本发明专利技术提供了一种解淀粉芽孢杆菌，其保藏号为CCTCC M 2015299，命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)XK-2。并进一步提供了解淀粉芽孢杆菌XK-2的筛选方法和在抑制西瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌、核桃根腐病菌中的应用，以及一种解淀粉芽孢杆菌XK-2菌剂。解淀粉芽孢杆菌XK-2是一株西瓜内生菌株，对人、畜、农作物安全，对环境友好，具有较广的抑菌谱，对常见的土传病原菌，西瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌、核桃根腐病菌菌丝生长均具有较好的抑制效果。解淀粉芽孢杆菌XK-2菌剂对西瓜枯萎病具有显著的防治效果，对西瓜枯萎病菌菌丝生长有明显抑制作用，使菌丝生长缓慢，出现畸形症状，在植物病害的生物防治中具有广阔的应用前景。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于植物病害生物防治
，特别是涉及一种解淀粉芽孢杆菌及其应 用。
技术介绍
西瓜枯萎病是一种由尖孢镰刀菌西瓜专化型（Fusarium oxysporum f. sp niveum F0N)引起的维管束土传病害，是西瓜产业中最普遍、危害最严重的病害之一，一般发病率为 10 % -30 %，严重的达80 % -90 %，重茬地甚至造成绝产。病原菌从土壤根系侵入，引起维管 束变褐坏死，导致瓜秧枯死，其厚垣孢子在土壤中可存活10年之久，严重影响西瓜的种植。 目前，对该病害尚无有效的防治方法，传统的轮作虽在一定程度上能减轻病害发生，但随着 市场对西瓜需求量的增长，西瓜种植面积逐年扩大，轮作防病措施难以实施。化学防治虽然 具有一定的防治效果，但是病原菌对化学药剂的抗性逐年增强，药剂用量不断提高。化学药 剂的长期大量使用，造成自然生态环境日益严重的污染。研究表明，在植物体内存在大量的 益生菌，已在多种植物体内分离筛选到防病效果明显的内生细菌，有些内生细菌还具有促 生、固氮等生物功能，是植物病害防治的重要资源，尤其对化学药剂难以控制的土传病害、 维管束病害及系统性病害发挥其独特的优势。因此，寻找防治西瓜枯萎病的拮抗微生物具 有重要意义。 利用生防菌株防治植物病害在国内外均有报道，至今美国已有4种芽孢杆菌制备 的生防菌剂获得了生产许可证；经检索，申请者在现有的专利和非专利文献中检索到一些 关于解淀粉芽孢杆菌的文献报道和专利。例如，专利申请号为2013100328384公开了"一 种促生抑菌解淀粉芽孢杆菌、调理剂制备方法及应用"，报道多粘类解淀粉芽孢杆菌Pb-4对 番茄等作物有明显的促生和抑菌防病作用。专利申请号为201210342838X公开了"解淀粉 芽孢杆菌Bal68及其发酵培养方法和应用"，利用解淀粉芽孢杆菌Bal68制备菌剂，对尖孢 镰刀菌引起的白术根腐病、西洋参根腐病和三七根腐病等根腐病害具有很好的防治作用。 专利申请号为2014100362727公开了"解淀粉芽孢杆菌噻枯唑复配可湿性杀菌粉剂及其应 用"，利用解淀粉芽孢杆菌和噻枯唑复配可湿性杀菌粉剂，用于防治水稻细菌性条斑病和水 稻白叶枯病。但目前并没有对西瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌、核桃根腐病菌等重要植物病原 菌有拮抗作用的解淀粉芽孢杆菌的报道。
技术实现思路
为改进现有防治技术的不足，本专利技术的目的在于提供一种解淀粉芽孢杆菌及其应 用，该解淀粉芽孢杆菌对西瓜枯萎病菌、水稻纹枯病菌、核桃根腐病菌等多种病原菌具有显 著的拮抗作用。 本专利技术第一方面提供了一种解淀粉芽孢杆菌，其于2015年5月15日保藏于武 汉大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2015299,命名为解淀粉芽孢杆菌 (Bacillus amyloliquefaciens)XK_2〇 解淀粉芽孢杆菌XK-2的菌学特性： a、形态特征：ΧΚ-2为革兰氏阳性菌，呈杆状，芽孢椭圆，在LB平板上形成的菌落成 圆形，边齐，稍隆起，湿润，有光泽，乳白色，半透明。 b、生理生化特征：水解淀粉，周生鞭毛，氧化酶阴性，接触酶阳性。 解淀粉芽孢杆菌XK-2的16S rDNA序列如序列表SEQ ID No. 1所示，与Genbank 上已报道序列进行比对，最终确定菌株Hi-2为解淀粉芽孢杆菌。 本专利技术第二方面提供了解淀粉芽孢杆菌)(Κ-2在抑制西瓜枯萎病菌、水稻纹枯病 菌、核桃根腐病菌中的应用。 