【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及基因工程和蛋白质工程，具体涉及一种高比活木聚糖酶突变体及其应用。
技术介绍
1、木聚糖（xylan）是一种多聚五碳糖，是植物半纤维素的重要组分，它占植物碳水化合物总量的三分之一，在自然界中是继纤维素之后含量第二丰富的可再生物质资源。它存在于植物的细胞壁中以及几乎所有部位。
2、木聚糖酶是可将木聚糖降解成低聚糖或木糖的一类酶的总称。一个木聚糖分子的完全酶解需要几步酶促反应，作用于主链的有两种酶：β-1，4-木聚糖酶（l，4-β-d-xylanohydrolase: ec3.1.2.8）和β-木糖苷酶（1，4-β-d-xylanxylohydrolase:ec3.2.1.37）。一般而言，前者从主链内部作用于木糖苷键，将木聚糖分解成低聚糖，而后者则作用于低聚木糖的末端，释放出木糖。
3、许多微生物可产生木聚糖酶。木聚糖酶的生物化学性质的获得主要来自于细菌和真菌木聚糖酶的研究。细菌所产木聚糖酶可大体分为两类：高分子量的耐酸木聚糖酶，低分子量的耐碱木聚糖酶。但在真菌中却没有这种差别，不过，低分子量木聚糖酶的耐碱性却是共同的。
4、饲料中的木聚糖本身难以被单胃动物消化，同时结合大量的水，使采食动物消化道中食糜的体积增大、粘度增加、养分与消化道内源酶的作用降低，从而阻碍营养物质，尤其是脂肪和蛋白质的消化吸收，降低饲料的利用率。研究结果表明，饲料中如果添加木聚糖酶，就可显著降低阿拉伯木聚糖分子大小，将其分解成较小聚合度的低聚木糖，从而改善饲料性能，消除或降低因粘度增加而引起的抗营养作用。>
5、在葡萄酒和日本大麦烧酒的生产中，已经有了木聚糖酶的应用研究。日本研究人员将耐酸性木聚糖酶xy1c应用于日本大麦烧酒酿造中，结果发现该酶有助于提高发酵效率，增加酒精的产率。
6、木聚糖酶在造纸、食品、能源、饲料以及环境等领域的应用价值，已经得到了肯定，然而由于在天然材料中表达水平低、难以大规模生产、且产物难以纯化以及木聚糖的一些性质不能完全满足应用的要求。随着基因工程技术的发展，通过基因工程这一手段，利用生物反应器提高它的表达量并在分子水平上对木聚糖酶基因进行改造以解决一些木聚糖酶活性(如比酶活、抗逆性、ph值、热稳定性等)的缺陷已成为目前的研究热点。
7、因木聚糖酶本身的比活性能愈高，其生产成本就愈低，酶的价格也就愈低，将更有利于促进其被广泛的应用。因此，筛选出高比活力的木聚糖酶，也是目前本领域研究人员正在努力的目标。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种高比活木聚糖酶突变体。所述突变体的比活力比野生型得到显著提高，有利于其在工业领域的广泛应用。
2、为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：
3、本专利技术涉及一种木聚糖酶突变体，其包含与seq id no:1具有至少90%同一性的氨基酸序列，且与seq id no:1相比在选自下组中的至少一个位置上包含氨基酸的取代：69，85，88，108，112，131，149，154，160，167，178，179，185，186，190。
4、在本专利技术的一些实施例中，所述突变体的氨基酸序列与seq id no:1相比具有至少91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，或至少99%的同一性。
5、在一些更具体的实施例中，所述突变体的氨基酸序列与seq id no:1相比具有至少99.1%，99.2%，99.3%，99.4%，99.5%，99.6%，99.7%，99.8%，或至少99.9%的同一性。
6、在本专利技术的一些实施例中，所述突变体包含下组中至少一个氨基酸的取代：t69a/h，v85d，n88i/m/v/f/h/y，v108l/m/t/h/i，i112v，h131l/i/w/y/f，t149v/i/k/l/m/n/r/s/w/y，d154m/q/a/i/l/n/s/t/w，n160k/i/t，q167t，s178a，h179d/m/k/l/q/r/s/w/e，e185k，k186d，t190d/s。
7、在本专利技术的一些实施例中，所述突变体包含的取代或取代的组合选自下述取代和取代的组合：t69a；t69h；v85d；n88i；n88m；n88v；n88f；n88h；n88y；v108l；v108m；v108t；v108h；v108i；i112v；h131l；h131i；h131w；h131y；h131f；t149v；t149i；t149k；t149l；t149m；t149n；t149r；t149s；t149w；t149y；d154m；d154q；d154a；d154i；d154l；d154n；d154s；d154t；d154w；n160k；n160i；n160t；q167t；s178a；h179d；h179m；h179k；h179l；h179q；h179r；h179s；h179w；h179e；e185k；k186d；t190d；t190s；
8、n88m/h131f；
9、n88m/h131y；
10、n88m/d154l；
11、n88i/d154l；
12、v108i/e185k；
13、v108i/k186d；
14、v108i/h179l；
15、v108i/e185m；
16、v108i/h179t；
17、v108i/h179q；
18、v108i/h179r；
19、v108i/h179s；
20、v108i/h131y；
21、h131f/h179l；
22、h131f/h179q；
23、h131f/d154l；
24、h131f/d154s；
25、h131f/d154i；
26、h131f/d154w；
27、t149v/h179r；
