【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于农业生物，具体涉及一种鉴定‘紫金1号’水芹的ssr标记组合及其扩增产物和应用。
技术介绍
1、水芹(oenanthejavanica(bi.)dc.)为伞形科水芹属多年生传统蔬菜，在我国有2000多年的栽培历史，兼具丰富的营养价值和良好的药用保健功能。目前水芹在我国中部和南部栽培较多，以江苏、浙江、江西、广东、云南和贵州栽培面积较大。同时，水芹因其生物量大、养分需求量高、耐低温、多次收割、易于管理等特点，被作为浮床植物的优势种广泛应用于污染水体的生物修复。
2、畜禽养殖废水依然是造成农业面源污染以及水环境污染的重要方面。利用水芹浮床消纳畜禽养殖废水中氮磷等营养盐，修复水生态系统，处理方式简单，成本低廉，占用土地少、综合生产率高。然而，畜禽养殖废水具有氨氮含量高的特征。如果水芹品种耐氨性不足，则不适于净化畜禽养殖废水，江苏省中国科学院植物研究所选育的‘紫金1号’水芹全年可种植、四季常绿、耐氨性强、抗寒、耐热，抗病虫害能力强，适合在自然水体无土栽培，适宜生长温度范围优选为5℃～35℃，可在-20℃～42℃之间存活，现已获江苏省非主要农作物品种认定。
3、不同水芹品种耐氨性差异很大，如利用其他非耐氨水芹品种，直接用于污水处理工程可能造成大量死苗，不但不能净化水体，死苗还会造成二次污染，加剧水体污染。而不同水芹品种外形特征十分相似，外部形态特征易受环境影响，难以直接通过外形辨别‘紫金1号’的真实性。
技术实现思路
1、本专利技术的目的在于克服现有技术的
2、本专利技术提供了一种鉴定‘紫金1号’水芹的ssr标记组合，所述ssr标记组合包括ssr01、ssr02、ssr03和ssr04；
3、所述ssr01的重复单元为tc，重复次数为7；
4、所述ssr02的重复单元为tc，重复次数为14；
5、所述ssr03的重复单元为atac，重复次数为5；
6、所述ssr04的重复单元为cag，重复次数为6。
7、本专利技术还提供了一组用于扩增上述技术方案所述ssr标记组合的引物组合，包括assr01、assr02、assr03和assr04；
8、所述assr01包括assr01-f和assr01-r，所述assr01-f的核苷酸序列如seq idno.1所示，所述assr01-r的核苷酸序列如seq id no.2所示；
9、所述assr02由assr02-f和assr02-r组成，所述assr02-f的核苷酸序列如seq idno.3所示，所述assr02-r的核苷酸序列如seq id no.4所示；
10、所述assr03由assr03-f和assr03-r组成，所述assr03-f的核苷酸序列如seq idno.5所示，所述assr03-r的核苷酸序列如seq id no.6所示；
11、所述assr04由assr04-f和assr04-r组成，所述assr04-f的核苷酸序列如seq idno.7所示，所述assr04-r的核苷酸序列如seq id no.8所示。
12、本专利技术还提供了上述技术方案所述的ssr标记组合或上述技术方案所述的引物组合在鉴定‘紫金1号’水芹中的应用。
13、本专利技术还提供了一种‘紫金1号’水芹的鉴定方法，包括以下步骤：
14、利用上述技术方案所述的引物组合中的assr01对待检测样品的基因组dna进行扩增，得到第一扩增产物；
15、利用上述技术方案所述的引物组合中的assr02对待检测样品的基因组dna进行扩增，得到第二扩增产物；
16、利用上述技术方案所述的引物组合中的assr03对待检测样品的基因组dna进行扩增，得到第三扩增产物；
17、利用上述技术方案所述的引物组合中的assr04对待检测样品的基因组dna进行扩增，得到第四扩增产物；
18、若所述第一扩增产物的大小为210bp，并且，所述第二扩增产物的大小为200bp和230bp，并且，所述第三扩增产物的大小为200bp和205bp，并且，所述第四扩增产物的大小为250bp和280bp，则所述待检测样品为‘紫金1号’。
19、优选的，所述扩增的体系包括：100μg/μl的基因组dna模板2μl，2μm上游引物和下游引物的混合物1μl，2×tsingke mastermix 5μl，ddh2o 2μl；所述混合物中上游引物和下游引物的摩尔比为1：1。
20、优选的，所述扩增的反应条件包括：95℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸10min。
21、有益效果
22、本专利技术通过检测所述ssr标记组合，直接对水芹品种的基因组dna序列进行鉴定，避免了依据外部形态鉴定的不确定性。经实施例验证，利用本专利技术所提供的ssr标记组合，仅需3～4小时即可特异高效地鉴别‘紫金1号’，大大缩短了鉴定时长，避免了长时间培养鉴定实验延误污水处理进程；为水芹品种‘紫金1号’提供了鉴别方法和科学的技术保障。
本文档来自技高网...【技术保护点】
1.一种鉴定‘紫金1号’水芹的SSR标记组合，其特征在于，所述SSR标记组合包括SSR01、SSR02、SSR03和SSR04；
2.一组用于扩增权利要求1所述SSR标记组合的引物组合，其特征在于，包括ASSR01、ASSR02、ASSR03和ASSR04；
3.权利要求1所述的SSR标记组合或权利要求2所述的引物组合在鉴定‘紫金1号’水芹中的应用。
4.一种‘紫金1号’水芹的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
5.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，所述扩增的体系包括：100μg/μL的基因组DNA模板2μL，2μM上游引物和下游引物的混合物1μL，2×TSINGKEMasterMix5μL，ddH2O2μL；所述混合物中上游引物和下游引物的摩尔比为1：1。
6.根据权利要求4所述的鉴定方法，其特征在于，所述扩增的反应条件包括：95℃预变性5min；94℃变性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s，35个循环；72℃延伸10min。
【技术特征摘要】
1.一种鉴定‘紫金1号’水芹的ssr标记组合，其特征在于，所述ssr标记组合包括ssr01、ssr02、ssr03和ssr04；
2.一组用于扩增权利要求1所述ssr标记组合的引物组合，其特征在于，包括assr01、assr02、assr03和assr04；
3.权利要求1所述的ssr标记组合或权利要求2所述的引物组合在鉴定‘紫金1号’水芹中的应用。
4.一种‘紫金1号’水芹的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：
...【专利技术属性】
技术研发人员：孙林鹤，常雅军，姚东瑞，刘吉祥，姚路路，杜凤凤，王巍，
申请(专利权)人：江苏省中国科学院植物研究所，
类型：发明
国别省市：
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。