孢革兰氏阳性杆菌的总称，可以产生内生耐热抗逆的芽孢。芽孢不仅对热有抗逆性， 还对紫外线、电磁辐射及一些化学药品有很强的抗逆性，它可以忍受各种不良环境。由于具 有如此强的抗逆性，使得它有利于生防菌剂的生产和剂型加工，也利于其在环境中的存活、 定殖与繁殖。由于它们生长快、营养简单、能够形成具有较强抗逆性能力的芽孢，在产品开 发中较非芽孢杆菌有效活菌数量高、性能稳定等优势而备受瞩目。芽孢杆菌是植物病害生 防微生物的重要组成部分，可用于防治多种植物病害。芽孢杆菌作为生防菌防治植物病害 的机制主要有：抗生作用、营养竞争、空间竞争、重寄生作用以及诱导植物产生抗性等机制， 芽孢杆菌的生防机制主要是以产生拮抗物质抑制有害病菌的生长或杀死病原菌。这些物质 绝大多数为肽类抗生素，具有高效、低残留、与环境友好等优点。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种用于高效防治多种植物病害的新的细菌一一巨大芽孢 杆菌菌株STY006。本专利技术的菌株具有生长速度快、产孢量大、作用谱广、抗逆性强，在植物根 际能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。 本专利技术所提供的菌株为巨大芽孢杆菌（Bacillus megaterium) STY006,是从土壤 中分离获得的，已于2015年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中 心（简称CGMCC，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所），保 藏编号为CGMCC No. 11053。其具有以下生物学特性：在牛肉膏蛋白胨琼脂培养基或LB培 养基上菌落形态为圆形或不规则形，乳白偏黄色，表面粗糙起褶皱，在牛肉膏蛋白胨琼脂培 养基上，28°C下培养两天后，镜检，菌体细胞呈杆状，能运动。经革兰氏染色呈阳性（以大肠 杆菌为对照）。经芽孢染色后观察芽孢呈椭圆形或柱状。 本专利技术巨大芽孢杆菌（Bacillus magaterium)菌株STY006的培养方法或繁殖方 法包括： (1)普通培养保存采用LB培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g，氯化钠 l〇g，琼脂 15_20g，蒸馏水 lOOOmL，pH 调至 7. 0-7. 2 ; (2)实验室液体培养采用LB液体培养基，配方为：胰蛋白胨10g，酵母提取物5g， 氯化钠 l〇g，蒸馏水lOOOmL，pH调至7. 0-7. 2 ; (3)固体培养基配方：固料和无机盐溶液，按质量比I :1. 8的比例配制。其中所述 固料由质量比为65 :35的玉米粉和麸皮组成；按质量百分比计，所述无机盐溶液的组分及 含量为：3. 5%磷酸二氢钾，0. 04%硫酸镁，4%硫酸铵，剩余为水。 (4)大量发酵培养基配方：同（3)中固体培养基配方。 本专利技术还公开了一种包括所述的巨大芽孢杆菌菌株STY006的生物防治制剂。 本专利技术所述的生物防治制剂的制备方法包括以下步骤： (1)制备巨大芽孢杆菌菌株STY006的种子液； (2)将步骤（1)制备的种子液接种到固体培养基中，28_30°C下恒温培养3~5d ; (3)将步骤（2)培养的培养物加入无菌水混合，过滤，将滤液接种至大量发酵培养 基，在室温28-30°C、相对湿度85%以上的发酵室中进行发酵培养。 其中，步骤（2)中的固体培养基由固料和无机盐溶液组成，其中所述固料由质 量比为65 :35的玉米粉和麸皮组成；按质量百分比计，所述无机盐溶液的组分及含量为： 3. 5%磷酸二氢钾，0. 04%硫酸镁，4%硫酸铵，剩余为水。 