28、t149v/h179q；
29、t149i/h179l；
30、d154m/n160i；
31、d154m/n160t；
32、d154w/n160t；
33、d154w/n160i；
34、n160k/h179q；
35、n160k/h179r；
36、n160k/h179l；
37、n160k/h179s；
38、e185k/k186d ；
39、n88m/h131f/t190s；
40、n88m/h131y/h179l；
41、n88i/d154l/e185k；
42、n88m/h131f/h179l；
43、v108i/e185k/k186d；
44、v108i/h179l/k186d；
45、v108本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种木聚糖酶突变体，其特征在于，所述突变体包含与SEQ ID NO:1具有至少90%同一性的氨基酸序列，且与SEQ ID NO:1相比在选自下组中的至少一个位置上包含氨基酸的取代：69，85，88，108，112，131，149，154，160，167，178，179，185，186，190。
2.如权利要求1所述的木聚糖酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列与SEQID NO:1相比具有至少91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，或至少99%的同一性。
3.如权利要求2所述的木聚糖酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列与SEQID NO:1相比具有至少99.1%，99.2%，99.3%，99.4%，99.5%，99.6%，99.7%，99.8%，或至少99.9%的同一性。
4.如权利要求1所述的木聚糖酶突变体，其特征在于，所述突变体包含下组中至少一个氨基酸的取代：T69A/H，V85D，N88I/M/V/F/H/Y，V108L/M/T/H/I，I112V，H131L/I/W/Y/F，T149V/I/K/
5.如权利要求4所述的木聚糖酶突变体，其特征在于，所述突变体包含下组中至少一个氨基酸的取代组合：T69A；T69H；V85D；N88I；N88M；N88V；N88F；N88H；N88Y；V108L；V108M；V108T；V108H；V108I；I112V；H131L；H131I；H131W；H131Y；H131F；T149V；T149I；T149K；T149L；T149M；T149N；T149R；T149S；T149W；T149Y；D154M；D154Q；D154A；D154I；D154L；D154N；D154S；D154T；D154W；N160K；N160I；N160T；Q167T；S178A；H179D；H179M；H179K；H179L；H179Q；H179R；H179S；H179W；H179E；E185K；K186D；T190D；T190S；
6.编码权利要求1-5任一所述木聚糖酶突变体的DNA分子。
7.包含权利要求6所述DNA分子的重组表达质粒。
8.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞包含权利要求7所述的重组表达质粒；所述的宿主细胞为非植物细胞。
9.如权利要求8所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞为毕赤酵母（Pichia pastoris）或里氏木霉（Trichoderma reesei）。
10.权利要求1-5任一所述木聚糖酶突变体在饲料领域中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种木聚糖酶突变体，其特征在于，所述突变体包含与seq id no:1具有至少90%同一性的氨基酸序列，且与seq id no:1相比在选自下组中的至少一个位置上包含氨基酸的取代：69，85，88，108，112，131，149，154，160，167，178，179，185，186，190。
2.如权利要求1所述的木聚糖酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列与seqid no:1相比具有至少91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，或至少99%的同一性。
3.如权利要求2所述的木聚糖酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列与seqid no:1相比具有至少99.1%，99.2%，99.3%，99.4%，99.5%，99.6%，99.7%，99.8%，或至少99.9%的同一性。
4.如权利要求1所述的木聚糖酶突变体，其特征在于，所述突变体包含下组中至少一个氨基酸的取代：t69a/h，v85d，n88i/m/v/f/h/y，v108l/m/t/h/i，i112v，h131l/i/w/y/f，t149v/i/k/l/m/n/r/s/w/y，d154m/q/a/i/l/n/s/t/w，n160k/i/t，q167t，s178a，h179d/m/k/l/q/r/s/w/e，e185k，k186d，t190d/s。
5.如权利要求4所述的木聚...
【专利技术属性】
技术研发人员：吴秀秀，李馨培，陈刚，
申请(专利权)人：青岛蔚蓝生物集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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