本专利技术第三方面提供了解淀粉芽孢杆菌)(Κ-2的筛选方法，具体步骤包括： (1)从西瓜植株的根部中分离芽孢杆菌； (2)用平板对峙法从步骤（1)分离的芽孢杆菌中筛选出对西瓜枯萎病菌有抑菌作 用的菌株。 本专利技术第四方面提供了一种解淀粉芽孢杆菌}(Κ-2菌剂，所述菌剂为解淀粉芽孢 杆菌)(Κ-2经活化、种子培养、发酵后得到的菌剂。 本专利技术的有益效果是：（1)解淀粉芽孢杆菌ΧΚ-2是一株西瓜内生菌株，对人、畜、 农作物安全，对环境友好。 (2)本专利技术的解淀粉芽孢杆菌)(Κ-2具有较广的抑菌谱，对常见的土传病原菌，西 瓜枯萎病菌（Fusarium oxysporum)、水稻纹枯病菌（Rhizoctonia solani)、核桃根腐病菌 (Fusarium solani)等菌丝生长均具有较好的抑制效果，其中对西瓜枯萎病菌和水稻纹枯 病菌的抑菌率达80%以上。 (3)本专利技术的解淀粉芽孢杆菌)(K-2菌剂对西瓜枯萎病具有显著的防治效果，盆栽 防治效果达75. 8%，对西瓜枯萎病菌菌丝生长有明显抑制作用，使菌丝生长缓慢，出现末端 细小，扭曲，崩溃等畸形症状，且生产周期短，工艺简单，在植物病害的生物防治中具有十分 广阔的应用前景。【附图说明】 图1为解淀粉芽孢杆菌ΧΚ-2在LB固体培养基上生长的菌落形态； 图2为解淀粉芽孢杆菌)(Κ-2对西瓜枯萎病菌的拮抗作用示意图； 图3为解淀粉芽孢杆菌)(Κ-2对水稻纹枯病菌的拮抗作用示意图； 图4为解淀粉芽孢杆菌)(Κ-2对核桃根腐病菌的拮抗作用示意图； 图5为解淀粉芽孢杆菌ΧΚ-2对西瓜枯萎病菌菌丝生长的致畸作用示意图，其中， A为未经解淀粉芽孢杆菌ΧΚ-2处理的对照组，B为经解淀粉芽孢杆菌ΧΚ-2处理的实验组。【具体实施方式】 本专利技术第一方面提供了一种解淀粉芽孢杆菌，其于2015年5月15日保藏于武汉 大学中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC M 2015299,命名为解淀粉芽孢杆菌ΧΚ-2。 所述解淀粉芽孢杆菌ΧΚ-2的16S rDNA序列如SEQ ID No. 1所示。 本专利技术第二方面提供了解淀粉芽孢杆菌)(K-2在抑制西瓜枯萎病菌、水稻纹枯病 菌、核桃根腐病菌中的应用。 本专利技术第三方面提供了解淀粉芽孢杆菌)(K-2菌株的筛选方法，具体步骤包括： (1)从西瓜植株的根部中分离芽孢杆菌； (2)用平板对峙法从步骤（1)分离的芽孢杆菌中筛选出对西瓜枯萎病菌有抑菌作 用的菌株。 优选的，步骤（1)所述西瓜植株的根部经过酒精浸泡、升汞浸泡、无菌水漂洗后， 加入无菌水进行研磨，混合均匀制为悬浮液。所述分离芽孢杆菌是将悬浮液稀释后涂布于 LB平板，28-30°C下培养23-26h，挑取芽孢杆菌单菌落；步骤（2)所述筛选为将西瓜枯萎病 菌接种在PDA平板中心，将步骤（1)所得细菌呈三角状对称接入PDA平板，距离中心l-3cm， 28°C下培养，得到有抑菌作用菌株，转入LB平板上培养保存。 本专利技术第四方面提供了一种解淀粉芽孢杆菌)(K-2菌剂，所述菌剂为解淀粉芽孢 杆菌)(Κ-2经活化、种子培养、发酵后得到的菌剂。 优选的，所述活化为将解淀粉芽孢杆菌)(Κ-2菌株接种于培养基中，于28-30°C下 培养 20-24h。 更加优选的，所述培养基为LB固体培养基，其配置方法为酵母提取物5g，胰化蛋 白胨l〇g，氯化钠 l〇g，琼脂粉20g，用NaOH调pH至7. 0-7. 2,于121°C下高压灭菌20min。 优选的，所述种子培养为将经活化后的解淀粉芽孢杆菌)(K-2菌株接种于培养基 中，于 28-30°C、115-125r/min 下振荡培养 20-24h。 优选的，所述发酵为将经种子培养后的解淀粉芽孢杆菌)(K-2菌株以5%的接种比 例接种于培养基中，于本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种解淀粉芽孢杆菌，其特征在于：所述解淀粉芽孢杆菌的保藏编号为CCTCC M 2015299，命名为解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens)XK‑2。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：孙正祥，周燚，邓建新，
申请(专利权)人：长江大学，
类型：发明
国别省市：湖北;42
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。