本发明专利技术公开了一种靶向非编码RNA的反义寡核苷酸及其在制备抗流感病毒药物中的应用。本发明专利技术提供的抗流感病毒药物由反义寡核苷酸ASO-mvtRNA1、反义寡核苷酸ASO-mvtRNA2和反义寡核苷酸ASO-mvtRNA3组成。通过试验证明：用本发明专利技术的抗流感病毒药物干扰vtRNAs后，流感病毒的复制能力明显下降，说明流感病毒感染操纵了vtRNAs的表达，以利于自身的复制，因而降低vtRNAs的表达能够降低宿主对流感病毒感染的敏感性，本发明专利技术针对vtRNAs设计的反义寡核苷酸可以作为一种潜在的抗流感病毒药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物
，具体涉及一种靶向非编码RNA的反义寡核苷酸及其在 制备抗流感病毒药物中的应用。
技术介绍
流感病毒（influenzavirus)是21世纪影响人类健康和经济发展的重要疾病，随 着全球经济一体化的发展与各个国家之间交流的日益频繁，流感病毒对各个国家乃至全球 经济产生越来越大的负面影响。历史上发生过3次流感大流行，其中1918年爆发的西班牙 大流感导致5000万人死亡，1957年爆发的亚洲流感导致200万人死亡，1968年爆发的香港 流感导致100万人死。2009年4月在美国加利福尼亚州和墨西哥出现了一种新型甲型HlNl 流感病毒，该病毒通过人传人传播在全球范围迅速蔓延，并导致了进入21世纪以来的首次 流感大流行。此外，每年冬春季多发的季节性流感，不时而来的新亚型流感病毒以及禽流感 病毒严重威胁着人类的健康和畜牧业的发展。 流感病毒属于RNA病毒，其复制过程中病毒的RNA聚合酶不具备校对功能 (3' 一5'外切酶活性），而且不同株流感病毒间在中间宿主体内可以发生基因重排，所以流 感病毒可持续不断地发生变异，同时随着抗流感病毒药物的选择性压力，耐药毒株随之出 现并传播流行。目前全世界每年有25-50万人因流感病毒死亡，至今，人类尚未找到一条控 制流感病毒感染与传播的有效途径。鉴于此，研宄流感病毒与宿主的关系并探寻广谱、有效 的药物作用靶点显得格外至关重要。 流感病毒感染涉及病毒与宿主的相互作用，一方面宿主利用自身防御系统抵抗病 毒的入侵，另一方面病毒设法绕过宿主的防御屏障，并劫持宿主的细胞机器来完成自己的 感染和复制过程。在这一过程中，大量宿主因子参与其中。非编码RNA(ncRNA)作为新型宿 主因子，参与了流感病毒的复制及宿主抗病毒反应的调控，但迄今为止，人们对其功能及机 制所知甚少。vtRNA是一类存在于vault核糖核蛋白复合体（vaultribonucleoprotein particles，vaults)中的非编码RNA，vault核糖核蛋白复合体作为一种核糖核蛋白复合 物，包含96个主要穹窿体蛋白（majorvaultproteins，MVP)，两个次要穹窿体蛋白（minor vaultproteins，分别为VPARP和TEPl)，此外还含有6条或以上的vtRNAs。研宄发现敲除 VtRNAs并没有改变vault复合物桶状的经典结构，因而VtRNAs在vault复合体中很可能是 作为一种非结构成分存在，进一步研宄发现95%以上的VtRNAs在细胞质中以游离状态存 在。 迄今为止，人类细胞中有四个有转录产物的家族成员：vtRNAl-1、vtRNAl-2、 vtRNAl-3 和vtRNA2-l(也称作nc886)，它们由RNA聚合酶III(RNApolymeraseIII，Pol III)催化合成，其序列中的第2型内部启动子元件boxA和boxB高度保守。在小鼠、大鼠和 牛蛙等物种中都存在相应的vtRNAs。 由于vaults在多种耐药肿瘤细胞系中高表达并具有高度的进化保守性，近来人 们开始关注vaults的功能机制。然而，相关研宄主要集中在主要穹窿体蛋白上，对vault RNAs的功能研宄还相对匮乏。2009年，Persson等人报道了vtRNAl-1可以通过DICER机 制产生小穹窿体RNA(smallvaultRNA,svRNA)，其中有一条svRNAb以类似于miRNA的作 用机制来下调CYP3A4基因（一种在药物代谢中需要的酶）的表达。最近，研宄人员发现 VtRNAs在y疱瘆病毒感染的宿主细胞中大量表达，这意味着VtRNAs很可能参与了宿主与 病毒的互作。