【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及蛋白质工程改造，具体涉及一种比活力提高的碱性蛋白酶突变体及其应用。
技术介绍
1、蛋白酶是能够水解蛋白质中肽键结构，产生氨基酸或多肽的一类酶的总称，是一种重要的工业酶，在全球酶总产值中约占60%左右。碱性蛋白酶是在碱性条件下水解蛋白质肽键的酶类，最适ph一般为9-11，在洗涤、食品加工、皮革和纺织制造等工业中被广泛应用和研究。碱性蛋白酶是工业酶市场上应用量最大而且利润高的品种，随着对环境保护的日益重视和“双碳”目标的实现，微生物来源碱性蛋白酶在洗涤剂行业广泛应用是减少化学洗涤剂的不二选择。
2、能够产生碱性蛋白酶的微生物种类繁多，但是野生型的菌株碱性蛋白酶产量往往不能满足工业化生产的需求。因此，通常利用遗传学的原理和技术，对野生型的菌株进行遗传改造，以提高蛋白酶的产量，获得适用于工业化生产的工程菌株。常用的微生物遗传育种方法包括诱变育种、原生质体融合、基因工程和蛋白质工程育种等。传统诱变是早期碱性蛋白酶菌种选育常用的一种方法，借助物理手段或化学试剂处理微生物细胞，改变菌株的遗传性状从而获得高产菌株。1963年novo发酵生产首个洗涤用碱性蛋白酶，1972年推出了我们所熟知的savinase。随着dna重组技术的应用，1985年，jacobs等首次公开报道成功克隆芽孢杆菌的碱性蛋白酶基因，开启利用基因工程技术构建碱性蛋白酶高产工程菌的新研究阶段。过去几十年的研究中，蛋白质工程也已经成为提高碱性蛋白酶酶活和改善酶学性能的重要技术手段。jaouadi等发现leu31、thr33、asn99、phe159 和
3、目前市场上在售的碱性蛋白酶产品多数是野生型蛋白酶的蛋白质工程突变体。我国碱性蛋白酶的市场主要被国际巨头诺维信和杜邦公司垄断，主要原因是国内碱性蛋白酶生产菌种的生产能力较差、酶的发酵活力低、酶比活低以及洗涤应用效果差。因此，高活力、高稳定性、高效价的碱性蛋白酶的蛋白质工程改造和筛选及其高产工程菌的构建成为国内外的研究热点。
技术实现思路
1、本专利技术的目的是提供一种高比活碱性蛋白酶突变体。所述突变体的比活力比野生型有显著提高，从而有利于碱性蛋白酶在洗涤领域的广泛应用。
2、本专利技术涉及一种碱性蛋白酶突变体，其包含与seq id no:1具有至少90%同一性的氨基酸序列，且与seq id no:1相比在选自下组中的至少一个位置上包含氨基酸的取代：30，77，101，138，183，197，219，226。
3、在本专利技术的一些实施例中，所述突变体的氨基酸序列与seq id no:1相比具有至少91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，或至少99%的同一性。
4、在一些更具体的实施例中，所述突变体的氨基酸序列与seq id no:1相比具有至少99.1%，99.2%，99.3%，99.4%，99.5%，99.6%，99.7%，99.8%，或至少99.9%的同一性。
5、在本专利技术的一些实施例中，所述突变体包含下组中至少一个氨基酸的取代：v30i，i77l/v，s101g，n138q/k，f183d，v197i/l，p219w/e，a226g/t。
6、在本专利技术的一些实施例中，所述突变体包含的取代或取代的组合选自下述取代和取代的组合：v30i；i77l；i77v；s101g；n138q；n138k；f183d；v197i；v197l；p219w；p219e；a226g；a226t；
7、v30i/i77l；
8、v30i/n138q；
9、v30i/f183d；
10、v30i/v197i；
11、v30i/ p219w；
12、v30i/a226g；
13、v30i/i77l/n138q；
14、v30i/i77l/p219w；
15、v30i/i77l/a226g；
16、v30i/n138q/f183d；
17、v30i/n138q/v197i；
18、v30i/n138q/p219w；
19、v30i/n138q/a226g；
20、v30i/v197i/p219w；
21、v30i/v197i/a226g；
22、v30i/ p219w/a226g；
23、v30i/i77l/n138q/f183d；
24、v30i/i77l/n138q/v197i；
25、v30i/i77l/n138q/p219w；
26、v30i/i77l/n138q/a226g；
27、v30i/n138q/p219w/a226g；
28、v30i/v197i/p219w/a226g；
29、v30i/i77l/n138q/f183d/v197i；
