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用于生物催化合成2’-岩藻糖基乳糖的特异性α-1,2-岩藻糖基转移酶制造技术

技术编号:41183363 阅读:4 留言:0更新日期:2024-05-07 22:16
本发明专利技术涉及一种酶,特征在于其是一种融合蛋白,包含(i)岩藻糖基转移酶的N末端结构域,及包含(ii)SEQ ID NO:5的至少第155至286位氨基酸或与其至少80%相同的氨基酸序列作为C末端结构域,并且具有岩藻糖基转移酶活性,所述N末端结构域和C末端结构域来源于两种不同的岩藻糖基转移酶。本发明专利技术还涉及一种产生2’‑岩藻糖基乳糖的方法,其特征在于使乳糖在存在至少一种选自葡萄糖、甘油、蔗糖、岩藻糖及GDP‑、ADP‑、CDP‑和TDP‑岩藻糖的物质的反应混合物中与这种酶反应。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】


技术介绍


技术实现思路

【技术保护点】

1.一种酶,特征在于其是一种融合蛋白,

2.权利要求1的酶,特征在于所述融合蛋白的N末端和C末端结构域的氨基酸序列是微生物序列或其同源序列。

3.权利要求1和2中一项或多项的酶,特征在于所述融合蛋白的N末端和C末端结构域的氨基酸序列是螺杆菌属(Helicobacter)的序列或其同源序列。

4.权利要求1至3中一项或多项的酶,特征在于所述N末端结构域包含至少SEQ IDNo:7的第1至129位氨基酸或与其至少80%相同的氨基酸序列。

5.根据权利要求1至4中一项或多项的酶,特征在于所述融合蛋白的N末端结构域的氨基酸序列是SEQ ID No:7的第1至148位氨基酸或与其至少80%相同的氨基酸序列。

6.权利要求1至5中一项或多项的酶,特征在于所述C末端结构域包含至少SEQ IDNo:5的第155至286位氨基酸或与其至少80%相同的氨基酸序列。

7.权利要求1至6中一项或多项的酶,特征在于所述融合蛋白的C末端结构域的氨基酸序列是SEQ ID No:5的第142至286位氨基酸或与其至少80%相同的氨基酸序列。

8.权利要求1至7中一项或多项的酶,特征在于所述融合蛋白是SEQ ID No:9、SEQ IDNo:13、SEQ ID No:15或与其至少80%相同的氨基酸序列。

9.一种生产2’-岩藻糖基乳糖的方法,特征在于使乳糖在存在至少一种选自葡萄糖、甘油、蔗糖、岩藻糖和GDP-、ADP-、CDP-和TDP-岩藻糖的物质的反应混合物中与至少一种权利要求1至8中一项或多项的酶反应。

10.权利要求9的方法,特征在于所述乳糖经历完全转化而不形成超过5%的DFL。

11.权利要求9和10中一项或多项的方法,特征在于所述反应混合物是重组表达所述酶的微生物的培养物。

12.权利要求11的方法,特征在于从培养物上清中分离2’-岩藻糖基乳糖。

13.权利要求9至12中一项或多项的方法,特征在于由所述融合蛋白形成的2’-岩藻糖基乳糖比由其一个结构域包含在所述融合蛋白中的未融合野生型酶形成的2’-岩藻糖基乳糖多至少4%。

14.权利要求9至13中一项或多项的方法,特征在于在所述反应中形成至少47g/l的2’-岩藻糖基乳糖。

15.权利要求9至14中一项或多项的方法,特征在于在所述反应中形成小于1g/l、更优选0g/l的二岩藻糖基乳糖。

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【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】

1.一种酶,特征在于其是一种融合蛋白,

2.权利要求1的酶,特征在于所述融合蛋白的n末端和c末端结构域的氨基酸序列是微生物序列或其同源序列。

3.权利要求1和2中一项或多项的酶,特征在于所述融合蛋白的n末端和c末端结构域的氨基酸序列是螺杆菌属(helicobacter)的序列或其同源序列。

4.权利要求1至3中一项或多项的酶,特征在于所述n末端结构域包含至少seq idno:7的第1至129位氨基酸或与其至少80%相同的氨基酸序列。

5.根据权利要求1至4中一项或多项的酶,特征在于所述融合蛋白的n末端结构域的氨基酸序列是seq id no:7的第1至148位氨基酸或与其至少80%相同的氨基酸序列。

6.权利要求1至5中一项或多项的酶,特征在于所述c末端结构域包含至少seq idno:5的第155至286位氨基酸或与其至少80%相同的氨基酸序列。

7.权利要求1至6中一项或多项的酶,特征在于所述融合蛋白的c末端结构域的氨基酸序列是seq id no:5的第142至286位氨基酸或与其至少80%相同的氨基酸序列。

8.权利要求1至7中一项或多项的酶,特征在于所述融...

【专利技术属性】
技术研发人员:J·马丁C·博恩霍德
申请(专利权)人:瓦克化学股份公司
类型:发明
国别省市:

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