有意思的是，近几年vtRNA2-l被陆续报道作为一个新发现的肿瘤抑癌基因， 研宄发现它在很多的肿瘤中发挥作用，而这种抑癌作用是通过抑制PKR的活性来实现的。 但VtRNAs在流感病毒感染中的功能以及作用机理还尚未见报道。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是如何预防和/或治疗流感病毒。 为了解决上述技术问题，本专利技术首先提供了抑制vaultRNA表达的物质的新用途。 本专利技术提供了抑制vaultRNA表达的物质在制备具有如下⑴-⑷中至少一种功 能的产品中的应用： ⑴预防和/或治疗流感病毒； (2)抑制流感病毒的复制； (3)降低流感病毒感染后动物肺脏的充血程度； (4)降低流感病毒感染后动物肺脏的病毒载量。 上述应用中，所述抑制vaultRNA表达的物质为如下1)或2): 1)组合物； 2)含有1)所述组合物的试剂盒； 所述组合物由AS〇-mvtRNAl、AS0_mvtRNA2和AS0_mvtRNA3组成；或所述组合物由 AS〇-mvtRNAl溶液、AS0_mvtRNA2 溶液和AS0_mvtRNA3 溶液组成； 所述ASO-mvtRNAl是序列表中序列1所示的单链RNA分子； 所述AS0-mvtRNA2是序列表中序列2所示的单链RNA分子； 所述AS0_mvtRNA3是序列表中序列3所示的单链RNA分子。 上述应用中，所述AS〇-mvtRNAl、所述AS0_mvtRNA2和所述AS0_mvtRNA3的质量比 为 1 :1 :1 ;所述AS〇-mvtRNAl溶液中的ASO-mvtRNAl、所述AS0_mvtRNA2 溶液中的 AS0-mvtRNA2 和所述AS0-mvtRNA3 溶液中的AS0-mvtRNA3 的质量比为 1 :1 :1; 所述AS〇-mvtRNAl、所述AS0_mvtRNA2和所述AS0_mvtRNA3的全部核苷酸均进行硫 代磷酸修饰； 且所述ASO-mvtRNAl的第1-6位核苷酸和第20-25位核苷酸进行2' -O-Methyl修 饰； 所述AS0_mvtRNA2的第1-6位核苷酸和第20-25位碱基进行2' -O-Methyl修饰； 所述AS0_mvtRNA3的第1-5位核苷酸和第16-20位碱基进行2' -O-Methyl修饰。上述应用中，所述AS〇-mvtRNAl溶液、所述AS0_mvtRNA2溶液和所述AS0_mvtRNA3 溶液的溶剂为PBS缓冲液；所述PBS缓冲液的配方（IL):NaCl8. 18g;KC1 0. 20g; Na2HPO4 ? 12H20 3. 58g;KH2P040. 24g，pH7. 4。 上述应用中，所述vaultRNA来源于人或动物的细胞；所述细胞具体为A549细胞、 NIH/3T3细胞、LLC细胞或4T1细胞；所述动物具体为小鼠。上述应用中，所述vaultRNA的序列如GenebankNumberNR_027885. 1 所不。 为了解决上述技术问题，本专利技术又提供一种产品。 本专利技术提供的产品的活性成分为抑制vaultRNA表达的物质：所述产品具有如下 (1)-(4)中的至少一种功能： (1)预防和/或治疗流感病毒； (2)抑制流感病毒的复制； (3)降低流感病毒感染后动物肺脏的充血程度； (4)降低流感病毒感染后动物肺脏的病毒载量。 上述产品中，所述抑制vaultRNA表达的物质为如下1)或2): 1)组合物； 2)含有1)所述组合物的试剂盒； 所述组合物由AS〇-mvtRNAl、AS0_mvtRNA2和AS0_mvtRNA本文档来自技高网...
【技术保护点】
抑制vault RNA表达的物质在制备具有如下(1)‑(4)中至少一种功能的产品中的应用：(1)预防和/或治疗流感病毒；(2)抑制流感病毒的复制；(3)降低流感病毒感染后动物肺脏的充血程度；(4)降低流感病毒感染后动物肺脏的病毒载量。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：陈吉龙，陈玉海，李芳，张兆园，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：北京;11
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