【技术实现步骤摘要】
本申请属于医用配制品，具体涉及h1n1流感病毒冷适应疫苗骨架毒株cv2-pr8及其构建方法和应用。
技术介绍
1、流感病毒是一种分节段的单股负链的rna病毒，分为a、b、c和d四型，目前，人群中主要流行的流感病毒是a型的h1n1和h3n2亚型及b型的yamagata和victoria季节性流感病毒。截至目前，流感病毒已经造成了四次大流行，分别是1918年的h1n1亚型、1957的h2n2亚型、1968年的h3n2亚型以及2009年的h1n1亚型流感，每次都给全世界人民的生命健康带来巨大的危害。自流感出现以来，全球每年都有季节性流感的流行和发生，给社会带来了严重的疾病负担。
2、流感疫苗是目前预防流感病毒感染和流行最有效的途径，流感疫苗主要有灭活流感疫苗和减毒活疫苗等几种类型。灭活疫苗是我们目前使用较多的疫苗，目前使用灭活流感疫苗株主要是鸡胚适应的a/puerto rico/8/1934(pr8)(h1n1)骨架毒株的内部6个基因片段，与who推荐的流行株的ha和na基因片段，通过重配而构建，该类疫苗主要通过诱导机体产生体液免疫来发挥作用，展现出保护时间短和交叉保护作用差的特点。
3、目前获批的甲型流感病毒的减毒活疫苗的主要供体骨架有两种，分别是a/leningrad/17/57h2n2 laiv(len laiv)和a/ann arbor/6/60h2n2(aa/60)，减毒活疫苗是由供体毒株的6个内部基因，与who推荐的流行病毒ha和na基因，通过重配而构建。减毒活疫苗主要通过喷鼻的方式进行接种，模仿了
4、但是目前有研究显示，已获批的减毒活疫苗的有效性出现了下降。这种免疫原性的下降很可能是使用的疫苗骨架毒株与当前流行的毒株差异较大所引发。h2n2亚型流感病毒早在人群中消失，当前流行的主要是h1n1和h3n2亚型流感病毒。此外，在减毒活疫苗的生产过程和接种减毒活疫苗的儿童中发现了疫苗毒株突变的现象，这种现象也对目前所使用的减毒活疫苗的安全性提出了疑问。种种现象提示，需要构建一个新的流感减毒活疫苗骨架。
技术实现思路
1、本专利技术要解决的技术问题是：如何制备冷适应的流感毒株，作为冷适应疫苗骨架毒株用于制备流感疫苗。
2、为解决上述技术问题，第一个方面本专利技术提供用于构建重组甲型流感病毒的生物材料，其特征在于：所述生物材料选自下述b1)-b7)中任一种：
3、b1)蛋白质组合物，所述蛋白质组合物包括pb2突变蛋白、pb1突变蛋白、pa突变蛋白、np突变蛋白、m1突变蛋白和m2突变蛋白，
4、所述pb2突变蛋白选自a1)或a2)：
5、a1)、氨基酸序列是seq id no.1的蛋白质；
6、a2)、在a1)的n端和/或c端连接标签得到的融合蛋白质；
7、所述pb1突变蛋白选自a3)或a4)：
8、a3)、氨基酸序列是seq id no.2的蛋白质；
9、a4)、在a3)的n端和/或c端连接标签得到的融合蛋白质；
10、所述pa突变蛋白选自a5)或a6)：
11、a5)、氨基酸序列是seq id no.3的蛋白质；
12、a6)、在a5)的n端和/或c端连接标签得到的融合蛋白质；
13、所述np突变蛋白选自a7)或a8)：
14、a7)、氨基酸序列是seq id no.4的蛋白质；
15、a8)、在a7)的n端和/或c端连接标签得到的融合蛋白质；
16、所述m1突变蛋白选自a9)或a10)：
17、a9)、氨基酸序列是seq id no.7的蛋白质；
18、a10)、在a11)的n端和/或c端连接标签得到的融合蛋白质；
19、所述m2突变蛋白选自a11)或a12)：
20、a11)、氨基酸序列是seq id no.8的蛋白质；
21、a12)、在a13)的n端和/或c端连接标签得到的融合蛋白质；
22、b2)、编码b1)所述蛋白质组合物的成套dna分子(dna分子组合物)，所述成套dna分子包括编码所述pb2突变蛋白的dna分子、编码所述pb1突变蛋白的dna分子、编码所述pa突变蛋白的dna分子、编码所述np突变蛋白的dna分子和编码所述m1突变蛋白和m2突变蛋白的dna分子，
23、b3)、成套载体(载体组合物)，包括下述b3a)、b3b)、b3c)、b3d)和b3e)，b3a)、含有编码所述pb2突变蛋白的dna分子的重组载体；
24、b3b)、含有编码所述pb1突变蛋白的dna分子的重组载体；
25、b3c)、含有编码所述pa突变蛋白的dna分子的重组载体；
26、b3d)、含有编码所述np突变蛋白的dna分子的重组载体；