30、v30i/i77l/n138q/f183d/p219w；
31、v30i/i77l/n138q/f183d/a226g；
32、v30i/n138q/f183d/v197i/p219w；
33、v30i/i77l/n138q/f183d/v197i/p219w；
34、v30i/i77l/n138q/f183d/v197i/a226g；
35、v30i/n138q/f183d/v197i/p219w/a226g；
36、v30i/s101g/n138q/f183d/v197i/a226g；
37、v30i/s101g/f183d/v197i/p219w/a226g；
38、v30i/i77l/n138q/f183d/v197i/p219w/a226g；
39、v30i/i77l/s101g/f183d/v197i/p219w/a226g；
40、i77l/n138q；
41、i77l/f183d；
42、i77l/v197i/；
43、i77l/p219w；
44、i77v/a226g；
45、i77l/n138q/f183d；
46、i77l/n13本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种碱性蛋白酶突变体，其特征在于，所述突变体包含与SEQ ID NO:1具有至少95%同一性的氨基酸序列，且与SEQ ID NO:1相比在选自下组中的至少一个位置上包含氨基酸的取代：30，77，101，138，183，197，219，226。
2.如权利要求1所述的碱性蛋白酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列与SEQ ID NO:1相比具有至少91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，或至少99%的同一性。
3.如权利要求2所述的碱性蛋白酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列与SEQ ID NO:1相比具有至少99.1%，99.2%，99.3%，99.4%，99.5%，99.6%，99.7%，99.8%，或至少99.9%的同一性。
4.如权利要求1所述的碱性蛋白酶突变体，其特征在于，所述突变体包含下组中至少一个氨基酸的取代：V30I，I77L/V，S101G，N138Q/K，F183D，V197I/L，P219W/E，A226G/T。
5.如权利要求4所述的碱性蛋白酶突变体，其特征在于，所述突
6.编码权利要求1-5任一所述碱性蛋白酶突变体的DNA分子。
7.包含权利要求6所述DNA分子的重组表达质粒。
8.一种宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞包含权利要求7所述的重组表达质粒；所述的宿主细胞为非植物细胞。
9.如权利要求8所述的宿主细胞，其特征在于，所述的宿主细胞为毕赤酵母（Pichia pastoris）或里氏木霉（Trichoderma reesei）。
10.权利要求1-5任一所述碱性蛋白酶突变体在洗涤领域中的应用。
...【技术特征摘要】
1.一种碱性蛋白酶突变体，其特征在于，所述突变体包含与seq id no:1具有至少95%同一性的氨基酸序列，且与seq id no:1相比在选自下组中的至少一个位置上包含氨基酸的取代：30，77，101，138，183，197，219，226。
2.如权利要求1所述的碱性蛋白酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列与seq id no:1相比具有至少91%，92%，93%，94%，95%，96%，97%，98%，或至少99%的同一性。
3.如权利要求2所述的碱性蛋白酶突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列与seq id no:1相比具有至少99.1%，99.2%，99.3%，99.4%，99.5%，99.6%，99.7%，99.8%，或至少99.9%的同一性。
4.如权利要求1所述的碱性蛋白酶突变体，其特征在于，所述突变体包含下组中至少一个氨基酸的取代：v30i，i77l/v，s101g...
【专利技术属性】
技术研发人员：张霞，许伟，曹兴南，李玉强，鲍锴，
申请(专利权)人：青岛蔚蓝生物集团有限公司，
类型：发明
国别省市：
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