并且，步骤（3)中的大量发酵培养基同固体培养基。 在本专利技术的一个具体实施方案中，所述制备方法包括以下步骤： (1)将巨大芽孢杆菌菌株STY006的孢子移植到LB液体培养基中，28-30 °C摇床振 荡培养3~5d得到种子液； (2)将步骤（1)制备的种子液按质量比10%的比例接种到固体培养基中，28_30°C 下振荡培养3~5d ; (3)将步骤⑵培养的培养物加入无菌水按质量比I :15的比例混合，过滤，将滤 液按体积比1 :6的比例接种至大量发酵培养基，室温28-30°C、相对湿度85%以上的发酵室 中发酵培养8~9d。 本专利技术还提供了上述巨大芽孢杆菌菌株STY006或者上述生物防治制剂在防治植 物土传病害中的用途；所述植物土传病害可以选自棉花枯萎病、大白菜软腐病、生姜姜瘟 病、核桃细菌性褐斑病等的一种或几种。 并且，本专利技术还提供了一种用于防治植物土传病害的生物防治方法，包括向具有 土传病害的植物施用上述巨大芽孢杆菌菌株STY006或者上述生物防治制剂。 实验表明，本专利技术的巨大芽孢杆菌菌株具有生长速度快、产孢量大、作用谱广、抗 逆性强，在植物根际能够快速大量定殖等特点，因此具有良好的应用前景。由该巨大芽孢杆 菌菌株制备的生物防治制剂，可以作为生物农药或生物肥料，防治多种土传植物细菌性病 害，包括棉花枯萎病、大白菜软腐病、生姜姜瘟病、核桃细菌性褐斑病等。【具体实施方式】 下面结合具体实施例来进一步描述本专利技术，本专利技术的优点和特点将会随着描述而 更为清楚。但这些实施例仅是示例性的，并不对本专利技术的范围构成任何限制。本领域技术 人员应该理解的是，在不偏离本专利技术的精神和范围下可以对本专利技术技术方案的细节和形式 进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本专利技术的保护范围内。 实施例1 1、巨大芽孢杆菌菌株STY006的分离与纯化 本专利技术的巨大芽孢杆菌菌株STY006是从土壤中采用稀释平板法和平板划线法分 离获得的，分离方法为： ⑴芽孢杆菌的分离：土样的采集，在全国不同地区选取种植不同作物类型的地块， 采用5点取样法，分别采集地块四周和中央深度在10-20cm范围内的土壤适量，等量混匀。 标明采集地点、时间和采集人。称取Ig 土样于IOOmL无菌水中，置于30°C摇床中150rpm震 荡lOmin，然后置于60°C水浴锅中孵育30min，取100 μ L 10 2、10 3、10 4稀释液涂布于LB培 养基平板上，每个梯度涂布三个平行，在30Γ培养2d后挑取LB培养基上的不同形态的微生 物菌落于LB培养基平板上进行划线，定时观察菌落生长情况。然后采用平板划线法，纯化 芽孢杆菌菌株，分别编号保存。 ⑵棉花枯萎病高效拮抗芽孢杆菌的筛选 ①初筛：采用对峙培养法，制备LB平板，用打孔器在芽孢杆菌、棉花枯萎病边缘打 取直径为5_的菌饼，分别移植在平板相对的两侧中央，25°C恒温培养，逐日观察芽孢杆菌 对病原菌的抑制作用。 ②复筛：将筛选到的具有高效拮抗活性的芽孢杆菌菌株进行复筛，主要是经过耐 温性、耐酸碱性本文档来自技高网...
【技术保护点】
巨大芽孢杆菌(Bacillus magaterium)菌株STY006，所述菌株的保藏编号为CGMCC No.11053。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：戴宝，牛赡光，刘幸红，王清海，卢德鹏，朱福庆，王栋梁，马瑞滨，孔雪华，李秀香，
申请(专利权)人：山东泰诺药业有限公司，
类型：发明
国别省市：山东;37
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