27、b3e)、含有编码所述m1突变蛋白和m2突变蛋白的dna分子的重组载体；
28、b4)、含有b2)所述成套dna分子或b3)所述成套载体的微生物；
29、b5)、含有b2)所述成套dna分子或b3)所述成套载体的动物细胞系；
30、b6)、含有b2)所述成套dna分子或b3)所述成套载体的动物组织；
31、b7)、含有b2)所述成套dna分子或b3)所述成套载体的动物器官。
32、进一步地，所述的生物材料中，b1)所述的蛋白质组合物还包括甲型流感病毒的ha蛋白、na蛋白、ns1蛋白和ns2蛋白，
33、所述ns1蛋白选自a13)或a14)，ns2蛋白选自a15)或a16)：
34、a13)、氨基酸序列是seq id no.5的蛋白质；
35、a14)、在a13)的n端和/或c端连接标签得到的融合蛋白质；
36、a15)、氨基酸序列是seq id no.6的蛋白质；
37、a16)、在a15)的n端和/或c端连接标签得到的融合蛋白质；
38、所述ha蛋白选自a17)或a18)：
39、a17)、氨基酸序列是seq id no.9的蛋白质；
40、a18)、在a17)的n端和/或c端连接标签得到的融合蛋白质；
41、所述na蛋白选自a19)或a20)：
42、a19)、氨基酸序列是seq id no.9的蛋白质；
43、a20)、在a19)的n端和/或c端连接标签得到的融合蛋白质。
44、本专利技术中，所述蛋白标签(protein-tag)是指利用dna体外重组技术，与目的蛋白一起融合表达的一种多肽或者蛋白，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和/或纯化。所述蛋白标签可为flag蛋白标签、his蛋白标签、mbp蛋白标签、ha本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.用于构建重组甲型流感病毒的生物材料，其特征在于：所述生物材料选自下述B1)-B7)中任一种：
2.根据权利要求1所述的生物材料，其特征在于：
3.重组甲型流感病毒，其特征在于：所述重组甲型流感病毒表达或含有权利要求1中所述的蛋白质组合物。
4.根据权利要求3所述的重组甲型流感病毒，其特征在于：所述重组甲型流感病毒的基因组为单股负链、分节段的RNA，所述单股负链、分节段的RNA转录获得与所述单股负链、分节段的RNA互补的成套正链RNA，所述成套正链RNA包括PB2-RNA、PB1-RNA、PA-RNA、NP-RNA和M-RNA，
5.根据权利要求4所述的重组甲型流感病毒，其特征在于：
6.根据权利要求3-5中任一项所述的重组甲型流感病毒，其特征在于：所述重组甲型流感病毒的株号为CV2-A/PuertoRico/8/1934(PR8)(H1N1)，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC No.45374。
7.重组甲型流感病毒的构建方法，其特征在于：所述方法包括M1)或/和M2)，
8.权利要求1或2所述的生物材料或权利要求3-6中任一项所述的重组流感病毒在制备预防或/和治疗流感病毒的药物中的应用。
9.权利要求1或2所述的生物材料或权利要求3-6中任一项所述的重组流感病毒在制备流感疫苗中的应用。
10.流感疫苗，其特征在于：所述流感疫苗以权利要求3-6中任一项所述的重组流感病毒作为骨架毒株或者作为活性成分。
...【技术特征摘要】
1.用于构建重组甲型流感病毒的生物材料，其特征在于：所述生物材料选自下述b1)-b7)中任一种：
2.根据权利要求1所述的生物材料，其特征在于：
3.重组甲型流感病毒，其特征在于：所述重组甲型流感病毒表达或含有权利要求1中所述的蛋白质组合物。
4.根据权利要求3所述的重组甲型流感病毒，其特征在于：所述重组甲型流感病毒的基因组为单股负链、分节段的rna，所述单股负链、分节段的rna转录获得与所述单股负链、分节段的rna互补的成套正链rna，所述成套正链rna包括pb2-rna、pb1-rna、pa-rna、np-rna和m-rna，
5.根据权利要求4所述的重组甲型流感病毒，其特征在于：
6.根据权利要求3-5中任一...
【专利技术属性】
技术研发人员：毕玉海，杨静茹，孙举，张宁，杨婧，
申请(专利权)人：中国科学院微生物研究所，
类型：发明
国别省市：
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